耐药性甲型流感病毒H_3N_2神经氨酸酶免疫原性的研究

为了确定耐药性甲型流感病毒H3N2神经氨酸酶的抗原性质较野生型甲型流感病毒是否发生改变,利用原核表达方法在大肠杆菌中大量表达并纯化野生型甲型流感病毒H3N2的红细胞凝集素(HA)和神经氨酸酶(NA);取HA和NA免疫后的小鼠血清分别对野生型和突变型甲型流感病毒H3N2进行Westernblotting、ELISA以及中和抗体检测。结果表明,野生型甲型流感病毒以及第119位氨基酸单点突变型甲型流感病毒对HA和NA免疫后的小鼠血清都有很好的免疫反应性,而第222位氨基酸单点突变和双点耐药突变型甲型流感病毒对免疫血清的免疫反应性要低很多。该研究首次确定了甲型流感病毒H3N2的野毒株与耐药突变株的神经氨酸酶的抗原性质存在很大的差异,进一步表明耐药突变株病毒除了具有抗药物活性之外也具有逃逸机体所产生的抗体攻击的能力,可为将来新一代甲型流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供重要参考。

2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型HA和NA基因的分子特征分析

目的探讨2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的分子特征,为甲型流感病毒H3N2亚型的防控提供科学依据。方法从全球共享禽流感数据库(GISAID)中获得我国2016~2017年分离的525株甲型流感病毒H3N2亚型病毒和13株H3N2亚型参考株的HA和NA基因序列。应用MEGA 6.0软件分析HA和NA的分子进化特征、氨基酸位点和耐药位点的变异情况。结果进化树分析显示13株参考株之间HA和NA氨基酸的同源性均为96.9%~99.1%。2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型的病毒株HA和NA氨基酸序列之间同源性均为96.3%~100%,HA和NA的优势亚分支均为3C.2a.1,相当一部分毒株分型不够明确。HA氨基酸变异分析显示9株发生N121E突变,103株发生N121K的突变且主要来源于2017年的香港毒株;182株发生G/R142K突变;A/Hong_Kong/3079/2017-HA和A/Guangdong-Chengguan/1383/2017-HA均发生A128I突变;NA蛋白仅3株(A/Hunan-Suxian/1980/2016-NA、A/Hunan-Yuhua/11799/2016-NA和A/Ningxia-Yuanzhou/1657/2016-NA)发现H275Y耐药位点突变。结论 2016-2017年我国甲型流感病毒H3N2亚型的HA和NA蛋白与参考株间存在一定的差异,优势亚型均为3C.2a.1;与病毒的毒力及药物相关的部分关键氨基酸位点发生变异。应密切关注H3N2病毒的分子特征,为其防控提供参考。

H3N2型流感病毒裂解疫苗的灭活效果验证

对H3N2型流感病毒单价原液进行裂解及灭活研究,并作相应的灭活效果验证,为H3N2型流感病毒裂解疫苗批量生产提供参考依据。方法 在FH20181210批纯化后的200ml样品中加入1.4ml终浓度为0.075%的裂解剂TritonX-100,于25℃下裂解1h、2h、3h,观察电镜结果。2、在FH20181210批裂解后的220ml样品中分别加入0.01%、0.015%、0.02%三个浓度梯度的甲醛溶液0.119ml,2-8℃下灭活3d、4d、5d,并测定血凝滴度。对FH20181210批H3N2型流感病毒单价原液进行原倍、10-1、10-2处理后,接种、冷胚、收获、盲传,将盲传后收获的尿囊液按组混合进行血凝滴度试验。通过孵化、接种、冷胚、收获和盲传,对原倍、10-1、10-2三个浓度梯度的三批H3N2型流感病毒单价原液测血凝以验证其灭活效果。结果 流感病毒经3h后可被0.075%的TirtonX-100完全裂解。使用0.02%的甲醛溶液灭活5d,可将流感病毒完全灭活。3、10-1与10-2浓度梯度的灭活效果好于原倍。结论 通过裂解与灭活双重处理的样品其灭活效果优于仅裂解或灭活的样品。

贵州省2017-2019年H3N2亚型流感病毒HA基因遗传特征分析

目的分析贵州省2017-2019年H3N2亚型流感病毒HA基因特征,了解变异规律。方法由贵州省10家网络实验室分离的H3N2亚型流感毒株中随机选取20株提取RNA,进行逆转录酶聚合酶链反应和测序,采用生物信息软件分析。结果20株毒株HA基因核苷酸同源性为97.7%~100.0%,与世界卫生组织推荐的疫苗株A/Hong-Kong/4801/2014(2017年)和A/Singapore-INFIMH/16-0019/2016(2018年)同源性高,而与2019年世界卫生组织推荐的疫苗株A/Kansas/14/2017(2019年)差异较大。遗传分析显示,20株病毒株主要分为2个分支,2019年流行的毒株处于不同的分支,遗传差距较大。关键位点分析显示,抗原决定族A、B、C和E存在突变;受体结合位点前壁和后壁存在突变;与当年度疫苗株相比,存在糖基化位点的增加。2017-2018年毒株在遗传距离、抗原位点和糖基化位点变异情况与2019年毒株略有不同。结论贵州省2017-2019年H3N2亚型流感病毒HA基因发生基因突变,2019年的毒株变异最为严重,应密切监测H3N2亚型流感病毒遗传进化的变化情况。

2011—2012年中国甲型H3N2亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂药物的敏感性

目的分析2011—2012年中国甲型H3N2亚型流感病毒对神经氨酸酶抑制剂药物（NAI）的敏感性。方法所有待检流感毒株来自中国流感监测网络，该网络覆盖中国31个省份的408家网络实验室和554家哨点医院。本研究挑选了2011年1月1日至2012年12月31日采样分离的毒株，共1903株，其中经国家流感中心复核鉴定为甲型H3N2亚型流感病毒的毒株共721株，采用化学发光法检测其对奥司他韦和扎那米韦的敏感性。药物敏感参考毒株为A／Washington／01／2007（119E），奥司他韦耐药参考毒株为A／Texas／12／2007（E119V）。采用t检验比较不同年份毒株对NAI敏感性的差异。结果A／Washington／01／2007对奥司他韦和扎那米韦的半数抑制浓度（IC50）值分别为（0．10±0．02）、（0．30±0．05）nmol/L，A／Texas／12／2007对奥司他韦和扎那米韦的IC50值分别为（4．27±1．60）、（0．20±0．03）nmol／L。721株甲型H3N2亚型流感病毒中，2011年132株，2012年589株。2011和2012年的甲型H3N2亚型毒株对奥司他韦的IC50值范围分别为0．04～0．62、0．02～0．95nmol／L，均在A／Washington／01／2007的IC50值10倍（1．00nmol/L）以内。2011和2012年的甲型H3N2亚型毒株对扎那米韦的IC50值范围分别为0．12～0．80、0．04～0．72nmol／L，均在A／Washington／01／2007的IC50值10倍（3．00nmol/L）以内。结论2011—2012年检测的中国甲型H3N2亚型流感毒株均对奥司他韦和扎那米韦敏感。

北京市西城区2009年-2011年H3N2甲型流感病毒HA1基因特性分析

目的:了解2009年6月-2011年6月期间北京市西城区H3N2甲型流感病毒HA1基因的变异情况。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增分离到的H3N2甲型流感病毒HA1基因,对基因片段进行测序,获得的序列与WHO推荐的疫苗株进行基因进化特性分析。结果:HA1基因进化树分析表明2009年、2010年、2011年基本上分为三个分支,并且每个分支与当年的疫苗株都不在同一分支上;HA1氨基酸变异中,抗原决定簇约有10.6%发生了变化,受体结合位点194位有改变。结论:2009年-2011年北京市西城区分离到的H3N2亚型流感病毒的抗原性及基因特性发生了变化,这种变化与世界各地的变化趋势大体吻合。

广州市2019年H3N2流感病毒分子流行特征分析

目的:对广州市2019年不同来源的H3N2流感病毒进行基因测序,分析H3N2流感病毒的进化变异特点。方法:对广州市2019年门诊监测、暴发疫情、住院重症病例等不同标本来源的H3N2流感病毒进行分离并对其血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因进行测序,运用DNA Star 7.1、Mega 6.0软件分析病毒的变异和进化特点。结果:2019年广州市H3N2流感表现为流行期Ⅰ(2019年1-8月)和流行期Ⅱ(2019年11-12月)2个流行高峰。男性和女性的H3N2流感病毒阳性率分别为13.46%(703/5221)和11.50%(510/4435),差异有统计学意义(χ2=8.43,P=0.00)。10~20岁年龄组H3N2流感病毒阳性率最高(25.18%,665/2641),各年龄组阳性率差异有统计学意义。测序发现,不同标本来源的毒株高度同源,亲缘关系相近,属于3C.2a.1分支。根据流行时间和进化特点,进一步划分为Group 1~3共3个小进化分支,Group 1分支流行于流行期Ⅰ、Group 3分支流行于流行期Ⅱ,Group 2分支为2个流行期过度的进化分支,流行期Ⅱ的病毒由流行期Ⅰ的病毒进化而来,且不同分支存在基因重组的现象。在疫苗选择压力下,Group 1~3分支逐渐出现HA抗原位点突变,导致新的抗原漂移。HA抗原位点变异主要发生A和B区,Group 1分支和Group 3分支受体结合位点变异发生在前壁和后壁,Group 2~3分支在HA抗原位点A区缺失2个糖基化位点。结论:2019年广州市H3N2流感病毒的遗传变异包括位点突变和基因重组。在疫苗免疫压力下H3N2流感病毒发生快速的进化变异,抗原位点变异逐渐累积,进而出现新的抗原漂移。应对H3N2流感病毒分子流行特点进行持续监测。

2003-2008年河北省H3N2亚型流感病毒HA1基因演变特征

目的了解近几年河北省H3N2亚型流感病毒HA1基因演变概况。方法选取2003-2008年河北省分离的25株H3N2亚型流感病毒,提取病毒RNA,进行逆转录-聚合酶链反应扩增,产物纯化测序,测定的序列用生物信息软件分析。结果每个流行期分离的毒株都较当年的疫苗株或前一年的毒株出现了位于不同抗原决定簇或者受体结合位点的氨基酸替换。2003-2008年不同流行期分离株在3、140、142、144、145、158、159、189、192、193、198、204、225、226和227位点氨基酸发生了变化,多数的改变发生在抗原决定簇A、B及RBS。进化树分析显示,每个流行期分离株均与前一年的毒株或当年疫苗株出现了不同程度的变化,不断出现新的进化分支,同一流行期分离株基本呈现集中分布。结论2003-2008年河北省H3N2亚型流感病毒HA1基因不断发生变异,密切关注其变异对防控流感流行有重要意义。

2007年-2008年珠海地区H3N2亚型流感病毒HA1基因特性研究

目的:了解珠海市2007年-2008年H3N2亚型流感病毒流行情况及血凝素基因变异情况。方法:按照时间顺序,随机选取12株2007年-2008年珠海市分离的H3N2亚型流感病毒株进行血凝素HA1序列测定并推导出其氨基酸序列进行分析。结果:H3N2亚型流感病毒在2007年为优势株,2008年成为弱势株。2007年分离株与该年疫苗株比较多数增加了1个糖基化位点,抗原决定簇有4个氨基酸位点发生了替换,并导致其抗原性发生漂移。2008年分离株氨基酸序列与该年疫苗株比较未发生明显变异。结论:2007年根据WHO疫苗推荐株生产的疫苗对该年我市H3N2亚型流感预防效果不好,以致于H3亚型在我市该年度成为优势株,引起广泛流行。2008年H3N2亚型流感病毒为该年度流感流行的弱势株,其HA1基因序列与该年度疫苗株相比未发生明显变异,对人群的保护效果较好。

2014—2016年南京市甲型H3N2流感病毒HA基因的进化分析

目的对南京地区2014—2016年流行的甲型H3N2型流感病毒血凝素(hemagglutintin,HA)基因进行测序和分析,掌握HA基因的位点突变和遗传进化特征。方法于2014—2016年流感监测样本H3N2型流感病毒阳性标本中,根据时间段随机选取27株,MDCK细胞进行病毒分离和纯化,吸取病毒培养液提取病毒RNA,反转录-聚合酶链反应(reverse transcritase polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增病毒HA基因全长并测序,掌握HA序列特征,对其遗传进化特点、重要功能位点进行详细分析。结果27株H3N2型流感毒株HA基因核苷酸长度为1701 bp,编码566个氨基酸;与同年WHO推荐疫苗株序列同源性高达97.9-99.5%。进化分析表明,2014-2016年南京流行株在进化树上分属两个分支,实现了从3C.3a到3C.2a基因型的转变,目前以3C.2a基因型流行为主;不同年份的南京分离株多个抗原表位上的氨基酸发生了变异。结论2014—2016年南京地区H3N2亚型流感病毒流行株与疫苗株同源性高,疫苗可以产生良好的保护作用;HA基因抗原位点变异快,分子遗传进化活跃,有必要对病毒HA基因的分子特征进行持续监测,为下一个流感病毒流行季H3N2型的防控做好准备。

2014—2015年北京市房山区H3N2亚型流感病毒基因特性

目的了解北京市房山区2014—2015年H3N2亚型流感病毒HA1基因变异情况。方法随机分别选择2014—2015年流感病原学监测中分离到的H3N2型毒株共26株,采用RT-PCR法扩增病毒目的基因片段后进行序列测定,与WHO推荐的北半球疫苗株及常见H3N2毒株进行比对并构建进化树。采用MEGA6软件对测序结果进行分析,同源性计算使用BLAST网站,利用NetNGlyc 1.0软件进行糖基化位点预测。结果 2014—2015年房山区H3N2亚型流感病毒HA1目的基因片段序列测定拼接后最长核苷酸片段为703 bp最短核苷酸片段为696 bp,没有核苷酸的丢失,编码氨基酸为232-234个;抗原表位A抗原表位和D抗原表位有变异;受体结合位点第228位由丙氨酸变为丝氨酸,第130位由丝氨酸变为苏氨酸;做进化树分析,发现该分析中的H3N2亚型流感病毒位于2个分支上,分别为A/Switzerland/9 715 293/2013和A/HongKong/5 738/2014,大部分与前者在一个分支。结论北京市房山区2014—2015年H3N2流感病毒的血凝素重链区HA1基因特性有部分变化,抗原表位A抗原表位和D抗原表位有变异,且在基因进化上与当年的疫苗株分属不同分支,具有一定的进化距离,相似度较低,可能导致H3N2流行。

临床细菌与H3N2流感病毒共感染特征及病毒血凝素裂解位点的变异研究

目的了解流感样病例中临床细菌与H3N2流感病毒共感染及病毒血凝素(HA)裂解位点的变异特征。方法收集2013年1月至2018年12月的流感样病例样本12250份,实时荧光PCR检测H3N2流感病毒。选取部分流感阳性病例样本,采用实时荧光PCR的方法进行金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和B型流感嗜血杆菌的检测,分析其临床感染特征。分离流感病毒,RT-PCR扩增病毒HA,测序,构建进化树,并分析裂解位点氨基酸变异特征。结果2013年以来,每年都有H3N2流感病毒的流行,H3N2在流感阳性病例中的占比为44.69%。随机选取2013—2018年间流感流行高峰的H3N2阳性病例样本295份,29.2%的病例存在临床细菌感染。对分离到的210株H3N2流感病毒进行HA裂解位点测序,68株存在变异,其中63株为K342R单氨基酸位点变异,裂解位点由PEKQTR转变为PERQTR。裂解位点未变异样本的细菌共感染率为31.25%(45/144),裂解位点变异样本的细菌感染率为23.53%(16/68),二者的差异没有统计学意义(χ2=1.34,P>0.05)。杭州地区流行的H3N2流感病毒主要属于3C.3a和3C.2a两个进化簇,裂解位点发生K342R变异的病毒属于3C.3a进化簇。结论H3N2流感病毒在杭州地区的流感病毒流行中占据重要地位。流感阳性病例存在着一定程度的细菌共感染。裂解位点变异具有一定的地域流行特征,但与细菌共感染没有显著相关性。

利用TaqMan—MGB探针检测A（H3N2）亚型流行性感冒病毒E119V耐药突变

目的建立快速检测A（H3N2）亚型流行性感冒病毒（简称流感病毒）神经氨酸酶（NA）基因E119V奥司他韦耐药突变位点的双重实时荧光定量逆转录PCR（rRT—PCR）方法。方法由GenBank获取2000--2012年A（H3N2）亚型流感病毒NA基因序列26条，据此设计特异性靶向NAE119V突变位点的TaqMan—MGB探针进行双重rRT—PCR反应，并利用耐药参考株、临床分离株进行敏感性、特异性和重复性评价。结果建立了快速检测NA基因E119V位点的双重rRT．PCR检测方法。本方法在A（H3N2）病毒（HA=8）稀释度至10。仍可检测到荧光信号，病毒滴度的对数与ct值之间呈线性相关，具有较高的灵敏度；与无耐药突变的A（H3N2）流感病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应，两条TaqMan—MGB探针之间不存在交叉反应，具有很高的特异性，并能够检测耐药株和敏感株混合病毒中的耐药突变，在较高浓度的混合病毒中对耐药突变的检测限是5％，在低浓度混合病毒中的检测限是50％。重复性试验得到H3N2—119E和H3N2—119V两组探针批内平均变异系数（CV）值分别为2．32％和0．57％，批间CV值分别为1．77％和0．97％，具有较好的重复性。对其中20株病毒的NA基因序列进行分析，证实这些毒株的NA基因119位点均为谷氨酸（E），表明本研究设计的方法与序列测定结果一致。结论建立了基于TaqMan—MGB探针检测A（H3N2）亚型流感病毒E119V耐药突变的双重rRT—PCR方法，该方法灵敏、特异、重复性好，实验过程和结果判读简单易操作。

一起甲型H1N1和H3N2流感病毒混合感染调查研究

目的 从病例临床特征、抗体变化规律及病原学检测等多角度分析一起由甲型H1N1和H3N2流感病毒混合感染引起暴发疫情的流行特征,为有效控制疾病的发生与蔓延提供科学依据.方法 采用回顾性调查和现场流行病学调查方法进行问卷调查,利用RT-PCR和血凝抑制试验分别进行流感病毒和血清抗体检测.结果 45例流感样病例中,确诊40例,其中22例为甲型H1N1流感、12例为季节性H3N2型流感、6例为H1N1和H3N2病毒混合感染.不同病毒感染病例的临床表现差异无统计学意义.序列比对分析显示,混合病毒感染和单一病毒感染者的甲型H1N1和季节性H3N2病毒基因序列没有差异.同时分析表明,所有流感病例的病毒株均对金刚烷胺耐药,对奥司他韦（达菲）有效.患者的双份血清血凝抑制试验检测表明,暴发由甲型H1N1和H3N2流感病毒混合感染引起.结论 这是一起由甲型H1N1和H3N2流感病毒混合感染引起的疫情,甲型H1N1病毒在传播过程中可能较H3N2更具有优势.

泉州市流感疫情实验室检测及H3N2亚型基因特性分析

目的 了解2009年泉州地区流感流行及病毒株的变异情况,探讨流感病毒基因的变异与流感流行的关系.方法 对泉州市198例流感患者的咽拭子采用MDCK细胞培养进行病毒分离,经血清学试验鉴定分型和实时荧光RT-PCR方法检测病毒核酸.对其中4株毒株提取病毒RNA,采用RT-PCR扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,用DNAstar megalign软件分析基因.结果 198份咽拭子中有98份为H3N2亚型流感病毒核酸阳性,分离到62株H3N2亚型流感病毒,HA1基因经核苷酸序列测定显示,其基因特性更接近于A/Ningbo/333/2008,核苷酸同源性为98.7%,与A/Xiamen/70/2004的同源性为96.8%,由HA1基因核苷酸序列推导的氨基酸系列与疫苗株A/Brisbane/10/2007相比,有7个氨基酸位点发生变异,其中有1个位点位于抗原决定簇A区（144）,有2个位点位于抗原决定簇B区（158、189）,种系发生树分析也证实HA1基因存在一定差异.结论引起2009年泉州市流感在部分集体单位流行的病毒为H3N2亚型,其基因特性和抗原性与疫苗株相比均发生了一定变异.

白及提取物小鼠体内抗流感病毒药效研究

[目的]评价白及提取物小鼠体内抗流感病毒的药效。[方法]流感病毒A/Sydney/5/97(H3N2),经BALB/C小鼠和鸡胚体内增毒建立鼠肺适应株,测定其流感病毒半数致死剂量(mouse influenza virus median lethal dose,MLD50)。雌性BALB/C小鼠84只,适应性培养后随机分为7组,其中模型组,白及提取物高、中、低剂量组和达菲组以0.1MLD50的鼠肺适应株病毒90μL滴鼻感染,二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组和正常对照组以等量0.9%氯化钠溶液滴鼻。感染后2h,白及提取物高、中、低剂量组和达菲组分别以白及提取物高、中、低剂量(8g/kg·d、4g/kg·d、2g/kg·d)和达菲0.03g/kg·d灌胃,模型组和正常对照组以等量0.9%氯化钠溶液、DMSO组给予等量DMSO灌胃,灌胃剂量均为200μL/只,1次/d,连续7d。灌胃第1、3、5、7天小鼠摘除眼球取血,ELISA法测定血清中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、干扰素-α(interferon-α,IFN-α)和IFN-β的含量;取肺脏称重并计算肺指数和肺指数抑制率;荧光定量PCR检测肺组织中病毒载量;HE染色观察肺组织的病理变化,综合评价白及提取物体内抗流感病毒药效。[结果]模型组小鼠肺组织病理切片显示肺组织间质性炎症明显,可见大量炎性细胞浸润,病毒载量不断增加;正常对照组和DMSO组小鼠肺组织中无流感病毒检出,无炎症改变。经白及提取物治疗,肺组织病理切片结果显示,炎症改善、炎性浸润细胞数量下降,高剂量组尤其明显。白及提取物肺指数抑制率最高达35.8%(高剂量组,第7天),达菲组最高可达47.2%。与模型组比较,各时间点白及提取物各剂量组与达菲组Ct值增加,病毒载量逐渐减少。与模型组比较,感染后第1、3、5、7天,白及提取物各剂量组和达菲组小鼠血清中细胞因子IL-2含量均升高,除白及提取物中剂量组第3天外,其余时点白及提取物高、中剂量组与达菲组差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05),低剂量组无统计学差异(P>0.05)。感染后第1~3天,模型组、白及提取物各剂量组和达菲组小鼠血清中IFN-α、IFN-β含量明显升高,到第5~7天又逐渐下降。与模型组比较,白及提取物高剂量组和达菲组第1、3、5天IFN-α含量升高,差异具有统计学意义(P<0.01);中、低剂量组第1、3天IFN-α含量升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,白及提取物高、中剂量组和达菲组第1、3、5、7天IFN-β含量升高,差异均有统计学意义(P<0.01);白及提取物低剂量组第5天IFN-β含量升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]白及提取物在小鼠体内具有显著的抗流感病毒作用,可能与促进IL-2、INF-α、INF-β生成,进而增强小鼠免疫功能有关。

广州地区无偿献血人群中HIN1和H3N2流感病毒中和抗体的分布及水平

目的探讨H1N1和H3N2流感病毒中和抗体在广州地区无偿献血人群中的分布及水平，为研究广州地区流感流行病学特征提供参考。方法于2015年10～11月，采用年龄分层随机抽样法选择广州血液中心无偿献血的498例健康献血者为研究对象。按年龄将其分为18～20岁组（n=150）、21～30岁组（n=210）、31～60岁组（n=138）。采用微量病毒中和实验法测定献血者血浆中H1N1和H3N2流感病毒中和抗体滴度，并分别对不同性别及年龄段H1N1和H3N2流感病毒中和抗体阳性率及滴度进行统计学分析。结果498例健康献血者中，H1N1流感病毒中和抗体阳性率为3．6％（18／480）；H3N2流感病毒中和抗体阳性率为4．6％（23／498），2种流感病毒中和抗体阳性率比较，差异无统计学意义（x^2=0．636，P=0．425）。156例男性献血者中，H1N1和H3N2流感病毒中和抗体阳性率分别为3．8％（6／156）和4．5％（7／156）；342例女性献血者中H1N1和H3N2流感病毒中和抗体阳性的率分别为3．2％（11／342）和4．4％（15／342）。不同性别献血者H1N1和H3N2流感病毒中和抗体阳性率比较，差异均无统计学意义（x^2=0．129、0．003，P〉0．05）。18～20岁组、21～30岁组和31～60岁组献血者H1N1流感病毒中和抗体阳性率分别为4．0％、5．2％和0．7％；H3N2流感病毒中和抗体阳性率分别为6．0％、5．2％和2．2％。不同年龄组献血者H1N1和H3N2流感病毒中和抗体阳性率比较，差异均无统计学意义（x^2=4．961、2．705，P〉0．05）。18-20岁组、21～30岁组和31～60岁献血者H1N1流感病毒中和抗体几何平均滴度（GMT）分别为1：1．38、1：1．48和1：1．05，平均为1：1．32；H3N2流感病毒中和抗体GMT分别为1：1．62、1：1．51和1：1．19，平均为1：1.44。3组献血者H1NI和H3N2流感病毒中和抗体滴度比较，差异均无统计学意义（x^2=4．887、2．702，P〉0．05）。结论广州地区无偿献血人群中H1N1和H3N2流感病毒中和抗体水平较低，不同性别和年龄人群对流感病毒普遍易感。

流感疫苗株H3N2(NYMCX-223A)主要抗原基因特征与传代稳定性

目的分析2013年流感疫苗生产用甲型H3N2(NYMCX-223A)毒株主要抗原血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因特征,并检测该疫苗株主种子批、工作种子批及疫苗病毒收获液的传代稳定性。方法对制备的H3N2疫苗株的主种子批、工作种子批及疫苗病毒收获液进行全面的生物学特性检测;采用RT-PCR法从主种子批、工作种子批及疫苗病毒收获液中扩增HA及NA基因片段,并进行全基因序列测定及分析;应用MEGA 5.05软件对7株不同年份的H3N2亚型疫苗株的HA氨基酸序列进行比对,绘制基因种系发生树。结果 H3N2疫苗株的主种子批、工作种子批抗原性与2013年度WHO推荐毒株相一致,其他生物学特性均符合《中国药典》三部(2010版)标准;主要抗原HA基因序列长度为1 701 bp,编码566个氨基酸;NA基因序列长度为1 410 bp,编码469个氨基酸,各代次流感病毒HA和NA基因核苷酸和氨基酸序列均一致,与GenBank公布的序列完全一致,同源性为100%。2013年与2012年H3N2疫苗株HA氨基酸序列相比,同源性为97.5%。2013年与2012年H3N2疫苗株具有较远的进化距离,与同源性结果相对应。结论 2013年甲型H3N2(NYMCX-223A)流感疫苗株主要抗原基因传代稳定,一般生物学特性符合《中国药典》三部(2010版)要求。2013年与2012年H3N2疫苗株序列差异较大。

河北省甲3亚型流感病毒流行株对金刚烷胺耐药性分析

目的分析河北省2004-2008年流感流行期甲3亚型流感病毒流行株对金刚烷胺的耐药情况,为流感的临床治疗用药提供科学依据。方法选取河北省流感监测实验室分离的136株甲3亚型流感病毒,提取病毒核酸,采用RT-PCR扩增流感病毒M2基因片段,纯化产物进行核苷酸序列测定,用生物信息软件分析其与耐药有关的氨基酸位点。结果 136株甲3亚型流感病毒分离株中,128株M2蛋白跨膜区耐药位点的氨基酸被置换,显示对金刚烷胺耐药率为94.12%。128株耐药株中,3株发生了V27A置换,占2.34%,125株发生了S31N置换,占97.66%,在这125株中有5株同时发生了V27I和S31N位点置换,占4.00%,3株同时发生了A29T和S31N位点置换,占2.40%。2004-2008年4个流行期甲3亚型流感病毒耐药率分别为78.95%(30/38)、100.00%(2/2)、100.00%(89/89)和100.00%(7/7)。结论自2005-2006年流感流行期以来,河北省甲3亚型流感病毒流行株对金刚烷胺的耐药率达到100.00%,提示不应该继续使用金刚烷胺类药物预防或治疗流感。

保定市儿童医院0～7岁门诊流感样病例的监测与预防

[目的]了解保定市区儿童流感病毒的流行情况，为进一步防治监测提供参考依据。[方法]2002～2006年保定市儿童医院作为国家流感监测哨点医院，收集0～7岁流感样病例（均为门诊就诊患儿），采集流感样患儿的咽部分泌物，用鸡胚分离、MDCK细胞培养分离鉴定病毒。[结果]共采集流感样患儿咽拭子标本1015份，分离出流感病毒94株，其中65株为H3N2型，19株为H1N1型，10株为B型，流感病毒阳性率为9．26％，其中以每年的12月份到次年1月份为流感的高发季节，流感病毒阳性率占14．73％，均高于同年10～11月份及来年2～3月份的水平；各年4～7岁流感病毒的阳性率均高于0～3岁年龄组。[结论]保定市区流感病毒流行以H3N2型为主，累及人群以4～7岁为多，做好这类人群的监测对流感的防治是非常重要的。