石香薷挥发油对流感A_3病毒的抑制作用

评估了MCMVO体内外抗流感A3 病毒作用。在Vero细胞中测定MCMVO对流感A3 病毒所致细胞病变的抑制作用 ;在鸡胚中检测对流感A3 病毒血凝效价的抑制作用 ;在小白鼠体内测定对流感病毒性肺炎的治疗作用。结果显示 ,MCMVO在浓度大于 4.9mg/L时能有效抑制流感A3 病毒所致Vero细胞CPE。在 9日龄鸡胚中浓度为 5 0 0mg/L ,2 5 0mg/L和 5 0mg/L的MCMVO能使流感A3 病毒血凝效价由 1∶12 80分别下降到 1∶2 0 ,1∶40和1∶16 0。在给药剂量在 10 0 μg/ (g·d)以上时 ,对小鼠流感病毒性肺炎有明显的治疗作用。结果表明 ,MCMVO具有抗流感A3

抗病毒1号中药有效部位体外对流感病毒A_3的抑制作用

目的 探讨开发安全有效的抗流感病毒新药。方法 采用细胞培养技术 ,以病毒唑为阳性对照药 ,观察抗病毒 1号中药有效部位 (AD1)在MDCK细胞中对流感病毒A3的抑制作用。结果 AD1半数中毒浓度 (TC50 )为2 6 .95mg ml;抗流感病毒A3的半数有效浓度 (EC50 )为 2 .4mg ml;治疗指数 (TI)为 11.2 3;染毒后 0～ 8h分别给药均有抗病毒活性 ,且对流感病毒A3的抑制作用存在明显的量效反应关系。结论 抗病毒 1号中药有效部位在MDCK细胞中对流感病毒A3有明显抑制作用。

稳定表达人IFITM3的A549细胞株建立及其对禽流感病毒感染的抑制作用

目的:为深入研究IFITM3抗禽流感病毒作用及其分子机制提供细胞模型,建立稳定表达人IFITM3蛋白的A549细胞株。方法:首先合成引物,分离人外周血单个核细胞,PCR扩增IFITM3基因,进行DNA测序分析。测序正确后,将其克隆至慢病毒表达载体p LV-Puro中构建真核表达质粒p LV-IFITM3,转染A549细胞,在确定IFITM3可表达后,利用嘌呤霉素加压筛选稳定表达IFITM3的细胞株,通过荧光定量PCR和Western blot方法对获得的稳定细胞株进行鉴定,同时分析IFITM3蛋白在稳定细胞株的分布及其对细胞活性的影响。最后,基于建立的稳定细胞株,用H5N1亚型禽流感病毒作为病毒测试模型,对IFITM3的抗病毒活性进行了初步评价。结果:成功获得人外周血单个核细胞源IFITM3基因,构建了重组慢病毒表达质粒,并通过质粒转染结合嘌呤霉素压力筛选获得稳定表达IFITM3的A549细胞,且IFITM3主要分布在膜组分上,并对细胞活性无显著影响,同时IFITM3可抑制H5N1亚型禽流感病毒感染。结论:成功获得稳定表达IFITM3的A549细胞,证明了IFITM3可抑制H5N1亚型禽流感病毒感染,为进一步深入探讨IFITM3限制流感病毒感染的作用机制和分子机理提供了细胞模型和实验基础。

黄芩苷对甲型流感病毒PR8株的体外抑制作用研究

目的:研究不同来源黄芩苷对甲型流感病毒PR8株的体外抑制作用。方法:制备流感病毒空斑模型,通过预防保护(病毒吸附前给药)和治疗(病毒吸附后给药)2种模式观察黄芩苷对流感病毒不同阶段的抑制作用并结合神经氨酸酶抑制试验寻找其可能的作用位点。结果:2种受试黄芩苷样品A和样品B对MDCK细胞毒性(半数有毒浓度,TC50)分别为0.099 mg/mL和0.8 mg/mL;黄芩苷A在预防保护和治疗模式中均未发现明显的病毒抑制作用(IC50>0.3mg/mL);黄芩苷B在预防保护和治疗模式中的半数有效抑制浓度(IC50)分别为0.08和0.045mg/mL(选择指数SI为10和17.7),并对神经氨酸酶(NA)活性显示一定的抑制作用(IC50=51.7μg/mL)。结论:市售商品化黄芩苷B有确定的体外抑制流感病毒PR8株的作用。

空心莲子草有效部位提取物抗甲型H3N2流感病毒作用

[目的]以空心莲子草有效部位提取物为研究对象,进一步验证其抗甲型H3N2流感病毒的生物活性,为其开发应用提供依据。[方法]以利巴韦林注射液作为空心莲子草有效部位提取物抗病毒实验的阳性对照药物,观察甲型H3N2流感病毒感染幼犬肾(MDCK)细胞后引起的细胞病变效应(CPE),通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,采用治疗指数(TI)作为药物抗病毒效果的评价指标,评价空心莲子草有效部位提取物抗甲型H3N2流感病毒的生物活性。[结果]空心莲子草有效部位提取物对流感病毒有明显抗病毒生物合成作用,其TI为(2.43±0.01),但其阻止流感病毒吸附与直接杀伤流感病毒的作用不明显。[结论]空心莲子草有效部位提取物有较强的抗流感病毒作用,其作用方式为抗病毒生物合成,且呈剂量依赖性。

H3N2亚型犬流感病毒血凝及血凝抑制试验的研究

为优化H3N2亚型犬流感病毒(CIV)的血凝抑制(HI)试验方法,本研究应用不同种类红细胞进行CIV的血凝(HA)试验,应用不同种类红细胞和不同血清处理方法进行CIV的HI试验,评价其对HA和HI试验的影响。结果表明,H3N2亚型CIV对鸡和犬红细胞的凝集性最好,对小鼠、猪和牛红细胞的凝集性较差。HI试验应用鸡红细胞悬液效果最好,受体破坏酶(RDE)和高碘酸钾处理可以有效去除犬血清中非特异血凝抑制素,但高碘酸钾对血清特异性抗体有损耗。本研究筛选出H3N2亚型CIV HI试验的最佳方法,为犬流感的血清学诊断提供技术支持。

固表解毒合剂对甲型流感病毒抑制作用的实验研究

目的:研究固表解毒合剂体外抗病毒作用。方法:采用细胞培养法和鸡胚法,观察固表解毒合剂对甲型流感病毒的抑制作用,并与其他处方为对照。结果:固表解毒合剂对MDCK细胞和鸡胚的毒性小;当药物浓度为0.045g/mL时可保护50%细胞不产生病变,药物浓度为0.056g/mL时可保护50%鸡胚不受感染。结论:固表解毒合剂对甲型流感病毒具有抑制作用,其抑制作用比其他处方强。

黄酮类化合物对禽流感病毒的抑制作用

采用鸡胚培养法探讨黄酮类化合物对禽流感H5N1亚型病毒的抑制作用。实验分三种给药方式:即直接作用、先感染病毒后用药和先加药后感染。第一种给药方式说明黄酮类化合物可以直接灭活H5N1病毒;第二种给药方式说明黄酮类化合物可通过抑制流感病毒唾液酶的活性,从而抑制病毒粒子的复制;第三种给药方式反映一定浓度的药物可以阻断病毒对细胞的吸附作用。结果表明,黄酮类化合物对禽流感病毒的预防及治疗均有显著效果。

药效组分中药“黄金菊”对甲型流感病毒的抑制作用

目的:研究"黄金菊"抗甲型流感病毒PR8(A/PR8/34/H1N1)的活性,为药效组分中药的发现提供科学依据。方法:采用MTT掺入比色法测定药效组分中药"黄金菊"对狗肾传代细胞(MDCK)的毒性及对PR8的有效性,同时设定阳性药物对照组及空白对照组;采用生物效价二剂量法对该药物与阳性药物的等效剂量进行比较。结果:该药物对MDCK细胞的TD_(50)为1.9061mg·mL^(-1);TD_0为0.625mg·mL^(-1);对流感病毒PR8的MIC为312.5μg·mL^(-1),IC_(50)为112.8694μg·mL^(-1)。双黄连粉针与"黄金菊"等反应剂量比为184.91%;病毒唑与"黄金菊"等反应剂量比为46.17%。结论:"黄金菊"具有对甲型流感病毒的直接抑制作用,且存在明显的量效反应关系,作用优于市场应用较广泛的双黄连粉针,开发前景广阔。

马流感病毒H3亚型血凝抑制试验抗原的研究

为研制马流感病毒(EIV)H3亚型血凝抑制(HI)试验抗原,本研究以华北地区分离的H3N8亚型EIV(A/Equine/Huabei/1/2007(H3N8))为种毒,经条件优化确定了其生产工艺。检测结果表明:制备的EIV H3亚型HI试验抗原与英国兽医参考实验室(VLA)生产的抗原具有同样的敏感性,对EIV感染马后9 d^10 d的血清可检测出抗体阳性;对马流感H3亚型灭活疫苗免疫后31 d的马血清检测抗体为阳性;检测美国肯塔基大学马病研究室提供的强阳性、中阳性和弱阳性血清以及阴性血清的效价,结果与瓶签标定的效价一致。而且,制备的抗原仅与EIV H3亚型阳性血清发生特异性反应,与EIV H7亚型、猪流感病毒H1亚型、猪流感病毒H3亚型等12种其他亚型的A型流感病毒阳性血清均不发生反应。研究结果显示,制备的抗原具有很好的敏感性和特异性,填补了国内空白,可以用于目前EIV H3亚型HI抗体的检测,为马流感的诊断和监测提供了有效的技术手段。

蟾甘合剂对柯萨奇B_3病毒的抑制作用

目的探讨蟾甘合剂体内外抗病毒作用及机理。方法采用细胞培养法、MTT法检测蟾甘合剂的抗病毒作用;通过不同的给药时间、途径研究其抗病毒作用的环节;建立病毒性心肌炎模型,通过组织病理学检查法观察蟾甘合剂对柯萨奇B3病毒感染动物的保护作用。结果蟾甘合剂具有抑制柯萨奇B3病毒繁殖的作用,并能有效预防及控制小鼠心肌炎的发生与发展。结论蟾甘合剂对柯萨奇B3病毒感染引起的心肌炎具有预防及治疗作用。

纳米银对流感病毒H3N2灭活作用的探讨

[目的]探讨纳米银(Nanosilver,NaAg)对流感病毒H3N2的灭活作用。[方法]采用血球凝集试验、鸡胚培养法、MTT分析法、血球吸附试验探讨NaAg对流感病毒H3N2的灭活作用。利用透射电镜、流式细胞仪检测病毒诱导细胞的凋亡。[结果]NaAg/H3N2组血球凝集试验效价为1∶2,鸡胚尿囊液血凝效价低于1∶2,流感病毒H3N2对照组血球凝集试验效价、鸡胚尿囊液血凝效价均为1∶1024,二者比较差异具有显著性意义(P<0.001);NaAg溶液在狗肾MDCK细胞上最大无毒浓度为25μg/mL;流感病毒H3N2在MDCK细胞上半数感染浓度(TC ID50)为10-3.5/0.1 mL。等体积的50μg/mL NaAg与40 TC ID50流感病毒H3N2溶液室温充分混和作用2 h后感染MDCK细胞,细胞的存活率为(98.16±2.67)%,而20 TC ID50流感病毒H3N2感染MDCK细胞,细胞的存活率为(35.21±1.45)%,二者比较差异具有非常显著性意义(P<0.001)。25μg/mLNaAg溶液有效抑制了20 TC ID50流感病毒H3N2诱导MDCK的细胞凋亡。[结论]纳米银对流感病毒H3N2具有直接灭活作用。

玉屏风口服液在鸡胚内对流感病毒的抑制作用

玉屏风口服液经鸡胚尿(?)腔或卵黄囊给药时流行性感冒病毒A/京科/1/68(H_3N_2),毒株15EID_(50)·30EID_(50)感染量均有明显的抑制作用。药液实验组鸡胚阴性尿囊液再接种于鸡胚尿囊腔盲传三代后,除个别血凝转阳外,绝大部分均为阴性,药物在鸡胚内不汉是抑制流感病毒,而是能灭活病毒。

病毒唑、金刚胺、病毒灵对禽流感病毒的抑制作用和最小抑制剂量测定试验

利用鸡胚培养和ＨＡ试验，检测了病毒唑、金刚胺、病毒灵对禽流感病毒Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｈｅｎａｎ／１／１９９９（Ｈ９Ｈ２）株的抑制作用和最小抑制剂量。结果显示：病毒唑组 ＨＡ为 ０；金刚胺组 ＨＡ为 ０；病毒灵组 ＨＡ为 ４．５０ｌｏｇ２；阳性对照组 ＨＡ为 ６．５０ｌｏｇ２；阴性对照组ＨＡ为 ０。病毒唑和金刚胺对该病毒有明显的抑制作用，病毒灵无抑制作用。最小抑制剂量：病毒唑为２．５０００ｍｇ／Ｅ，金刚胺为０．３１２５ｍｇ／Ｅ。

蜂毒素基因重组腺病毒对人肝癌Hep3B细胞增殖抑制作用

采用现代分子生物学手段,将蜂毒素基因重组入复制缺陷型腺病毒骨架,并在蜂毒素基因上游插入特异性的甲胎蛋白启动子,构建成功携蜂毒素基因的重组腺病毒。体外实验证明,该重组腺病毒可特异性地杀伤分泌AFP的肝癌细胞。目的:观察携动物毒素基因重组腺病毒在体外对人肝癌细胞的杀伤作用。方法:用X-gal染色法测定腺病毒介导基因转染的效率;将携蜂毒素基因重组腺病毒转染人肝癌Hep3B细胞,采用细胞计数及MTT法测定转染后对Hep3B细胞的增殖抑制作用,并采用流式细胞术测定基因转染后对增殖细胞核抗原(PCNA)的影响。结果:重组腺病毒对Hep3B细胞具有较高的转染效率;细胞计数及MTT实验证明携蜂毒素基因重组腺病毒转染后,人肝癌Hep3B细胞的增殖受到明显抑制,PCNA标记指数下降。结论:携蜂毒素基因重组腺病毒在体外可抑制肝癌细胞增殖,抑制PCNA的合成可能是其作用机理之一。

乙酰水杨酸(阿司匹林)体外对流感病毒H1N1的抑制作用

探讨乙酰水杨酸(Acetylsalicylic Acid)在体外对流感病毒H1N1的抑制作用。采用血球凝集试验、神经氨酸酶活性抑制试验和鸡胚接种法,观察AS对流感病毒H1N1的抑制作用。血球凝集试验可以看出,AS对流感病毒H1N1包膜表面的血凝素活性有一定的抑制作用,且作用较为显著;鸡胚培养法的结果显示,AS明显抑制了流感病毒H1N1在鸡胚内的增值,实验组血凝效价低于1:2,对照组血凝效价为1:512;神经氨酸酶活性抑制试验的结果显示,AS能够明显抑制流感病毒H1N1的神经氨酸酶活性。结果表明AS在体外对流感病毒H1N1有明显的抑制作用,其抑制机理可能与AS对流感病毒血凝素和神经氨酸酶活性抑制有关。

受体相互作用蛋白激酶-3参与甲型H1N1流感病毒感染小鼠记忆性CD8^+T细胞的应答

受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)是坏死复合体的关键成分之一,介导细胞程序性死亡(programmed cell death,PCD)的发生。前期研究发现流感抗原特异性CD8^+T细胞的初次应答部分依赖于RIPK3分子,为探讨其在记忆性CD8^+T细胞应答中的作用,对初次感染后的C57BL/6小鼠在免疫记忆阶段进行了再次感染,并用流式细胞仪检测了流感病毒特异性的记忆性CD8^+T细胞的表型和功能。结果发现小鼠初次感染甲型H1N1流感病毒株A/Puerto Rico/8/34后37d,RIPK3敲除小鼠的CD8^+T细胞比例及分泌细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的能力均显著低于野生型小鼠;在再次感染相同病毒时,RIPK3敲除小鼠流感病毒特异性CD8^+T细胞比例及分泌细胞因子IFN-γ的能力依旧显著低于野生型小鼠;而CD8^+中枢型记忆性T细胞(TCM)比例显著高于野生型小鼠,效应型记忆性T细胞(TEM)或效应性T细胞(TEff)比例却显著低于野生型小鼠。提示RIPK3分子参与调节流感病毒特异的记忆性CD8^+T细胞诱生数量和分泌细胞因子功能,并影响其TCM与TEM/TEff的比例,为深入探索病毒特异的记忆性CD8^+T细胞应答的分子机制提供了新线索。