寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒鼠肺适应株FM1感染肺炎小鼠的保护作用

目的研究寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法①ICR小鼠60只,随机分为正常组、模型组、达菲组及寒喘祖帕颗粒高、中、低剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组小鼠用甲型流感病毒鼠肺适应株FM1溶液(病毒原液稀释4.0×10~3倍)滴鼻感染小鼠造模。达菲组给予达菲47 mg/kg,寒喘祖帕颗粒高、中、低剂量组分别给予寒喘祖帕颗粒浸膏1.08 g/kg、0.54 g/kg、0.27 g/kg,正常组和模型组给予同体积蒸馏水。各组均连续干预5 d,于6 d时称取小鼠体质量,摘取全肺,计算其肺指数及抑制率;末次给药24 h后ELISA法测定小鼠血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)水平;HE染色观察小鼠肺组织病理学改变并进行评分。②ICR小鼠160只,随机分为正常组、模型组、达菲组及寒喘祖帕颗粒高、中、低剂量组,正常组10只,其余各组每组30只。除正常组外,其余各组小鼠用流感病毒鼠肺适应株FM1溶液(病毒原液稀释3.5×10~3倍)滴鼻感染小鼠造模。造模当天开始各组分别灌胃给药,达菲组给予达菲47 mg/kg,寒喘祖帕颗粒高、中、低剂量组分别给予寒喘祖帕颗粒浸膏2.16 g/kg、1.08 g/kg、0.54 g/kg,正常组和模型组给予同体积的蒸馏水。各组均连续干预5 d,观察14 d内小鼠死亡情况,记录小鼠存活时间并计算死亡率。结果①与正常组比较,模型组小鼠体质量降低(P<0.01),肺指数增加(P<0.01),血清TNF-α水平升高(P<0.01),肺组织病理得分增加(P<0.01);与模型组比较,达菲组和寒喘祖帕颗粒高、中剂量组小鼠体质量增加(P<0.05,P<0.01),肺指数降低(P<0.05,P<0.01),血清TNF-α水平降低(P<0.01),肺组织病理得分降低(P<0.01);达菲组与寒喘祖帕颗粒各剂量组比较、寒喘祖帕颗粒各剂量组组间比较,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。②与正常组比较,模型组小鼠存活时间减少(P<0.01),死亡率增加(P<0.01);与模型组比较,达菲组和寒喘祖帕颗粒高、中、低剂量组存活时间增加(P<0.01),达菲组寒喘祖帕颗粒高剂量组死亡率降低(P<0.01)。与达菲组比较,寒喘祖帕颗粒中、低剂量组存活时间减少(P<0.05),寒喘祖帕颗粒高、中、低剂量组死亡率升高(P<0.01)。与寒喘祖帕颗粒高剂量组比较,寒喘祖帕颗粒中、低剂量组存活时间减少、死亡率升高(P<0.05)。结论寒喘祖帕颗粒对甲型流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠有一定的保护作用,该作用可能与抗炎、降低血清TNF-α含量有关。

板蓝根提取物抗甲1型流感病毒鼠肺适应株作用的研究

目的研究板蓝根提取液的抗甲1型流感病毒鼠肺适应株作用。方法以病毒滴鼻感染小鼠,建立病毒感染小鼠模型,观察小鼠病死率、肺指数及肺病理改变;用鸡胚培养法观察板蓝根提取物灭活甲1型流感病毒鼠肺适应株的作用。结果药物组小鼠病死率及肺指数明显低于模型组,有显著性差异。肺病理显示病变较模型组轻且炎性细胞渗出少。鸡胚实验结果显示板蓝根提取液能明显灭活病毒。结论板蓝根提取液具有一定的抗甲1型流感病毒鼠肺适应株和增强机体免疫力的作用。

流感病毒鼠肺适应株FM1诱导犬肾细胞MDCK凋亡的实验研究

流感病毒鼠肺适应株FM1攻击犬肾细胞36 h后,通过对其细胞形态学的观察、DNA电泳图谱的分析及流式细胞仪的检测,显示受到病毒攻击后犬肾细胞在形态学上主要表现为细胞圆缩,核固缩、碎裂等,在细胞周围形成典型的圆形凋小体;琼脂糖凝胶电泳实验图谱可见到清晰的ladder梯状条带;流式细胞仪的检测提示在正常的二倍体峰前可见明显的亚二倍体峰,并有一定的细胞凋亡率。根据以上结果可得出结论:在流感病毒鼠肺适应株FM1攻击犬肾细胞MDCK后诱导了细胞凋亡的发生。

清热解毒中药对流感病毒FM_1株感染所致小鼠肺组织病理损伤的影响

目的动态观察清热解毒中药对流感病毒感染所致小鼠肺组织病理损伤的影响。方法将96只健康雄性BALB/cAnN小鼠随机分为空白对照组、流感病毒感染模型组、中药治疗组,每组按照流感病毒感染1、3、5、7天不同时相再分为4个小组,每小组8只小鼠。用流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株(FM1株)感染小鼠建立流感病毒性肺炎模型。在FM1株感染不同时相,中药治疗组用清热解毒中药混悬液(由生石膏30g、黄芩10g、生甘草3g组成,相当于成人临床剂量5.58g.kg-1.d-1)灌胃,空白对照组及流感病毒感染模型组用等量生理盐水灌胃。在FM1株感染1、3、5、7天,摘眼球放血处死小鼠,打开胸腔摘出全肺,分别用肉眼、光学显微镜、透射电镜动态对比观察肺组织的病理学变化。结果肉眼观察,中药治疗组小鼠肺脏病变在FM1株感染后3～7天,较病毒感染模型组明显减轻,仅有少量渗出,病灶范围较小,病变数量较少。光镜下观察,中药治疗组在FM1株感染后3～7天,肺组织病变程度较病毒感染模型组明显减轻,肺组织病灶较小,炎症细胞分布密度较低,细支气管上皮脱落减轻,支气管管腔内炎症细胞渗出明显减少,小血管内皮细胞肿胀减轻。电镜下观察,中药治疗组小鼠肺组织病变较病毒感染模型组明显减轻,肺泡结构破坏减轻,可见Ⅱ型细胞增生,肺内毛细血管内皮细胞形态大致正常,无肿胀。结论清热解毒中药能够显著改善FM1株感染所致小鼠肺脏的炎性病变,对FM1株感染所致小鼠肺组织病理损伤具有较强的修复作用。

痰热清注射液对流感病毒FM_1感染小鼠肺损伤及血凝滴度影响的研究

目的观察痰热清注射液对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM_1)感染小鼠肺组织损伤及肺组织匀浆病毒血凝滴度的影响。方法采用流感病毒FM_1感染小鼠模型,设立正常对照组、模型组、利巴韦林阳性药物组、痰热清注射液大、中、小剂量组。观察各组小鼠肺指数、肺匀浆的血凝滴度、肺组织的病理改变。结果与模型组比较,痰热清注射液大、中、小剂量组小鼠肺组织匀浆病毒血凝滴度明显降低(P＜0.05)；痰热清注射液大、中剂量组小鼠肺组织病理形态学明显改善；与模型组比较,痰热清注射液大中小剂量组小鼠肺指数显著降低(P＜0.05)。结论痰热清注射液对流感病毒FM_1感染小鼠肺匀浆的血凝滴度具有明显的降低作用,对其所致肺损伤具有明显的改善作用。

痰热清注射液对流感病毒FM_1感染小鼠的保护作用

目的研究痰热清注射液对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)感染小鼠的保护作用。方法观察痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠的死亡保护作用,以及肺指数和肺组织病理形态学变化,同时检测肺组织匀浆中流感病毒血凝滴度。结果痰热清注射液治疗组对流感病毒FM1感染小鼠具有明显的保护作用,死亡保护率与模型组小鼠比较,差异显著(P<0.05);肺组织病理形态学观察发现,痰热清注射液治疗组肺部炎症反应较模型组有显著改善。另外,痰热清注射液对肺组织匀浆中流感病毒血凝滴度具有明显的抑制作用。结论痰热清注射液(4mL/kg)对流感病毒FM1感染小鼠具有明显的保护作用。这种保护作用与痰热清注射液在体内抑制流感病毒增殖、减轻肺部炎症反应有关。

荔枝核提取液抗小鼠体内FM1流感病毒的作用

目的:研究荔枝核提取液对甲1型流感病毒鼠肺适应株的影响。方法:用病毒滴鼻感染小鼠建立病毒感染小鼠模型,观察肺指数、病毒致小鼠死亡率。停药后处死小鼠,取各组小鼠肺组织光镜和电镜观察。结果:荔枝核高、低剂量组对小鼠流感病毒性肺炎均有抑制作用,对流感病毒感染小鼠有明显的死亡保护作用。在光镜与电镜观察下,正常对照组小鼠肺组织形态学未发生改变,病毒模型组肺组织明显出现充血、变性、白细胞浸润等现象,治疗组肺组织充血等现象明显轻于模型组。结论:荔枝核提取液在小鼠体内具有抗FM1流感病毒的作用。

RT-PCR法分析两种解表法中药对FM_1感染小鼠肺中炎性细胞因子的影响

目的 动态观察益气清瘟解毒合剂所含辛温解表法和辛凉解表法中药对流感病毒亚洲甲型鼠肺适应株（FM1）感染小鼠肺中炎性细胞因子表达的影响,探讨上述两种解表法抗流感免疫炎性损伤及其修复方面的作用机制.方法 建立FM1感染小鼠模型,将小鼠随机分为4组,分别为正常空白组、病毒感染模型组、辛温解表法组（炙麻黄6 g、羌活12 g、紫苏叶10 g）、辛凉解表法组（柴胡10 g、金银花10 g、薄荷6 g）,各组按病毒感染后第1、3、5、7天不同时相各分为4个小组,每小组8只小鼠.采用反转录酶聚合酶链式反应（reverse transcriptase polymerase chain veaction,RT-PCR）法,在流感病毒感染后不同时相,动态观察辛温、辛凉解表法中药对小鼠肺中TNF-α、IL- 6、IL-1、IL-10、IFN-γ 5种炎性细胞因子RNA表达的影响.结果 （1）辛温解表法中药在FM1感染小鼠后1～5天显著降低肺组织中TNF-α的RNA表达,在FM1感染后3～5天显著降低肺组织中IL-1的RNA表达,在FM1感染后第1天及第7天显著降低肺组织中IL- 6的RNA表达,在FM1感染后第3天及第7天,显著增加肺组织中抗炎性细胞因子IL-10的RNA表达,在FM1感染后1～3天显著增加抗病毒因子IFN-γ的RNA表达.（2）辛凉解表法中药在FM1感染小鼠后3～5天显著降低肺组织中TNF-α的RNA表达,在FM1感染后第7天显著降低肺组织中IL-1的RNA表达,在FM1感染后1～7天显著降低肺组织中IL- 6的RNA表达,在FM1感染后第3天及第7天,显著增加肺组织中抗炎性细胞因子IL-10的RNA表达,在FM1感染后1～3天显著增加抗病毒因子IFN-γ的RNA表达.在FM1感染后第3天辛凉解表法中药可能增加肺组织中IL-1的RNA表达.结论 中药可能通过纠正炎性细胞因子的失衡抑制机体的炎性损伤,并促进损伤的修复,对靶器官具有免疫保护作用.

消退素D1对H1N1流感病毒FM1感染小鼠肺组织的保护作用及机制

NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD⁃like receptor pyrin domain⁃containing 3,NLRP3)炎症小体的激活在H1N1流感病毒感染引起肺组织损伤中起关键作用;消退素D1(Resolvin⁃D1,RvD1)是具有抗炎活性的脂质介质,在多种脏器损伤模型中通过抑制NLRP3炎症小体的激活减轻组织损伤及炎症反应。为了研究RvD1对H1N1感染小鼠肺组织的保护作用及机制,本研究以雄性C57BL/6小鼠为对象、通过H1N1/FM1病毒株滴鼻的方式进行H1N1感染的建模,给予RvD1腹腔注射、空白(Negative control,NC)慢病毒或NLRP3慢病毒尾静脉注射干预。检测肺指数,肺组织病理改变,肺组织中病毒载量及NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis⁃associated speck⁃like protein,ASC)、Cleaved caspase⁃1的表达水平,支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IL⁃1β、IL⁃18的含量。与对照组比较,模型组小鼠肺组织出现了肺泡结构损伤、炎症细胞浸润等病理改变,肺指数及肺组织中病毒载量、NLRP3、ASC、Cleaved caspase⁃1的表达水平、BALF中IL⁃1β、IL⁃18的含量增加(P<0.05);与模型组比较,RvD1组小鼠肺组织的病理改变减轻,肺指数及肺组织中NLRP3、ASC、Cleaved caspase⁃1的表达水平、BALF中IL⁃1β、IL⁃18的含量降低(P<0.05),病毒载量无明显变化(P>0.05);与NC慢病毒+RvD1组比较,NLRP3慢病毒+RvD1组小鼠肺组织病理改变加重,肺指数及肺组织中NLRP3、ASC、Cleaved caspase⁃1的表达水平、BALF中IL⁃1β、IL⁃18的含量增加(P<0.05)。以上结果表明RvD1通过抑制NLRP3炎症小体减轻H1N1/FM1感染小鼠的肺损伤。

毒热平注射液体外对小鼠T细胞功能及杀伤FM1感染靶细胞功能的影响

目的观察毒热平注射液体外对小鼠T细胞功能及杀伤流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)感染靶细胞的影响。方法用MTT法及双抗体夹心ELISA法检测毒热平注射液低、中、高(2.1、8.5、17.0μg/mL)剂量对正常小鼠、感染流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)的脾细胞数目、产生干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)、及T细胞杀伤FM1感染巨噬细胞Ana-1功能的影响。结果毒热平注射液体外能抑制刀豆蛋白A(Con A)诱导的正常小鼠脾细胞的增殖,抑制Th2型细胞因子IL-10的产生,促进Th1型细胞因子IFN-γ的产生;能保护FM1感染的小鼠脾细胞,并抑制其产生Th2型细胞因子IL-10,而使Th1型细胞因子IFN-γ水平保持在一定的范围内;还能直接增强T细胞对FM1感染的靶细胞(Ana-1)的杀伤能力(P<0.05,P<0.01)。结论毒热平注射液体外作用于小鼠T细胞,可增强有利于抗FM1感染的免疫应答。

流感病毒对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响及板蓝根的干预作用

目的:观察流感病毒感染后小鼠脾淋巴细胞增殖的变化,以及板蓝根颗粒的干预作用特征。方法:采用流感病毒(FM1)滴鼻感染BALB/c小鼠模型,以板蓝根颗粒进行干预,以利巴韦林为阳性对照药,分别灌胃给药。观察感染及用药前后各组小鼠的状态、脾脏重量,以及脾淋巴细胞增殖反应的变化。结果:与正常组相比,模型组脾脏重量减轻,差异显著(P<0.01);利巴韦林组脾重低于模型组(P<0.01)。脾淋巴细胞增殖反应:经ConA诱导后,与模型组相比,利巴韦林组、板蓝根组淋巴细胞增殖反应均升高,差异显著(分别为P<0.05,P<0.01),其中板蓝根组升高趋势更明显。结论:流感病毒感染小鼠急性期脾脏重量减轻,脾淋巴细胞增殖反应受到抑制;板蓝根颗粒和利巴韦林颗粒具有促进流感病毒感染小鼠脾淋巴细胞的增殖作用,板蓝根颗粒的作用可能更明显。

5个中药方剂对实验性小鼠病毒性肺炎的防治作用

目的观察5个中药方剂对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM_1)致小鼠肺部感染的保护作用。方法建立 FM_1感染小鼠肺炎模型,检测5个中药方剂对肺指数、肺内病毒活性、死亡率、生存时间等指标的影响。结果 5个中药方剂均能降低肺指数、降低肺组织内的病毒活性、降低死亡率及延长生存时间。结论5个中药方剂均有不同程度的抗病毒作用,其中1号方和2号方抗病毒作用优于3、4、5号方。

甲型流感病毒X31(H3N2)小鼠适应后毒力增强与HA及PB2突变相关

流感小鼠适应毒株及感染模型是研究流感病毒致病机理、评价抗流感病毒药物和疫苗效果的重要工具。为建立甲型流感病毒X31(H3N2)的鼠肺适应毒株,并探讨其在小鼠适应过程中毒力增强的分子机制,本研究将X31在BALB/c小鼠肺组织中连续传代,通过观察病毒滴度测定、感染小鼠症状变化、体重改变和致死力等指标,发现X31经过鼠肺连续传代10次以后,病毒毒力逐渐增强,与原代病毒相比,鼠肺中病毒滴度提高10倍,半数致死量(50%lethal dose,LD50)提高大于1 000倍。确定获得高致病力的鼠肺适应毒株(Mouse adapted X31,X31MA);对X31MA毒株全基因组测序发现,血凝素(Hemagglutinin,HA)基因出现3个有义突变(P221H、V309I、K411T),聚合酶碱性蛋白2(Basic protein 2,PB2)基因出现1个有义突变(M483T)。结果表明,通过在小鼠肺组织中连续传代X31(H3N2)致病力增强,其HA和PB2蛋白中四个适应性突变位点可能与流感病毒X31MA毒力增加相关。本研究为流感疫苗评价及致病机制研究提供了重要技术支持。

板蓝根提取液体内抗流感病毒作用的研究

目的:研究板蓝根提取液抗甲1型流感病毒鼠肺适应株的作用及其对机体免疫力的影响。方法:用鸡胚培养法观察板蓝根提取液灭活甲1型流感病毒鼠肺适应株;以病毒滴鼻感染小鼠,建立病毒感染小鼠的模型,观察肺指数、病毒致小鼠死亡率,无菌进行脾T、B淋巴细胞增殖实验。结果:(1)鸡胚实验显示,板蓝根提取液能明显灭活病毒。(2)动物实验表明,经过板蓝根提取液治疗的小鼠死亡率明显降低,肺脏病变减轻,免疫细胞增多。结论:板蓝根提取液具有一定的抗甲1型流感病毒鼠肺适应株和增强机体免疫力的作用。

复方一枝蒿微丸抗甲型H1N1流感病毒的研究

目的:观察复方一枝蒿微丸抗甲型HlNl流感作用,为临床治疗流感提供试验依据。方法:体外试验,以甲型HlNl流感病毒致人喉癌上皮细胞(Hep-2)病变,采用Reed-Muench法计算半数有毒浓度(TC_(50))、最大无毒浓度(TC_0)、半数抑制浓度(IC_(50))和治疗指数(SI);体内试验,以甲型H1N1流感病毒鼠肺适应株PR8滴鼻感染小鼠,计算小鼠存活率、存活天数及肺指数。结果:复方一枝蒿微丸对甲型H1N1流感病毒的TC_(50)为198.6 mg/ml,TC_0为18.2 mg/ml,IC_(50)为8.6±1.85 mg/ml,SI为41.5;复方一枝蒿微丸能降低感染甲型H1N1流感病毒的小鼠死亡率,抑制流感病毒所致的小鼠肺损伤。结论:复方一枝蒿微丸具有明显的抗甲型H1N1流感病毒作用。

蓝草空气消毒乳剂的研制及其抗菌抗病毒实验

目的研制一种中药空气消毒剂——蓝草消毒乳,并观察其抗菌、抗病毒作用。方法以板蓝根、连翘、金银花等中药提取物与熏衣草精油配制成中药空气消毒乳剂,并以1∶1水溶液作为样品源液进行抗菌、抗病毒实验。结果自行研制的蓝草消毒乳剂外观浅棕色,均匀细腻,易流动,香气怡人,室温自然贮藏3个月,质量稳定。蓝草消毒乳剂对流感病毒FM1有抑制作用;对条件致病菌群及致病菌均有抑菌作用。结论自行研制的蓝草消毒乳剂有抑菌、抑病毒作用,对环境中(空气)微生物抑制作用明显。

清咽滴丸抗常见呼吸道病毒的实验研究

目的研究清咽滴丸对呼吸道常见病毒的抑制作用。方法应用MTT方法,检测清咽滴丸对单纯疱疹病毒(HSV-1)和腺病毒(ADV11)的直接抑制作用、侵入细胞的抑制作用。应用鸡胚培养法,检测清咽滴丸体外灭活流感病毒的作用。建立ICR小鼠感染流感病毒模型,观察并记录小鼠的死亡情况,检测肺指数、肺脏病理改变及T、B淋巴细胞增殖情况和脾指数。结果①清咽滴丸对HSV-1和ADV11有直接抑制作用并且可抑制其侵入细胞。②鸡胚实验结果显示,清咽滴丸具有明显体外灭活病毒的作用。③动物实验结果显示,清咽滴丸不能降低动物的死亡率,但却可明显延长其平均存活时间;对肺脏有较好的抗炎作用;有刺激免疫细胞增殖,调节机体免疫功能的作用。结论清咽滴丸有明确的体外灭活病毒和一定的抗流感病毒鼠肺适应株(FM1)和调节机体免疫力的作用。在抗HSV-1和ADV11实验中,表现出确切的直接抑制作用和阻断病毒侵入细胞的作用。