甲型流感病毒M1、M2和M42蛋白研究进展

甲型流感病毒基因组由8个分节段的基因组成,最初认为流感病毒的每个基因只能编码1个病毒蛋白,但随后发现M基因编码2种蛋白,即M1基质蛋白和M2离子通道蛋白。近年来的研究表明PB1基因编码PB1、PB1-F2和PB1-N40 3种蛋白,而PA基因则能编码PA、PA-X、PA-N155及PA-N182 4种蛋白。到目前为止,流感病毒的4个基因都已被证明能编码两种或两种以上的蛋白,说明流感病毒可以利用感染细胞的mRNA选择性剪接及蛋白翻译的不同机制实现其相关基因节段编码更多蛋白的能力。2012年发现流感病毒M基因可以编码一种新的蛋白,即M42蛋白。论文将对甲型流感病毒M基因所编码的M1、M2及M42这3种病毒蛋白的研究概况进行综述。

优化的套式核酸体外扩增方法用于甲型流感病毒快速诊断的研究

目的临床上对流感的有效控制与治疗在于实验室快速与准确的诊断,这对于指导用药和避免滥用抗生素具有重要意义。RT_PCR在流感病毒检测中特异性和灵敏度较强,nestedmultiplexRT_PCR法可以在此基础上提高灵敏度。实验的目的是应用分子生物学方法对流感病毒进行快速诊断。方法我们结合流感病毒M基因、NS基因、HA基因的结构和进化特性设计多元引物达到流感病毒的型和亚型准确与快速的鉴定。结果甲型流感病毒以M基因保守区域设计引物,PCR后电泳带为413bp;甲型流感病毒以HA基因分亚型,H1N1亚型PCR后电泳带为348bp,H3N2亚型PCR后电泳带为291bp,H5N1亚型PCR后电泳带为326bp。结论应用优化的套式核酸体外扩增方法进行流感病毒的型与亚型的诊断是比较快速的,且所需要的病毒量少(0.01～0.1TCID50),灵敏度较高。

以人乳头瘤病毒16 L1为载体的流感通用疫苗初步研究

目的构建以人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）16 L1为载体的甲型流感病毒M2基因胞外区（M2e）通用疫苗杆粒，利用昆虫细胞杆状病毒表达系统，进行初步的蛋白表达。方法利用PCR技术将甲型流感病毒M2e基因序列与HPV16 L1相连。经酶切、酶联将融合基因插入pFastBac HTA载体，在DH10Bac细胞中进行同源重组，经测序鉴定后构建M2e-HPV16 L1杆粒，脂质体转染sf9昆虫细胞，收获并扩增含有M2e-HPV16 L1的杆状病毒，经扩增后获得高效价的重组杆状病毒，用SDS-PAGE、免疫荧光法和电镜检测目的蛋白的表达。结果构建了以HPV16 L1为载体的M2e通用疫苗杆粒，通过转染sf9昆虫细胞得到初步M2e-HPV16 L1融合蛋白表达。结论成功构建了HPV16 L1与甲型流感病毒M2e融合蛋白的病毒样颗粒，为流感通用疫苗的研制奠定了基础。