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不同谱系D型流感病毒HEF蛋白N-糖基化位点和B细胞表位预测分析
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作者 蒋智勇 周霞 +6 位作者 李春玲 楚品品 勾红潮 李艳 卞志标 刘建营 翟少伦 《中国动物保健》 2024年第10期123-128,共6页
D型流感病毒(IDV)是一种近年来新发现的正粘病毒科D型流感病毒属成员,可引起牛、猪、豚鼠等多种动物的呼吸道疾病,具有潜在的人兽共患性。基于HEF基因遗传多样性,IDV可分为5个不同的谱系,分别是D/OK、D/660、D/Yama2016、D/Yama2019和D/... D型流感病毒(IDV)是一种近年来新发现的正粘病毒科D型流感病毒属成员,可引起牛、猪、豚鼠等多种动物的呼吸道疾病,具有潜在的人兽共患性。基于HEF基因遗传多样性,IDV可分为5个不同的谱系,分别是D/OK、D/660、D/Yama2016、D/Yama2019和D/CA2019谱系。不同于甲型、乙型流感病毒,IDV的潜在N-糖基化位点主要集中分布在HEF基因上。为系统了解不同谱系毒株HEF蛋白的N-糖基化位点和B细胞表位,从Gen Bank数据库获得151条全长HEF基因序列,通过使用MEGA-X生物信息学软件构建遗传进化树,并用在线工具进行各毒株N-糖基化位点和线性B细胞表位预测分析。结果表明IDV的HEF蛋白具有6~8个潜在的N-糖基化位点,其中有2个N-糖基化位点(N146和N613)在不同谱系间相同,有6个N-糖基化位点(N28、N54、N249、N346、N390和N513)在不同谱系间存在差异。B细胞表位在不同谱系间有3个保守的表位和8~9个各谱系独特的表位。线性B细胞表位的预测将有助于设计激活体液反应的多表位疫苗,预测结果还需要体外和体内实验证实来证明该应用的可行性。 展开更多
关键词 D流感病毒 谱系 HEF蛋白 N-糖基化位点 b细胞表位 预测
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甘露消毒丹调控PI3K/Akt信号通路干预甲型流感病毒感染的作用机制
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作者 黄廷轩 郭姗姗 +4 位作者 赵荣华 张悦 吕思缘 于会勇 王成祥 《北京中医药》 2024年第8期871-879,共9页
目的 基于网络药理学探讨甘露消毒丹治疗甲型流感病毒感染的活性成分及作用机制,并用动物实验加以验证。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取和筛选药物有效成分,利用TCMSP及Swiss Target Prediction数据库预测潜在作... 目的 基于网络药理学探讨甘露消毒丹治疗甲型流感病毒感染的活性成分及作用机制,并用动物实验加以验证。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取和筛选药物有效成分,利用TCMSP及Swiss Target Prediction数据库预测潜在作用靶点。利用比较毒物基因组学数据库(CTD)、疾病相关基因与突变位点数据库(DisGeNET)、GeneCards数据库、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)获得甲型流感病毒感染的疾病靶点,将药物预测潜在作用靶点与疾病靶点取交集获得交集靶点。利用Cytoscape3.9. 1构建药物-成分-靶点网络并进行拓扑属性分析,预测中药主要活性成分。利用蛋白互作数据库(STRING)及Cytoscape3.9. 1绘制蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图,获取关键作用靶点。利用Metascape数据库进行基因本体(GO)功能以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。将C57BL/6J小鼠分为空白组、模型组、中药组及对照组,每组5只,甲型流感病毒PR8滴鼻感染小鼠构建感染模型,中药组予以甘露消毒丹灌胃,对照组予磷酸奥司他韦灌胃。观察肺指数、肺组织病理变化,实时荧光定量逆转录PCR (RTqPCR)法检测肺组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B (AKT)基因表达,双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织IL-6、IL-1β、TNF-α。结果 共筛选出甘露消毒丹125个化合物作为候选有效成分,获得286个潜在作用靶点,2 223个甲型流感病毒相关疾病靶点,61个交集靶点。药物-成分-靶点网络得到槲皮素、山奈酚、汉黄芩素、木犀草素、黄芩素、葛花苷元、金合欢素、异鼠李素、去氢二异丁香酚、柚皮素等10个关键成分。PPI网络得到TNF、IL-6、IL-1β、AKT1、TP53、JUN、HIF1A、PTGS2、MMP9、ESR1等10个关键靶点。GO功能富集分析共获得条目54条,其中生物过程20条,细胞组分14条,分子功能20条;KEGG通路富集分析共获得条目共20条,其中包括AGE-RAGE信号通路、癌症通路、松弛素信号通路、PI3K-Akt信号通路等。与空白组比较,模型组肺指数高(P<0.05);与模型组比较,中药组、对照组肺指数低(P<0.05)。模型组小鼠肺组织间质水肿,大量淋巴细胞、单核细胞浸润,肺泡壁明显增宽,肺泡融合。中药组及对照组小鼠肺组织间质水肿减轻,淋巴细胞、单核细胞浸润减少,肺泡壁增宽减轻,部分肺泡融合。与空白组比较,模型组小鼠肺组织中PI3K、AKT mRNA表达高(P<0.05)。与模型组比较,中药组PI3K、AKT mRNA表达低(P<0.05),对照组PI3K mRNA表达低(P<0.05)。与空白组比较,模型组肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α水平高(P<0.05)。与模型组比较,中药组肺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α水平低(P<0.05);对照组肺组织中IL-6、IL-1β水平低(P<0.05)。结论 甘露消毒丹可通过抑制甲型流感病毒感染小鼠炎症反应改善肺损伤,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的过度激活有关。 展开更多
关键词 网络药理学 流感病毒 靶点 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b信号通路 甘露消毒丹 温病
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一株c基因型牛副流感病毒3型病毒的分离鉴定
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作者 杨巍 蒋磊 董秀梅 《吉林畜牧兽医》 2023年第4期5-6,共2页
从黑龙江省某牛场当中患有呼吸系统疾病的病牛鼻拭子中分离到一株病毒,该病毒在MDBK细胞上能够产生典型的病变。经免疫荧光鉴定表明成功分离到一株牛副流感病毒3型,命名为HLJ1。将病毒的M基因与GenBank中已发表BPIV3毒株的M基因进行同... 从黑龙江省某牛场当中患有呼吸系统疾病的病牛鼻拭子中分离到一株病毒,该病毒在MDBK细胞上能够产生典型的病变。经免疫荧光鉴定表明成功分离到一株牛副流感病毒3型,命名为HLJ1。将病毒的M基因与GenBank中已发表BPIV3毒株的M基因进行同源性比较及系统进化分析,结果表明HLJ1与BPIV3c型参考毒株NX49的同源性最高为99.7%,因此HLJ1分离株属于c基因型BPIV3。我们的结果将为牛副流感病毒3型检测试剂盒及疫苗的研发工作奠定基础。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3 分离鉴定 系统进化分析 C基因
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一株蛋鸡血清8b型禽腺病毒的分离鉴定 被引量:2
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作者 路晓 武景琦 +7 位作者 张帆 韩易航 牟建青 梁贤 王芸 曹兵 于可响 宋敏训 《家禽科学》 2023年第3期1-5,I0006,共6页
从山东潍坊地区以包涵体肝炎为病变特征的发病蛋鸡中采集病料,通过接种7日龄SPF鸡胚分离到1株病毒,经PCR检测、测序分析、进化树分析和血清中和试验鉴定,确定为血清8b型禽腺病毒。将该病毒通过肌肉注射接种14日龄SPF鸡,结果仅部分试验... 从山东潍坊地区以包涵体肝炎为病变特征的发病蛋鸡中采集病料,通过接种7日龄SPF鸡胚分离到1株病毒,经PCR检测、测序分析、进化树分析和血清中和试验鉴定,确定为血清8b型禽腺病毒。将该病毒通过肌肉注射接种14日龄SPF鸡,结果仅部分试验鸡出现肝脏轻微坏死变性,这与临床中发病鸡肝脏明显坏死甚至破裂并不相符,分析可能与饲养条件、管理水平、鸡的品种和日龄、药物使用等方面有关。 展开更多
关键词 蛋鸡 血清8b禽腺病毒 包涵体肝炎 分离鉴定
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2006年河北省新分离Victoria系B型流感病毒变异株血凝素基因序列分析 被引量:4
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作者 刘艳芳 齐顺祥 +2 位作者 郭瑞玲 刘兰芬 田茶 《实用预防医学》 CAS 2007年第5期1392-1395,共4页
目的分析2006年河北省分离的B型流感毒株HA抗原性和基因特性,阐明HA基因的变异与流感流行的关系。方法用MDCK(Madin Darby Canine Kidney)细胞分离培养流感病毒,血凝抑制(Hemasslutination Inhibition,HI)试验鉴定型别。提取病毒核糖核... 目的分析2006年河北省分离的B型流感毒株HA抗原性和基因特性,阐明HA基因的变异与流感流行的关系。方法用MDCK(Madin Darby Canine Kidney)细胞分离培养流感病毒,血凝抑制(Hemasslutination Inhibition,HI)试验鉴定型别。提取病毒核糖核酸(RNA),采用RT-PCR扩增病毒HA基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,用DNAStar软件作分析处理。结果2006年在河北省流行的B型流感病毒属Victoria系,与北半球该流行期的国际疫苗株B/上海/361/02不同,其抗原性与最近的Victoria系代表株B/Hong Kong/330/2001相比已发生较大变异,核苷酸同源性仅为96.5%~97.2%,在抗原决定簇上有6个位点发生了氨基酸替换。结论2006年在河北省流行的Victoria系B型流感病毒是一个新的变种,在HA1区域发生的变异是今年B型流感流行的主要原因,应该引起重视。 展开更多
关键词 b流感病毒 HAl基因 核苷酸序列
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B型流感病毒广州株的分离及血凝素基因进化分析 被引量:2
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作者 鲁俊鹏 周荣 +3 位作者 欧志英 曾其毅 肖密丝 罗满林 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1120-1122,共3页
目的了解B型流感病毒广州分离株的分子流行病学背景和中国大陆地区该病毒的流行情况。方法从疑似流感患儿身上取样,经荧光定量RT-PCR检测证实为B型流感病毒;应用RT-PCR方法扩增出该株病毒的HA片段,将该片段克隆到T克隆载体测序后进行序... 目的了解B型流感病毒广州分离株的分子流行病学背景和中国大陆地区该病毒的流行情况。方法从疑似流感患儿身上取样,经荧光定量RT-PCR检测证实为B型流感病毒;应用RT-PCR方法扩增出该株病毒的HA片段,将该片段克隆到T克隆载体测序后进行序列分析;从Genbank中提取中国内地不同时间的HA基因序列和国际代表株序列,应用系统发育分析软件建立HA基因的系统发育树并进行进化分析。结果软件分析表明广州株HA片段长1882bp,编码584个氨基酸,新分离的B型流感病毒广州株在分类上属于Yamagata系;从20世纪80年代末期开始,中国内地流行的B型流感病毒分别属于Victoria系或者Yamagata系,20世纪90年代和21世纪初同时存在Victoria系和Yamagata系的流行。结论广州地区2007年存在B型流感病毒Yamagata系的流行,中国大陆地区20世纪90年代和21世纪初Victoria系和Yamagata系B型流感病毒的流行比例相当,时间规律不明显。 展开更多
关键词 b流感病毒 HA 系统进化分析
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B型流感病毒抗原诊断试剂盒与咽拭子流感病毒分离诊断效果比较
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作者 谢健屏 余幼民 +7 位作者 温文沛 邹宝兰 严建江 陶建平 周名秀 王凤华 肖密斯 罗小宁 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期66-68,共3页
目的利用病毒抗原诊断试剂盒建立B型流感病毒快速诊断的方法。方法对129例流感样病例的咽拭子病毒分离及B型流感病毒抗原诊断试剂盒检测,评价其灵敏度和特异性。结果咽拭子病毒分离阳性率为13.9%,B型流感病毒抗原诊断试剂盒检测阳性率为... 目的利用病毒抗原诊断试剂盒建立B型流感病毒快速诊断的方法。方法对129例流感样病例的咽拭子病毒分离及B型流感病毒抗原诊断试剂盒检测,评价其灵敏度和特异性。结果咽拭子病毒分离阳性率为13.9%,B型流感病毒抗原诊断试剂盒检测阳性率为8.5%,两法阳性检出率比较差异无显著性(P>0.05)。B型流感病毒抗原诊断试剂盒灵敏度为36.36%,特异度为79.72%,符合率为89.15%。结论本试剂盒能鉴定流感型别,操作简便快速,若能进一步提高灵敏度和特异性,有助于临床对流感病毒的早期诊断。 展开更多
关键词 b流感病毒 酶联免疫法(ELISA) 快速诊断
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蛋白酶激活受体1在甲型流感病毒感染所致炎症中的作用机制 被引量:1
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作者 高蕊 杨亚荣 +1 位作者 袁娟 潘建丽 《川北医学院学报》 CAS 2023年第8期1026-1029,共4页
目的:探究蛋白酶激活受体1(PAR1)在甲型流感病毒(IAV)感染所致的炎症中的作用机制。方法:选取10例甲型流感病毒患者及10名健康受试者作为研究对象,比较二者血清PAR1表达水平。按照不同感染复数将人肺癌细胞系A549细胞分为control组、0.0... 目的:探究蛋白酶激活受体1(PAR1)在甲型流感病毒(IAV)感染所致的炎症中的作用机制。方法:选取10例甲型流感病毒患者及10名健康受试者作为研究对象,比较二者血清PAR1表达水平。按照不同感染复数将人肺癌细胞系A549细胞分为control组、0.05组、0.1组、0.2组及0.4组,使用MTT法检测各组细胞活性;使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组白细胞介素6(IL-6)水平;使用RT-qPCR检测各组PAR1 mRNA水平;Western blot检测PAR1、Toll样受体3(TLR3)及核因子κB(NF-κB) p65蛋白水平。敲低PAR1或过表达TLR3后,使用Western blot检测各组细胞PAR1、TLR3、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达量。结果:PAR1在IAV感染患者血清及IAV感染的A549细胞中表达上调。与control组细胞相比,IAV感染细胞中细胞活性降低,促炎因子IL-6水平升高,且PAR1的mRNA表达水平上调。si-PAR1抑制了IAV诱导的炎症细胞因子IL-6水平的升高。TLR3过表达逆转了由si-PAR1所致的TLR3、p-NF-κB p65蛋白水平降低(P<0.05)。TLR3过表达逆转了si-PAR1所致的细胞活力和炎性因子的水平(P<0.05)。si-PAR1通过介导TLR3/NF-κB信号通路降低IAV感染所致的炎症反应。结论:敲低PAR1可通过抑制TLR3/NF-κB信号通路降低了IAV感染所致的炎症反应,发挥抗病毒作用。 展开更多
关键词 流感病毒 蛋白酶激活受体1 TLR3/NF-κb 炎症
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贵州省2013—2016年B型流感病毒流行特征分析 被引量:15
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作者 万永虎 庄丽 +6 位作者 郑勤妮 任丽娟 付琳 蒋维佳 张德著 唐光鹏 李世军 《中国感染控制杂志》 CAS 北大核心 2017年第4期338-342,共5页
目的了解贵州省B型流感病毒的流行特征和规律,为其预防与控制提供依据。方法采用描述性方法对贵州省2013年4月1日—2016年3月31日B型流感病毒RT-PCR检测结果进行统计。结果贵州省2013—2016年3个监测年度B型流感病毒RT-PCR检测阳性1 904... 目的了解贵州省B型流感病毒的流行特征和规律,为其预防与控制提供依据。方法采用描述性方法对贵州省2013年4月1日—2016年3月31日B型流感病毒RT-PCR检测结果进行统计。结果贵州省2013—2016年3个监测年度B型流感病毒RT-PCR检测阳性1 904份,其中By系1 215份、Bv系642份,2013年4月—2014年3月、2014年4月—2015年3月2个监测年度B型流感的优势流行株都是By系,而2015年4月—2016年3月是Bv和By系共同流行,流行季节主要在冬春季;B型流感病毒男性检出所占比率较高,占56.83%;15岁以下低年龄组人群B型流感病毒检出数最高(70.80%),而Bv系在0~岁年龄组最高(42.37%),By系在5~岁年龄组最高(35.56%);混合感染病原组合构成主要以By+Bv为主,占67.65%,与B型有关的混合感染数占95.59%。结论贵州省B型流感病毒存在By和Bv两种系别的流行,流行季节为冬春季,男性感染病例多于女性,发病以15岁以下人群为主,加强低年龄群体流感疫苗的接种和监测具有重要意义。 展开更多
关键词 b流感病毒 病原学 病毒分离 流行特征 监测
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牛副流感病毒3型的分离鉴定及感染牛抗体消长规律的研究 被引量:19
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作者 周玉龙 吴海涛 +4 位作者 任亚超 耿静 王密 谢金鑫 朴范泽 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期23-28,共6页
目的针对黑龙江省近几年夏季奶牛经常发生以高热、气喘和流涎等症状为主的疾病,给畜牧业造成严重经济损失,本文旨在研究其病原因素及感染牛中和抗体的变化趋势。方法本研究采集爆发高热病的牛群中患病牛乳汁和鼻液进行病毒分离,经CPE和... 目的针对黑龙江省近几年夏季奶牛经常发生以高热、气喘和流涎等症状为主的疾病,给畜牧业造成严重经济损失,本文旨在研究其病原因素及感染牛中和抗体的变化趋势。方法本研究采集爆发高热病的牛群中患病牛乳汁和鼻液进行病毒分离,经CPE和扫描电镜观察、理化特性试验、血凝试验、病毒中和试验以及RT-PCR方法鉴定分离的病毒,最后应用病毒中和试验跟踪监测5头典型发病牛中和抗体13个月。结果从病料中分离到一种RNA病毒,能够产生典型的细胞融合样CPE,有囊膜和栅栏样纤突,但是没有血凝性,能够与参考毒株牛副流感病毒3型抗血清发生病毒中和反应,HN基因的序列分析发现与牛副流感病毒3型HN基因同源性最高达99.6%。发病牛中和抗体跟踪监测结果显示康复期抗体效价是急性期的4倍以上,同时可见感染牛的中和抗体效价在6-8个月内能够维持在1:25~1:27,然后开始下降,最后维持在1:22~1:23之间。结论综上所述确定分离毒株是牛副流感病毒3型,进一步证实该病毒是引起本牛群高热病的病因之一,而且感染后中和抗体效价至少在6个月以内能够维持在较高的水平。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3 分离鉴定 中和抗体
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一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒 被引量:9
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作者 莫秋华 杨翠兰 +7 位作者 林继灿 谭华 涂承宁 叶立青 刘志明 杜坚 孙虹 杨泽 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1545-1547,共3页
目的建立能同时筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒的多重RT-PCR技术。方法针对A型流感病毒的M基因、B型流感病毒的NS基因设计通用扩增引物,针对新型甲型H1N1流感病毒的HA基因设计特异性扩增引物,采用一步法建立多重RT-PCR反应体系。... 目的建立能同时筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒的多重RT-PCR技术。方法针对A型流感病毒的M基因、B型流感病毒的NS基因设计通用扩增引物,针对新型甲型H1N1流感病毒的HA基因设计特异性扩增引物,采用一步法建立多重RT-PCR反应体系。通过盲法实验与实时荧光RT-PCR进行比对来评价方法的准确性,并应用于临床评价方法的实用性和有效性。结果琼脂糖凝胶电泳分析多重RT-PCR产物,结果显示目的扩增片段条带清晰明亮,没有非特异性产物出现,可见该方法扩增效率高,特异性强。50份样本的盲法实验结果显示两种方法检测结果完全一致,符合率为100%。结论建立的多重RT-PCR方法能通过一次实验快速、准确地同时筛检A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒,是一项成本低廉、对流感的疫情监测和早期诊断具有实用价值的筛检技术。 展开更多
关键词 多重RT-PCR A流感病毒 b流感病毒 H1N1流感病毒
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福建省甲型H1N1流感病毒分离及首例分离株全基因组序列分析 被引量:18
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作者 谢剑锋 沈晓娜 +11 位作者 王美爱 张拥军 吴冰珊 陈炜 王金章 修文琼 朱莉莉 杨式芹 陈端 翁育伟 郑奎城 严延生 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期745-748,809,共5页
目的分离甲型H1N1流感病毒,分析福建省首例病毒分离株全基因组序列和遗传特征,为研究病毒进化、致病性、流行规律提供科学依据。方法采用MDCK细胞和Real-time PCR法进行病毒分离、鉴定;提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增其8个基因片段,测定核... 目的分离甲型H1N1流感病毒,分析福建省首例病毒分离株全基因组序列和遗传特征,为研究病毒进化、致病性、流行规律提供科学依据。方法采用MDCK细胞和Real-time PCR法进行病毒分离、鉴定;提取病毒RNA,通过RT-PCR扩增其8个基因片段,测定核苷酸序列,利用生物信息软件拼接全基因组序列;分析重要基因位点,利用GENBANK中相关序列对首例病毒分离株A/Fujian/01/2009(H1N1)进行基因进化树分析。结果从82例甲型H1N1流感确诊病例标本中分离出50株甲型H1N1流感病毒,第一代分离阳性率60.98%。在福建省首次获得甲型H1N1流感病毒株及全基因组序列。基因组序列分析证明:该毒株与2009年大流行株高度同源,其基因组存在四源重组现象;氨基酸位点分析其对达菲药物敏感,对金刚烷胺类药物耐药;相对于猪流感代表株A/Swine/Iowa/15/1930(H1N1)存在6个HA抗原决定簇位点变异。结论MD-CK细胞对甲型H1N1流感病毒具有较高敏感性;福建省首例甲型H1N1流感病例分离病毒株与北美流行株高度同源;相对于以往古典型猪流感代表株出现了HA蛋白抗原性漂移;为今后进一步开展甲型H1N1流感病毒分子生物学研究奠定基础。 展开更多
关键词 H1N1流感 病毒分离 全基因组序列 序列分析 进化树
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山柰酚通过下调NF-κB信号通路减轻猪源甲型H9N2流感病毒所致小鼠急性肺损伤 被引量:33
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作者 李妍 王春富 +6 位作者 张瑞华 王存连 徐彤 徐明举 刘宝剑 王国华 田树飞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期315-321,共7页
目的:探讨山柰酚是否通过下调转录因子NF-κB信号通路的表达而保护感染猪源甲型H9N2流感病毒引起急性肺损伤的小鼠。方法:猪源甲型H9N2流感病毒感染BALB/c小鼠建立急性肺损伤模型,山柰酚干预后检测肺湿重与干重比,观察肺组织的病理学变... 目的:探讨山柰酚是否通过下调转录因子NF-κB信号通路的表达而保护感染猪源甲型H9N2流感病毒引起急性肺损伤的小鼠。方法:猪源甲型H9N2流感病毒感染BALB/c小鼠建立急性肺损伤模型,山柰酚干预后检测肺湿重与干重比,观察肺组织的病理学变化,检测支气管肺泡灌洗液内炎性细胞数量以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)含量同时检测肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性以及丙二醛(MDA)含量,Western blot检测小鼠肺内NF-κB P65的表达,ELISA检测小鼠肺组织匀浆细胞核提取物中NF-κB P65和NF-κB P50的核转位。结果:山柰酚能降低小鼠死亡率,改善肺组织的病理学变化和肺水肿程度,并能降低肺内巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞等炎性细胞的数量同时降低TNF-α、IL-6、IL-1β和MDA的含量,抑制MPO的活性并升高SOD的活性。另外,山柰酚可以下调NF-κB P65的表达增加细胞核提取物中NF-κB P65和NF-κB P50的核转位。结论:山柰酚通过下调NF-κB信号通路的表达从而降低猪源甲型H9N2流感病毒所致急性肺损伤小鼠的炎症程度和氧化应激损伤,最终减轻流感病毒所致的急性肺损伤。 展开更多
关键词 猪源甲H9N2流感病毒 NF-Κb信号通路 急性肺损伤 山柰酚
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荧光定量RT-PCR快速检测B型流感病毒的研究 被引量:8
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作者 何建凡 张然 +2 位作者 吴春利 程小雯 吕星 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2005年第8期981-983,共3页
目的:利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测B型流感病毒的方法。方法:根据B型流感病毒HA基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特... 目的:利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测B型流感病毒的方法。方法:根据B型流感病毒HA基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与普通RT-PCR法进行比较。结果:B型流感病毒检测反应的灵敏度为5.0×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.998,扩增效率为107.8%,5种非B型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳定性、重现性和特异性。结论:本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测B型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。 展开更多
关键词 b流感病毒 荧光定量RT-PCR 快速检测
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A型和B型流感病毒抗原的快速检测方法及临床应用 被引量:4
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作者 王厚芳 孙芾 +2 位作者 林宏 于俊峰 李明 《现代检验医学杂志》 CAS 2004年第3期7-9,共3页
目的 介绍一种检测 A型和 B型流感病毒抗原的快速方法以便及早确诊病人是否患有流感及所患流感类型 ,从而为临床提供良好的治疗依据。方法 采用一种快速 EIA法检测 A型和 B型流感病毒抗原试剂盒检测有流感症状病人的咽拭子或鼻咽拭子... 目的 介绍一种检测 A型和 B型流感病毒抗原的快速方法以便及早确诊病人是否患有流感及所患流感类型 ,从而为临床提供良好的治疗依据。方法 采用一种快速 EIA法检测 A型和 B型流感病毒抗原试剂盒检测有流感症状病人的咽拭子或鼻咽拭子中是否有流感病毒抗原。结果 从 2 0 0 1年 1 0月到2 0 0 3年 6月两年内累计检测了 2 88例病人标本 ,总阳性率为 1 1 .1 % ( 32 /2 88) ,且以 A型流感病毒感染为主 ( 8.3% )。 2 0 0 2~ 2 0 0 3年流感季节 ,流感病毒感染的总阳性率为 1 8.9% ( 2 7/1 43) ,A型流感病毒感染阳性率占 1 6.1 % ( 2 3/1 43) ,B型流感病毒感染阳性率占 2 .8% ( 4 /1 43)。这一季节内阳性结果主要集中在2 0 0 3年 1月 ;5 5例病人标本中 A型流感病毒感染的阳性率为 2 9.1 % ( 1 6/5 5 ) ;B型流感病毒感染的阳性率为 1 .8%。其中 1 2 y以下儿童 2 5例 ,A型流感病毒感染阳性率为 40 % ( 1 0 /2 5 ) ,是 B型的 1 0倍 ( 1 /2 5 )。结论 采用日本生产的快速 EIA法检测 A型和 B型流感病毒抗原试剂盒 1 5 min内可确定标本中是否有流感病毒抗原并能同时区分出两种主要流感病毒感染类型— A型流感或 B型流感 ,有利于疾病的早期诊断、治疗和预防 ,防止社区 展开更多
关键词 流感 流感病毒抗原 A流感病毒 b流感病毒
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山东省2017—2018年B型流感病毒药物敏感性检测及神经氨酸酶基因特征分析 被引量:8
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作者 吴巨龙 孙林 +4 位作者 张圣洋 宋绍霞 刘倜 王显军 李忠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期229-233,共5页
目的检测山东省2017-2018流感监测年度B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的药物敏感性,分析其神经氨酸酶(NA)基因特征。方法选取山东省2017—2018年分离的18株B型流感病毒(Yamagata系16株,Victoria系2株),通过生物学耐药实验检测病毒对奥... 目的检测山东省2017-2018流感监测年度B型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂的药物敏感性,分析其神经氨酸酶(NA)基因特征。方法选取山东省2017—2018年分离的18株B型流感病毒(Yamagata系16株,Victoria系2株),通过生物学耐药实验检测病毒对奥司他韦和扎那米韦的药物敏感性。提取病毒核酸后一步法RT-PCR扩增NA基因片段,双向测定核苷酸序列,对基因序列和氨基酸序列特征比对分析。结果在检测的18株B型流感病毒中,有1株Yamagata系病毒对奥司他韦和扎那米韦2种药物的敏感性均降低,此株病毒的NA基因发生H274Y位点突变。其余15株Yamagata系病毒和2株Victoria系病毒均为奥司他韦及扎那米韦的敏感株。结论随机选取的18株B型流感病毒中大多数病毒对神经氨酸酶抑制剂敏感,临床上可继续使用此类药物对流感患者进行治疗。应加强耐药性监测,警惕耐药株的出现。 展开更多
关键词 b流感病毒 神经氨酸酶抑制剂 耐药性
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繁殖障碍型H3亚型猪流感病毒的分离与鉴定 被引量:5
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作者 黄淑坚 龚中贵 +2 位作者 吴志新 梁小英 冼琼珍 《广东农业科学》 CAS CSCD 2007年第7期78-80,共3页
于广东惠州市某猪场采集流产死胎的肺组织、胎衣及鼻棉拭子,病料处理后经SPF鸡胚绒毛尿囊腔接种获得1株有血凝(HA)活性的病毒,通过AGP试验初步确定为猪流感流感病毒;但此病毒的血凝现象不能被抗H1亚型猪流感单因子血清、抗H5亚型猪流感... 于广东惠州市某猪场采集流产死胎的肺组织、胎衣及鼻棉拭子,病料处理后经SPF鸡胚绒毛尿囊腔接种获得1株有血凝(HA)活性的病毒,通过AGP试验初步确定为猪流感流感病毒;但此病毒的血凝现象不能被抗H1亚型猪流感单因子血清、抗H5亚型猪流感单因子血清、抗H7亚型猪流感单因子血清、抗H9亚型猪流感单因子血清抑制,而能被抗H3亚型猪流感单因子血清抑制;通过H3亚型猪流感病毒RT-PCR分子生物学诊断,最终确定该病毒为H3亚型猪流感病毒。动物回归试验结果显示,攻毒小鼠出现精神萎靡、厌食、嗜睡、被毛松乱、呼吸较急促,攻毒后7 d采集小鼠血清进行检测,HI效价为3log2~4log2;剖检发现病毒性肺炎,且能从病料中再次分离到H3亚型猪流感病毒。 展开更多
关键词 繁殖障碍 H3亚 流感病毒 分离 鉴定
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C基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定 被引量:6
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作者 冉旭华 张峣 +6 位作者 曹思 卢元赫 张玲玲 刘阳阳 倪宏波 朱战波 闻晓波 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第5期1368-1373,共6页
为了对宁夏地区患有呼吸系统疾病的舍饲牛进行病原鉴定,试验主要利用RT-PCR方法对样品进行牛副流感3型病毒(BPIV3)M基因序列扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体后转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中进行亚克隆。通过氨苄青霉素平板筛选,将... 为了对宁夏地区患有呼吸系统疾病的舍饲牛进行病原鉴定,试验主要利用RT-PCR方法对样品进行牛副流感3型病毒(BPIV3)M基因序列扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体后转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中进行亚克隆。通过氨苄青霉素平板筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定并利用分子生物学软件与GenBank上参考序列进行同源性比对。测序结果表明,从样品中分离到了1株BPIV3,并命名为NX49,其M基因全长为1 056bp;进化分析表明,NX49隶属于BPIV3C基因型,其M基因与中国山东C型分离株SD0835具有较高同源性,核苷酸同源性为99.4%;理化分析表明,该毒株对温度、酸及有机物均敏感,高温孵育下Mg2+对该病毒无保护力;血凝试验表明,NX49对豚鼠红细胞凝集效价仅为1∶4,且仅在4℃孵育时出现凝集反应。本研究成功分离得到一株BPIV3C型毒株,这将有助于中国BPIV3分子进化规律及病毒流行特点的进一步研究。 展开更多
关键词 牛副流感3病毒 C基因 分离 鉴定 同源性比对
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B型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法的建立和临床应用 被引量:5
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作者 丘立文 廖志勇 +4 位作者 王压娣 丁细霞 狄飚 袁国勇 车小燕 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1435-1438,共4页
目的制备和鉴定B型流感病毒核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb),建立双抗体夹心捕获抗原ELISA,用于B型流感病毒感染的早期诊断。方法用重组B型流感病毒N蛋白和B型流感病毒抗原免疫BALB/c小鼠制备mAb,采用ELISA间接法、免疫荧光(IFA)和免疫印... 目的制备和鉴定B型流感病毒核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb),建立双抗体夹心捕获抗原ELISA,用于B型流感病毒感染的早期诊断。方法用重组B型流感病毒N蛋白和B型流感病毒抗原免疫BALB/c小鼠制备mAb,采用ELISA间接法、免疫荧光(IFA)和免疫印迹(WB)进行筛选和鉴定,通过竞争抑制试验分析抗体识别表位,并采用抗体配对试验建立双抗体夹心捕获抗原ELISA检测B型流感病毒N抗原。结果获得12株特异性针对B型流感病毒N蛋白的mAb,识别8个不同的抗原位点,根据mAb识别抗原表位,对mAb进行多种组合的配对试验,筛选出2株单抗BN4和BN8混合作为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的单抗BN1和BN5混合作为测定抗体,建立了双抗体夹心ELISA,测定新鲜的漱口液标本的灵敏度达100%,而对冻融的漱口液标本检测灵敏度为83.9%,与其他呼吸道病毒如A型流感病毒、副流感病毒等无交叉反应,特异度达100%。结论获得特异性好的mAb,经过抗体的配对和优化,建立了一种灵敏度高、特异性强的B型流感病毒抗原的ELISA捕捉法,可用于B型流感病毒感染的早期实验室诊断及流行病学研究。 展开更多
关键词 b流感病毒 核衣壳蛋白 单克隆抗体 ELISA
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两株B型流感病毒的基因组序列分析 被引量:4
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作者 岳秀芳 夏咸柱 +12 位作者 于志君 朱晓文 刘红 李硕 范宝静 王世申 吴静 武艳丽 王铁成 杨松涛 黄耕 高玉伟 胡桂学 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期267-273,共7页
目的了解两株B型流感病毒的基因组序列特征。方法对两株B型流感病毒进行全基因组序列测定和基因进化特性的分析。结果成功扩增出两株B型流感病毒的全基因组序列,并且两毒株的基因组均属于Yamagata系类似株Ⅱ系。两株病毒的基因组序列与... 目的了解两株B型流感病毒的基因组序列特征。方法对两株B型流感病毒进行全基因组序列测定和基因进化特性的分析。结果成功扩增出两株B型流感病毒的全基因组序列,并且两毒株的基因组均属于Yamagata系类似株Ⅱ系。两株病毒的基因组序列与疫苗株B/Florida/4/2006(Yamagata系)以及Victoria系代表株B/Brisbane/60/2008、B/Malay-sia/2506/2004相比,HA基因同源性为89.7%~97.3%,NB基因同源性则为95.4%~98.4%。两株病毒的HA蛋白与WHO推荐的疫苗株B/Florida/4/2006(Yamagata系)相比,存在11处氨基酸突变,其中HA的N131K氨基酸位点突变,可能对抗原性产生影响。NB的S198N氨基酸位点突变可能影响神经氨酸酶抑制剂的灵敏度。结论两株B型流感病毒的遗传进化状态稳定,但是与同分支中的毒株基因序列部分位点存在差异。 展开更多
关键词 b流感病毒 基因序列 进化树
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