应用美国Q式甲型流感检测试剂盒诊断马流行性感冒

应用美国Ｑ式甲型流感检测试剂盒诊断马流行性感冒李万坤，崔正瀛，张国盛，史永年，陈轶霞（甘肃省兽医技术推广总站兰州７３００４６）１９９３年１１月至１９９４年５月，甘肃省境内大范围爆发了马流行性感冒（简称马流感）。在对该病的诊断过程中，我们用美国产的Ｑ式...

新型甲型H_1N_1流感检测方法的临床观察

目的:研究并探讨新型甲型H1N1流感病毒使用RNA荧光定量来检测的的方法,以及观察使用RNA荧光定量来检测是否具有临床的可行性以及安全性。方法:选取流感患者80例为研究对象。,所有患者都自愿接受调查并服从所有准则,有30例中鼻咽拭子混悬液患者,有28例咽拭子患者,有22例鼻拭子患者,收集的时间以患者去就诊的时间为标准,荧光定量PRC法是用来检测甲型H1N1流感病毒RNA,与此同时对这80例流感患者还要经常做季节性的流感病毒的检测。结果:B型流感病毒患者的人数为45例;其他流感有35例,占44%。根据取材方法来说,鼻咽拭子混悬液的阳性比重是68%,咽拭子所占的阳性比重为47%,鼻拭子所占的阳性比重为39%。结论:在检测新型甲型H1N1流感过程中,所取的材料应尽可能采取鼻拭子混悬液,同时要注意的是:采集样本的时间越早阳性率所占的比重越高。使用RNA荧光定量来检测更具有临床的可行性以及安全性。

不同采样部位对小儿流感病毒抗原检测结果的影响探究

探讨采样部位的不同,之于小儿流感病毒的抗原检测而言,结果 方面有何种影响。方法 纳入的样本经由咽拭子、鼻咽采样分为两组,均1000例。对照检测所得结果。结果 在对比流感病毒检测的不同采样部位时,观察鼻咽拭子采样阳性率更高(P<0.05)。结论 不同采样部位影响小儿流感病毒抗原检测的总体结果。流感属于儿童的常见疾病之一,在临床识别过程中,主要是借助于发热、咳嗽症状等。

2014年云南家禽H9亚型禽流感病毒的检测分析

为了掌握云南省2014年家禽H9亚型禽流感感染和病原变异情况,试验采用RT-PCR方法对云南省98个发病鸡场组织病料进行H9亚型禽流感检测,并对2株代表性毒株进行HA基因测序。结果表明：28个鸡场出现H9亚型禽流感核酸阳性,阳性率为28.6%;分离获得的2株云南省H9亚型禽流感病毒HA基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.5%和98.7%,均属于欧亚分支ACKBJ194分支（分支Ⅲ）;与广东ACKGDCYH122011、广西ACKGXQCR102011毒株之间的核苷酸同源性为97.9%~98.1%,与ADKHY43997（分支Ⅰ）和AQUAILHKG197（分支Ⅱ）的核苷酸同源性为82.5%~86.6%;与广东ACKGDCYH122011、广西ACKGXQCR102011毒株之间的氨基酸同源性为97.5%~98.0%,与ADKHY43997（分支Ⅰ）和AQUAILHKG197（分支Ⅱ）的氨基酸同源性为87.0%~89.7%;HA基因编码蛋白裂解位点序列均具有低致病性病毒分子特征。说明云南省2014年家禽H9亚型禽流感病毒仍为弱毒株。

应用流感病毒快速检测方法对流感样病例病原学诊断的研究

目的探讨流感病毒快速检测方法在流感样病例诊断中的意义。方法采用流感病毒快速检测方法和(或)MDCK细胞培养法对228例流感样病例进行病原学检测,并分析流感样病例的临床特点。结果流感病毒快速检测方法的阳性检出率为22.6%,MDCK细胞培养法的阳性检出率为15.4%;流感病毒快速检测方法的敏感性为55.6%,特异性为75.9%,阴性预测值为94.0%,与细胞培养方法的一致率为73.9%。结论流感病毒快速检测方法特异性高、阴性预测值高、与细胞培养方法的一致率高,在流感流行季节对于流感的快速诊断和筛查,有一定临床意义。

实时荧光定量PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的比较

目的探讨实时荧光定量PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的应用效果。方法将我中心流感高峰季节接收的流感样病例样本726例分别采用实时荧光定量PCR和细胞培养检测方法进行检测,分析2种检测方法的阳性检出率和实时荧光定量PCR方法的灵敏度和特异度。结果726例流感样病例样本中,细胞培养阳性89例,阳性率12.26%;实时荧光定量PCR阳性189例,阳性率26.03%。以细胞培养法为金标准,计算实时荧光定量PCR检测法灵敏度为91.01%,特异度为83.05%。结论实时荧光定量PCR具有灵敏度高、检出速度快等特点,可广泛应用于临床诊断、常规监测以及流感疫情应急检测等。

快速检测流感病毒抗原方法的建立

目的建立有效、简便的胶体金免疫层析方法(G ICA)快速检测流感病毒感染抗原方法。方法分别对1145例急性呼吸道疾病住院患者应用G ICA法检测患者鼻咽部分泌物的流感病毒A、B(FluA、B)抗原,并同时用IFA法作对照,对G ICA法做出评价。对以上患者分别应用鼻、咽拭子法和鼻咽部细导管负压吸引法两种不同方法采集患者鼻咽部分泌物,均经G ICA法快速检测分泌物标本中的Flu A、B抗原,对两种不同采集方法的结果做出评价。结果以上两种检测方法及采集方法所得结果,均有较好的一致性,之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论鼻、咽拭子采集法配合G ICA法是简便、快捷、敏感的检测流感病毒抗原的好方法。

多重RT-PCR方法检测甲型流感病毒

目的建立一种快速、敏感、特异的多重RT-PCR,同时检测甲型流感病毒中的3个分型:甲型H1N1流感病毒,季节性H1N1流感病毒,季节性H3N2流感病毒,并将此方法应用到实验室流感病毒核酸检测技术中。方法利用甲型流感病毒3个分型病毒的引物,在同一个RT-PCR反应体系中,对疑似流感咽拭子标本进行检测。结果多重RT-PCR对甲型流感病毒中分型病毒有较高的灵敏度和特异性,可直接从疑似流感标本中同时进行甲型流感病毒分型检测。结论此实验中采用的多重RT-PCR具有与常规RT-PCR一样的特异性和敏感度,而且比普通RT-PCR和病毒分离法更快速,也更简便。

几种甲型H1N1流感病毒SYBR Green I荧光RT-PCR检测方法的验证

目的比较和验证5种甲型H1N1流感病毒SYBR Green I荧光RT-PCR检测方法。方法首先使用美国NCBI网站的Primer-BLAST程序验证5种甲型H1N1流感病毒SYBR Green I荧光RT-PCR检测方法引物的理论特异性,然后使用猪流感H1N1病毒核酸、2009年新甲型H1N1流感病毒核酸、H5N1禽流感核酸、能力验证样品作为试验样品验证方法的实验特异性。结果理论验证结果显示5对来源于文献的引物均适合于猪流感的检测,前3对可用于新型甲型H1N1流感的检测,但只限于个别来源的毒株,与预期略有差别。实验验证结果显示,方法1可正确检出甲型流感病毒;方法2可正确检出猪流感H1N1亚型病毒、新甲型H1N1流感病毒核酸;方法3检测新甲型H1N1流感核酸时未获得阳性结果;方法4可以正确检测出猪流感H1病毒核酸;方法5可以正确检测出猪流感H1N1病毒核酸,但检测新甲型H1N1流感核酸、禽流感H5N1核酸时也为阳性。结论方法1可用于猪甲型流感和新甲型H1N1流感病毒的初筛;方法2可用于猪流感H1N1亚型病毒和新甲型H1N1流感病毒核酸的初筛;方法3不适合新甲型H1N1流感病毒核酸的检测;方法4可用于猪流感H1亚型的检测;方法5不适合于猪流感H1N1亚型病毒的检测。采用SYBR Green I荧光RT-PCR方法检测甲型H1N1流感病毒核酸,特异性普遍不十分理想,只能用于初筛检测。

芯片式数字PCR检测禽流感病毒方法的性能验证

目的 对芯片式数字PCR检测禽流感病毒的方法进行评估,并与荧光定量PCR方法进行比较。方法 分别用芯片式数字PCR(dPCR)和实时荧光定量PCR(qPCR)两种方法检测不同浓度梯度的质粒标准品,对两种方法检测结果的线性范围,一致性,批内精密度,最低检出限等方面进行比较评估。并对31份农贸市场禽流感环境标本分别用数字PCR和实时荧光定量PCR检测,利用配对卡方检验来评估两种方法阳性率的差异,并用Bland-Altman法分析与荧光定量PCR方法的一致性。结果 质粒标准品在3.05×10~2copies/mL~1.00×10~7copies/mL的浓度范围内,与dPCR检测值呈良好的线性关系,R~2=0.9969,dPCR和qPCR在线性范围内斜率之间的差异无统计学意义(F=0.996,P=0.321);dPCR在不同稀释度的批内精密度变异系数(CV)范围为2.36%~22.78%;dPCR的估计检测下限(LOD)为410(95%CI:344~570)copies/mL,qPCR的估计LOD为845(95%CI:749~1 004)copies/mL;用dPCR和qPCR检测31份农贸市场环境标本,dPCR的检出率96.8%,qPCR的检出率80.6%(Kappa=0.244,P=0.063)。结论 本研究验证了芯片式数字PCR系统的性能及其与荧光定量PCR系统的方法学比较。芯片式数字PCR在其动态范围内表现出良好的线性,R~2=0.996 9,能够准确且高精度(CV)范围为2.36%~22.78%的定量不同浓度(3.05×10~2~1.00×10~7copies/mL)的复杂样本。

我院2019年发热门诊流感病毒抗原检测病例结果分析

目的分析该院2019年度发热门诊患者流感病毒抗原检验结果,指导临床流行性感冒(简称流感)病例的诊治。方法选择2019年1—12月在该院发热门诊进行流感病毒抗原检测的病例,统计其中流感病毒抗原阳性病例的比例和发病月份。结果该院发热门诊共检测流感病毒抗原19597例次,检测阳性2904例(14.8%),其中甲型流感2046例(70.5%),乙型流感858例(29.5%),在1—4月及12月流感病毒抗原检出阳性率分别为22.9%、27.0%、20.9%、25.4%、26.4%。结论2019年杭州1—4月及12月为流感流行季节,流感病毒抗原检出阳性率均大于20.0%;发热门诊对发热患者进行广泛的流感病毒抗原检测,对于早期发现流感病例是非常必要的,有利于及时防控及治疗。

影响流感病毒检测准确性的实验室相关危险因素分析

目的探讨流感病毒检测准确性的实验室相关危险因素。方法 2016年9月至2017年9月该院实施流感病毒检测的受试者280例,根据结果准确性分为准确组252例与非准确组28例,分析实验室相关危险因素。结果标本采集环境温度非4℃、标本保存时间>24小时、抗生素过少、标本反复冻融、实验室生物安全等级>Ⅱ级、标本信息未核对、检测标本<3ml、病毒RNA提取前未静置、检验医师未按照要求做好准备工作、检验医师工龄<3年均是影响流感病毒检测准确性的实验室独立危险因素。结论影响流感病毒检测准确性的实验室相关危险因素较多,检验医师应严格控制标本采集环境温度,24小时内完成检测、注意抗生素用量、避免标本反复冻融、保证实验室生物安全等级,并严格控制其他危险因素,以提高病毒检测的准确性。

流感病毒抗原检测在流感筛查中的应用效果研究

目的:探讨流感病毒抗原检测在流行性感冒(流感)筛查中的应用效果。方法:选择贵阳市公共卫生救治中心接诊的5442例发热(体温>37.3℃)患者作为研究对象。采用胶体金免疫层析法对这些患者进行流感病毒抗原检测,并随机抽取其中部分患者进行核酸检测,然后以核酸检测的结果作为参考,统计用流感病毒抗原检测诊断流感的准确率、特异度及敏感度。结果:对5442例患者进行流感病毒抗原检测的结果显示,其中检测结果呈阳性的患者有519例,阳性检出率为9.54%。5442例患者甲型流感病毒抗原的阳性检出率高于乙型流感病毒抗原的阳性检出率(P<0.05)。用流感病毒抗原检测诊断其中153例患者甲型流感的准确率、特异度、敏感度分别86.27%、77.38%、97.10%,诊断其中153例患者乙型流感的准确率、特异度、敏感度分别92.81%、96.90%、70.83%。结论:用流感病毒抗原检测诊断甲型流感和乙型流感的准确率、特异度、敏感度均较高,该方法可用于对患者进行流感筛查。

57例血清流感抗体检测结果的分析

目的针对本社区57例血清流感抗体检测结果进行分析,为预防及了解本社区甲型H1N1流感、甲型H3,乙型季节性流感BY、BV抗体水平,帮助本社区对流行性感冒传播及毒株的变化及时掌握。方法应用抽查方式随机选取本社区不同职业人群57例作为本次研究对象。抽取57份血清给予血凝抑制试验并对其采用微量半加敏法进行血清流感抗体检测。结果 2015年12月,检测57例健康人士血清流感抗体水平结果,甲型H1N1流感抗体阳性率为70.18%、甲型季节性流感H3抗体阳性率为31.58%、乙型季节性流感BY、BV抗体阳性率分别为26.32%、33.33%。流感抗体在不同人群中其阳性反应均为不同,其中甲型H1N1流感抗体较为普遍。调查人群流感抗体阳性率年龄、职业、健康程度均存在差异且统计学意义(P<0.05)。结论本社区甲型H1N1流感抗体阳性率普遍较高,且不同职业及年龄的人群对各项抗体的阳性率各存在差异。又因本社区对流感免疫保护水平有限,需尽早注射流感疫苗成为防疫流感最为有效途径。本社区也需加强流感病原学及健康人群的抗体检测。

禽流感H_5、H_7、H_9亚型多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立

禽流感病毒抗原变异性强,血清亚型多,涉及的范围广。所以,需要进一步实行保护,才能避免交叉感染。但在禽流感病毒检测时,每种检测方法每次只能检测禽流感单个亚型,耗时长。本研究的目标是采用多重实时荧光RT-PCR技术,同时检测禽流感H、H、H亚型,并研制相应的快速检测试剂盒。

福州市2005年流感病原学与血清学监测分析

目的分析福州市流感检测结果,探索流感活动规律,为制定有效的流感预防方案提供证据。方法用MDCK细胞培养法以及鸡胚进行流感病毒分离。以微量半加敏血凝抑制试验(HI)进行毒株鉴定及流感抗体检测。结果从405份标本中共分离到25株毒株,其中A3(H3N2)21株,乙型4株。正常人群流感抗体的阳性率分别为A151%;A371%;B45%(χ2=84.30,P<0.001)。结论鉴定结果表明A3(H3N2)为优势流行株,福州正常人群中A3流感抗体水平较高,A1、B型流感抗体较低。

云南省首例人感染H9N2禽流感病例发现与应对

目的对云南省流感监测中发现的首例人感染H9N2禽流感病例进行调查分析,为进一步防治人禽流感疫情提供科学依据。方法对患者、密切接触者和活禽市场开展流行病学调查,并采集病例呼吸道标本和外环境标本进行实验室检测分析。结果病例有活禽市场暴露史,标本禽流感病毒核酸阳性结果表明,该病例为人感染H9N2禽流感确诊病例,未出现二代病例。病例暴露的活禽市场环境中存在大量禽流感病毒。结论医疗机构加强流感样病例监测和不明原因肺炎监测是及时发现人禽流感病例的重要手段。活禽交易市场定期消毒与休市是降低感染率的关键措施。

2009-2014年石河子市流行性感冒病毒核酸检测结果分析

目的：对石河子市2009年9月~2014年4月期间流感样标本进行流感病毒核酸检测及分析，了解石河子市流感流行情况，为石河子流感防控提供参考。方法：采集流感样病例的咽拭子用实时荧光PCR法检测流感病毒。结果：2009年9月至2014年4月共检测哨点医院流感样标本1788份，检出流感病毒255份，阳性率为14.26%。其中甲型H1N1流感病毒149份，占58.43%，季节性甲型H3流感病毒32份，季节性甲型H1流感病毒1份，乙型流感病毒73份。在各年份中流感分型的构成比之间差异有统计学意义（x2=219.42,P〈0.001）。结论：不同年份间流感病毒优势毒株不同，B型流感和甲型H1N1型流感毒株占主要地位，应加强监测分析不同年份的优势毒株开展流感防控。