冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度FFA法的建立及验证

目的:建立并验证荧光灶法(FFA)检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度的可行性。方法:采用FFA分别检测冻干鼻喷流感减毒活疫苗H1N1型、H3N2型、B型单一病毒收获液病毒滴度,并验证该方法的专属性、准确度、精密度、线性和耐用性。结果:该方法专属性良好;准确度回收率均为80%~115%,病毒滴度的试验内及试验间精密度RSD值均<10%;3个型别样品稀释倍数对数与病毒滴度呈线性关系,相关系数R2均>0.98;不同孵育温度的病毒滴度RSD值均<10%,耐用性良好。结论:建立的FFA具有良好的专属性、准确度、精密度、线性及耐用性,可用于冻干鼻喷流感减毒活疫苗病毒滴度检测。

H9N2亚型禽流感病毒NS1基因缺失减毒活疫苗候选株对蛋鸡的免疫效力评价

为评价H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NS1基因缺失减毒活疫苗候选株r TX-NS1-128对蛋鸡的免疫效力,本研究对蛋鸡H9N2亚型AIV母源抗体半衰期、疫苗适宜免疫时间、抗体免疫保护临界值以及免疫鸡抗体消长规律等进行研究。结果显示,雏鸡H9亚型AIV母源血凝抑制(HI)抗体半衰期为3.29 d。雏鸡母源抗体水平对疫苗的免疫效果有较大的影响,以母源HI抗体滴度约为4 log2时免疫为宜。少数HI抗体滴度为4 log2~6 log2的免疫鸡攻毒后可在5 d或3 d内从咽喉短暂排毒,HI抗体滴度为4 log2、5 log2、6 log2和≥7 log2时攻毒保护率分别为80%、90%、90%和100%,建议该疫苗的抗体免疫保护临界值为5 log2。鸡一次免疫后平均HI抗体滴度在5 log2以上可持续9周左右。本研究为H9N2亚型禽流感新型减毒活疫苗的开发和应用提供依据。

流感减毒活疫苗效力试验检测新方法的建立

目的建立基于NP蛋白检测的流感减毒活疫苗病毒滴度检测方法,并进行初步应用。方法对病毒接种方式、流感病毒感染MDCK细胞培养时间、一抗和酶标二抗的稀释度、封闭液等ELISA反应条件进行筛选优化。采用建立的方法检测3批流感减毒活疫苗原液和1批疫苗成品,并与鸡胚培养法检测结果进行比较。结果选择直接接种法作为接种方式,病毒感染细胞后培养48 h进行NP蛋白表达的检测; ELISA检测条件一抗稀释度为1∶4 000,酶标二抗稀释度为1∶4 000,2%牛血清白蛋白封闭2 h,检测结果 P/N值最大。用建立的方法检测流感减毒活疫苗原液及疫苗成品效力,与鸡胚培养法检测结果差异无统计学意义(P>0.05),具有较好的一致性。结论建立了基于NP蛋白检测的流感减毒活疫苗效力试验方法,可用于生产过程中流感减毒活疫苗原液和成品的检定。

反向遗传学技术在流感病毒减毒活疫苗研究中的应用进展

流感病毒是一种威胁人类健康的重要病原体,具有季节流行性,可以引起暴发性感染,对公共卫生及经济带来打击。接种疫苗是目前保护人类免受流感病毒感染的最佳医疗干预措施。安全性与有效性的平衡是疫苗研发追求的目标,减毒活疫苗则能够实现两者平衡,有望在预防免疫中发挥巨大作用。随着反向遗传学技术的成熟,其在流感病毒减毒活疫苗的研发中也发挥着越来越大的作用,使减毒病毒株的构建更加简便,减毒方法更加多元。本文主要就反向遗传学技术在流感病毒减毒活疫苗研发中的应用进行简要综述。

流感冷适应减毒活疫苗的研究进展

目前所使用的流感疫苗主要是三联灭活疫苗,其安全性和有效性虽好,但生产过程复杂,生产周期长。相对于传统的灭活疫苗,冷适应减毒活疫苗有很多优点,尤其是用哺乳动物细胞培养的病毒制备冷适应减毒活疫苗已成为流感疫苗的主要发展方向。本文主要介绍流感冷适应减毒活疫苗的研究历史以及今后的发展方向。

人3型副流感病毒减毒活疫苗的研究进展

人副流感病毒(human parainfluenza viruses,HPIVs)是引起婴幼儿支气管炎和肺炎的主要病原体,人3型副流感病毒(human parainfluenza viruses type 3,HPIV-3)是HPIVs中最主要的型别。目前尚无针对HPIVs的上市疫苗和有效的抗病毒药物,研发减毒活疫苗是目前开发HPIVs疫苗的方向。本文主要对HPIV-3减毒活疫苗的研究进展作一综述。

流感H7N3减毒活疫苗有抗H7N9的潜力

由于最近人群中出现了新禽流感病毒A（H7N9），很多人以及政府在用相关株制成H7N9疫苗前，都在寻求能提供抗新病毒交叉保护作用的H7流感疫苗。这里，作者科学地证明，现有的H7N3流感减毒活疫苗（LAIV）有抗H7N9病毒的保护作用，因为在其血凝索中存在保守的免疫表位。作者利用免疫表位数据库分析资源预示了H7N3血凝索分子中的B细胞和CTL表位，并评估了其与H7N9新病毒中的一致性，分别接近70％和60％。另外，作者试验了参与H7N3LAIVI期临床试验的志愿者的血清样品，观察是否存在抗H7N9的血凝抑制作用和中和抗体，发现44．8％的疫苗接种者发生了血清阳转，这提示H7N9LAIV有抗H7N9禽流感新病毒的潜力。

抗原特异性滤泡辅助性T细胞的活化与诱导在流感减毒活疫苗所诱导的人黏膜免疫抗体应答中发挥关键作用

当前,抗呼吸道感染的鼻内疫苗开发项目正日益吸引着越来越多的关注。对疫苗所诱导的保护力而言,抗体应答是决定性的,而人们普遍认为滤泡辅助T细胞(TFH)对于介导抗体应答非常重要。绝大多数支持TFH在免疫应答中作用的数据均来自于动物研究,而除血液中存在TFH样细胞外,来自人体的直接证据则十分有限。研究者考察了在人类鼻咽相关淋巴组织(NALT)中TFH细胞的活化与诱导,及其在流感减毒活疫苗(LAIV)所诱导的抗体应答中的作用。腺扁桃体组织的TFH细胞活化情况使用流式细胞仪分析,同时在LAIV刺激扁桃体单核细胞(MNC)后检测抗流感血凝素(anti-HA)抗体。通过使用流式细胞仪对被诱导的TFH细胞和CD154表达进行分析,研究者对由LAIV诱导的抗原特异性TFH细胞活化情况展开研究。LAIV诱导了与抗HA抗体产生有关的TFH细胞增殖,同时研究显示TFH细胞对于抗体应答至关重要。表达BCL6和CD21新诱导的TFH细胞以及随后抗HA抗体的测定表明,初始T细胞被LAIV诱导成为TFH细胞。

弹性蛋白酶依赖的猪流感病毒减毒活疫苗通过滴鼻免疫的免疫原性和保护效力的研究

甲型流感病毒是一种重要的猪呼吸道病原,发病率高,给养猪业造成很大的经济损失,接种疫苗是预防和控制流感的首选。流感减毒活疫苗(LAIV)在人类和马中被应用并为其提供了广泛的免疫保护,但目前并无针对猪流感病毒的减毒活疫苗面市。我们曾经报道过的一株来源于SIVA/Sw/Saskatchewan/18789/02(H1N1)(SIV/Sk02)的弹性蛋白酶依赖的突变株SIV A/Sw/Sk-R345V(R345V),已在猪体内高度减毒。通过气管给猪免疫R345V两次,能介导强烈的细胞免疫和体液免疫反应,对抗原性不同的SIV感染提供高度的保护。试验评价了通过滴鼻这一更为实用的途径免疫R345V对SIV感染产生的免疫原性和保护效力。研究数据显示,滴鼻免疫R345V减毒活疫苗2次,能刺激气管支气管淋巴结产生强烈的抗原特异性IFN应答,并刺激血清和呼吸道粘膜产生抗体应答。滴鼻接种R345V活疫苗,为猪免受亲本野生病毒株及具有病原性的同源变异株A/Sw/Indiana/1726/88(H1N1)的感染提供完全保护,此外,还对猪免受异源亚型H3N2 SIV的感染提供不完全保护。因此,弹性蛋白酶依赖的突变株R345V可作为抗原性不同的猪流感病毒的活疫苗。

鼻用流感减毒活疫苗在2～17岁人群中的效力

背景：已有8个随机有对照的临床试验,包括约有26 000名6月龄～17岁的人群,评估了流感减毒活疫苗（LAIV）与安慰剂或3价流感灭活疫苗（TIV）相比,其抗由培养证实的流感的效力。本文分析的目的是将现有LAIV在2～17岁人群中的效力资料结合在一起形成一整体资料,这个年龄段人群已批准使用LAIV。

流感病毒改造新策略及其应用

流感病毒有着极强的变异性和传播性,常在全球范围内引起季节性的流感爆发。流感病毒的基因组序列、蛋白结构与功能、病毒的包装机制等环节研究相对清楚,也是一种重要的模式病毒,用于条件控制基因元件的发现和确证,构建智能响应型病毒等。随着反向遗传学与合成生物学的发展,通过基因工程改造的流感病毒能更好地控制病毒复制来提高疫苗的安全性,以及诱发机体产生强烈的免疫反应,在肿瘤免疫治疗领域引发广泛关注。本文描述了蛋白质水解靶向嵌合病毒、条件复制型流感减毒活病毒和高干扰素敏感病毒等三种新型减毒流感病毒改造策略,并对编码过早终止密码子的嵌合抗原肽的流感病毒、与PD-L1或CTLA4免疫检查点重组的流感病毒、截短的NS1片段表达GM-CSF的流感病毒分别对黑色素瘤、肝癌的溶瘤作用进行评述。未来,将通过创新性地运用不同策略、不同病毒来构建减毒活疫苗和溶瘤病毒,以便在临床上获得更加安全有效的治疗手段。

鼻腔内接种的流感减毒活疫苗

本文介绍了鼻腔内接种的冷适应流感减毒活疫苗的免疫原性、效力及安全性 ,并与现行的流感灭活疫苗进行了比较。

流感减毒活疫苗:预防流感的新选择

流感减毒活疫苗 (L AIV)给流感的预防和控制提供了新的可能性。经鼻内给予 LAIV提供了非注射接种途径。这些疫苗在儿童和健康成人中证明安全有效。一项在幼儿中进行的为期两年的安慰剂 -对照临床研究 (1996～ 1997和 1997～ 1998流感流行季节 )表明 ,L AIV与实验室证实的流感病例减少 92 %相关。疫苗接种也显著减少了中耳炎的发病和抗生素的使用。在 1997～1998流感流行季节对健康成人的安慰剂 -对照试验中 ,L AIV明显地减少发热性上呼吸道疾病和与疾病相关的误工、保健和抗生素的使用。 70 %的研究对象自己接种了疫苗。经济学分析表明 ,L AIV及其给健康成人接种的无盈亏费用是 39美元。在 1997～ 1998流感流行季节 ,L AIV中没有包括当时的主要流行株—— A/悉尼变异株 ,但疫苗还是对健康成人和儿童提供了明显的保护作用。目前正在高危人群中研究灭活疫苗和 LAIV的潜在效益。 L

减毒流感疫苗研究进展

目前流感疫苗研制已取得明显进步,但流感病毒仍然对全球公共卫生构成巨大威胁。传统的灭活流感疫苗(IIV)或减毒活流感疫苗(LAIV)接种是控制季节性流感的主要策略,但它不能对具有大流行潜力的新型流感病毒提供保护。且季节性流感病毒持续性抗原漂移,导致抗原不匹配,严重影响疫苗效力。因此,快速优化季节性流感疫苗生产和开发新的大流行流感疫苗,仍然是预防流感的重要任务。最近有报道质疑目前LAIV的有效性,因为它主要是针对疫苗中的甲型流感病毒(IAV),保护范围有限。因此,需要研究人员开发新型LAIV,以克服LAIV的局限性。基于质粒的反向遗传学的发现和应用是快速产生重配减毒流感病毒的关键技术,可用于开发新型、有效的LAIV。本文将对新型LAI的安全性、免疫原性和保护性进行阐述,并汇总有关LAIV研究方面的新进展,以启发流感疫苗研究新思路。

鼻内基础免疫的流感活疫苗在纵隔淋巴结中诱发局部B细胞应答

大流行性流感减毒活疫苗(pLAIV)常被用于基础免疫以使受试者对后续的流行性流感灭活亚单位疫苗(plSV)产生强烈的中和性抗体应答。然而,在使用pISV加强免疫前曾接受与未接受pLAIV免疫的受试者之间,其外周血中的H5特异性记忆B细胞未检测出不同。为了探究pLAIV基础免疫的机制,研究者分别单独使用H5N1 pISV或pLAIV,或序贯使用H5N1 pLAIV和pISV免疫12只非洲绿猴(AGM)并系统检测其全身和局部引流淋巴结(LN)的免疫力。AGM模型重现了临床研究的血清学观察结果。有趣的是,H5N1 pLAIV在纵膈淋巴结(MLN)中诱导了强烈的生发中心B细胞应答。

经鼻黏膜免疫的双价流感活疫苗的保护效力及保护机制

先前我们报道了新的潜在的减毒流感活疫苗（LAIV）,命名为SIV/606,表达H1和H3血凝素毒株。我们还表明气管内接种SIV/606,可以防止感染H1和H3甲型猪流感病毒亚型。在这里,我们通过鼻内接种SIV/606至猪体,这是一种LAIV更合适的免疫途径,以期评价其疫苗效力。SIV/606鼻内接种,可以诱导血清Ig G抗体,预防H1N1 SIV（猪流感病毒）和H3N2 SIV。