三种ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体比较

目的比较国内常用商品化ELISA试剂盒检测猪流行性乙型脑炎病毒血清IgG抗体的诊断效果。方法选用3种猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒(Keqian,Lvshiyuan,Tianchen),以微量中和试验为金标准,对90份猪血清进行检测分析。结果中和试验的阳性检出率为34.4%(31/90),Keqian,Lvshiyuan和Tianchen阳性检出率分别为50.0%(45/90),47.8%(43/90)和38.9%(35/90)。灵敏度最高的是Keqian,为90.32%,但其特异度只有71.19%;Tianchen的灵敏度和特异度分别为83.87%和79.66%;Lvshiyuan的灵敏度和特异度分别仅为41.94%和16.95%。与中和试验比较,Tianchen试剂盒的κ系数最高为0.63,其次是Keqian为0.57,Lvshiyuan仅为0.04。显示3种试剂盒具稳定性。结论目前国内商品化猪乙脑病毒血清IgG抗体ELISA检测试剂盒诊断结果差异较大,与中和试验相比存在较高的假阴性,质量有待提高。

猪流行性乙型脑炎的诊断与防治

我国猪养殖业规模越来越大,在养殖过程中难免会发生猪流行性乙型脑炎疾病,该疾病具有极高的致死率,一旦发生感染将影响猪的正常生长,降低了养猪户的经济利益。因此,对该病及早诊断并采取科学的防治措施尤为重要,本文主要对猪流行性乙型脑炎进行研究,阐述了该病的诊断方法以及具体的防治措施,以此减少猪流行性乙型脑炎的发生几率。

猪流行性乙型脑炎的诊断与预防

【目的】探讨猪流行性乙脑(又名“日本乙型脑炎”)的防治策略,为猪场疫病防控提供借鉴和参考,以保障猪场稳定生产。【方法】基于对猪流行性乙型脑炎的全面分析,总结其流行病学特征:妊娠母猪感染乙脑会表现流产或早产,新生仔猪可能表现出全身性痉挛,公猪在高热后会出现睾丸肿胀。提出其主要的诊断方法是通过细菌学和病毒学检测进行确定。【结果】猪流行性乙脑的治疗措施主要为康复猪血清或抗血清的应用、加强饲养管理、降低颅内压、利尿解毒和使用免疫增强剂等。【结论】作为一种严重的人畜共患传染病,猪流行性乙脑在亚洲各国包括中国的部分地区广泛存在。为有效控制猪流行性乙脑的传播,猪场需加强对其病原学特点和传播方式的认识,采取免疫接种、灭蚊和做好人员防护等措施进行综合防控。

猪流行性乙型脑炎流行特点趋势以及防控要点概述

我国目前猪养殖业发展迅速,由于养殖量扩大和饲养密度增加,随之而来的就是猪传染病发生率逐年提高,而猪流行性乙型脑炎是人畜共患病,该病引起母猪繁殖障碍和生产性能下降,对我国猪养殖业造成的危害极大。通过对猪流行性乙型脑炎流行特点、流行趋势、临床症状、剖检变化、实验室诊断、治疗与预防措施等方面进行综合概述,为今后在临床上有效预防该病的发生提供基础依据。

流行性乙型脑炎患者血清IgG抗体对乙脑病毒蛋白的识别

目的：了解流行性乙型脑炎病毒各蛋白成分在刺激机体免疫应答方面所起的作用，给亚单位疫苗研制提供理论依据，进行该项研究。方法：建立乙脑病毒免疫转印方法，应用该法检查乙脑病人血清IgG抗体对乙脑病毒蛋白的反应情况，分析正常人群中筛选出的乙脑病毒隐性感染者血清IgG对乙脑病毒蛋白的反应性，并比较二者的差异。结果：经检测，绝大部分病人血清IgG可识别E蛋白，部分病人尚可识别NS5，NS3，NS1蛋白，而隐性感染者血清IgG对98kd（NS5）乙脑病毒蛋白的反应性显著低于乙脑患者。结论：研究结果显示，E蛋白是乙脑病人血清IgG识别的主要蛋白，在免疫保护方面起着主要作用。隐性感染者对NS5蛋白的反应机率明显低于显性感染者，提示NS5蛋白在乙脑病毒的致病过程中起重要作用。

hs-CRP、PCT、IL-6、CSF及头颅MRI+DWI+Flair检查对流行性乙型脑炎诊断价值的研究

目的探究超敏C反应蛋白(hs-CRP)、降钙素原(PCT)、白介素-6(IL-6)、脑脊液(CSF)及头颅磁共振成像+弥散加权成像+水抑制成像(MRI+DWI+Flair)检查对流行性乙型脑炎的诊断价值。方法选择2016年1月至2021年12月就诊于天水市第一人民医院神经内一科的流行性乙型脑炎患者50例,病毒性脑炎患者50例,通过对两组患者血常规、hs-CRP、PCT、IL-6、CSF、头颅MRI+DWI+Flair对比研究,明确上述指标对流行性乙型脑炎的诊断价值。结果流行性乙型脑炎患者和病毒性脑炎患者的血常规白细胞数目、中性粒细胞数目、淋巴细胞数目比较,差异有统计学意义(P<0.05),hs-CRP、PCT、IL-6、CSF结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。头颅MRI+DWI+Flair检查提示流行性乙型脑炎病灶以中线受累为著,丘脑、脑干、颞叶、海马受累多见,基底节、侧脑室次之。丘脑、海马、脑干、侧脑室旁病灶在流行性乙型脑炎与病毒性脑炎中差异有统计学意义(P<0.05)。结论血常规、hs-CRP、IL-6、PCT、CSF可作为筛查中枢神经系统感染的指标,头颅MRI+DWI+Flair检查是诊断流行性乙型脑炎的特异性指标,根据其特殊的受累部位,结合其T2、DWI、Flair、ADC图可进一步明确病灶性质,对疑诊患者尽早行头颅影像学评估,可尽早明确诊断,早治疗,最大程度改善患者预后。

5例流行性乙型脑炎儿童继发自身免疫性脑炎的临床分析

目的探讨儿童流行性乙型脑炎(epidemicencephalitisB,EEB)继发自身免疫性脑炎(autoimmune encephalitis,AE)的临床特征。方法 回顾性分析2020年1月-2022年6月在郑州大学附属儿童医院住院治疗的5例“双相病程”EEB患儿的临床资料。结果 5例患儿,男3例,女2例;中位发病年龄为7岁(范围:3岁9个月至12岁),EEB发病至AE症状出现中位间隔时间为32 (范围:25~37) d。AE期主要症状为运动障碍(5/5)、低热(4/5)、精神行为异常(4/5)、抽搐(2/5)、意识障碍加重(2/5)、肢体无力(1/5)。与EEB急性期头颅磁共振成像结果相比,AE期病灶扩大3例,无变化2例。AE期4例抗N-甲基-D-天冬氨酸受体抗体阳性,其中1例合并抗γ-氨基丁酸B型受体抗体阳性;1例AE抗体均阴性。5例患儿AE期免疫治疗均有效,随访3个月,1例基本恢复正常,4例遗留神经功能障碍。结论 EEB可诱发AE,以抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎最常见,AE期症状与经典抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎类似,免疫治疗有效,预后可能与EEB期神经功能障碍有关。

中国流行性乙型脑炎病毒分子生物学特性研究

为了从分子水平了解中国流行性乙型脑炎(乙脑)病毒与国外分离株的差异,对1949年以来在中国乙脑主要流行地区分离的19株乙脑病毒的PrM C区及E蛋白基因区的核苷酸序列进行了对比研究,以期了解不同时间不同地区在中国流行的乙脑病毒的分子差异。结果显示:病毒生物学初步鉴定显示,病毒感染BHK细胞后56h所有细胞均发生病变,约50%以上细胞脱落(CPE );3日龄乳鼠接种病毒72h之内死亡;所有病毒均与乙脑病毒(A2株)抗血清发生阳性反应,但反应强度不同,提示所有病毒均为乙脑病毒。病毒PrM C(456～695)区核苷酸序列与各个国家及地区、各个基因型以及各个年代的73株乙脑病毒相应序列,用Woan RuChen建立的方法进行基因分型分析,结果显示,所有19株中国分离的病毒均属于基因型Ⅲ型,与国外相关文献所报道的乙型脑炎病毒中国分离株的基因型相符。以乙型脑炎病毒疫苗株P3株为标准,对各病毒E蛋白500个氨基酸序列进行分析。各毒株核苷酸差异在0和4 2%之间,氨基酸差异在0和4 0%之间。所有核苷酸差异均为碱基的替换,无论核苷酸或氨基酸均无插入或丢失。大多数核苷酸变异在氨基酸编码的第三位,属于沉默突变,不引起氨基酸变化。18株病毒E蛋白活性结构域与疫苗株P3株相比共有247个氨基酸的差异,平均每株病毒有12 35个氨基酸的差异,?

流行性乙型脑炎病毒(JEV)全长感染性克隆的制备及恢复病毒的获得

根据JEV病毒减毒株SA14-14-2基因组序列,设计覆盖全长的4对重叠引物,以提取的活疫苗病毒RNA为模板,RT-PCR扩增出4个片段,并克隆到质粒载体中,进一步构建两个半端分子克隆,然后将全长cDNA序列克隆到一个新改造的低拷贝质粒载体pBR-kpn中,构建我国流行性乙型脑炎病毒(JEV)基因组全长cDNA克隆。经过体外转录后得到的转录子转染BHK-21细胞,重新获得JEV的恢复病毒,通过生物学特性、分子生物学水平、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定。结果获得了稳定的全长cDNA克隆,转录子转染BHK-21细胞后,第4天开始出现细胞病变(CPE),第6～7天时CPE为 ,经过Vero细胞进一步放大培养后,间接免疫荧光实验和RT-PCR实验均为阳性。证实了构建的JEV的全长cDNA克隆有感染性,为进一步的研究奠定了基础。

抗流行性乙型脑炎病毒药物的研究进展

流行性乙型脑炎(Japanese Encephalitis,JE)是由黄病毒科(Flaviridae)黄病毒属(Flavivirus)流行性乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)引起的,在自然界中主要以猪为宿主,经蚊传播的一种蚊媒性人兽共患传染病。该病主要流行于亚洲及西太平洋地区,严重威胁着人类健康,已成为人类脑炎疾病最主要的病因之一,并影响养猪业的发展,引起了世界性的广泛关注,因此,流行性乙型脑炎的防治研究有着重要的实际应用意义。到目前为止,尚无治疗流行性乙型脑炎特效药面市,但对抗流行性乙型脑炎病毒药物的研究已有一定的进展,而我国在这方面的系统介绍较少,本文就近10年来抗流行性乙型脑炎药物及其作用机制的研究进展做一综述,旨在为流行性乙型脑炎的预防和治疗提供参考。

猪伪狂犬病、猪细小病毒病和猪流行性乙型脑炎检测基因芯片的制备及检测方法研究

对猪伪狂犬病(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒病(Porcine parvovirus,PPV)和猪流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis virus,JEV)检测基因芯片的制备及该芯片的检测方法进行了研究。试验克隆和鉴定了16个芯片靶基因,经筛选,取其中13个靶基因PRV gB、gG、TK和gE;PPV NS2、NS3、VP1和VP2以及JEV C、PrM/M、E、NS1和NS5制备PRV、PPV和JEV检测基因芯片,基因芯片点样系统SpotArrayTM 24将靶基因点样于氨基化玻片表面,靶基因最佳点样浓度为200 ng/μL,探针扩增标记反应体系中,Cy3-dCTP使用终浓度为2.5μmol/L,芯片杂交温度可在44℃～60℃之间任意选择。以PRRSV、CSFV、PCV1、PCV2、TGEV、HPS、PAP、E.coli和S.pp菌毒株DNA或CDNA为模板标记制备的探针均不与PRV、PPV、和JEV检测基因芯片杂交,芯片检测的灵敏度为3 pg/μL,芯片批间重复性好,同一张芯片可进行至少10次的重复杂交。该方法对8株PRV、5株PPV和JEV SA14-14-2单独或混合样品检测均为阳性,可区分伪狂犬病病毒野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品单独或混合感染的检出率分别为:单独感染PRV检出率15%(3/20),PPV 5%(1/20),JEV 0%(0/20);PRV和PPV混合感染检出率15%(3/20),PRV和JEV混合感染检出率5%(1/20),JEV和PPV混合感染检出率5%(1/20),三者混合感染的检出率5%(1/20)。与PRV、PPV和JEV多重PCR检测方法比较,芯片检测的灵敏度大大提高,同时可区分PRV野毒和基因缺失疫苗毒,对20份临床样品的检出率一致。

蝙蝠作为流行性乙型脑炎病毒宿主的研究

于 1 98 6、1 988、1 990和 1 997年的 7-8月 ,在云南省共捕获 653只蝙蝠 ,其中棕果蝠( Rousettus leschenaulti) 593只 ,金管鼻蝠( Murina aurata) 60只 ,采集血清及剖取脑组织作病毒分离和抗体检查。用细胞法和乳鼠法分离到 6株病毒 ,带毒率为 0 .96% ,其中从捕自景洪的棕果蝠脑组织中分离到 3株 ,从河口的棕果蝠血清中分离到 2株 ,从捕自耿马的金管鼻蝠脑组织中分离出 1株。棕果蝠和金管鼻蝠的带毒率分别为 0 .84%和 1 .67%。这 6株病毒能引起 C6/ 3 6和 BHK2 1细胞病变和导致乳小白鼠或 3～ 4周龄小白鼠发病和死亡 ,并具有典型的嗜神经病毒感染症状。经血凝抑制、补体结合、免疫荧光和中和试验鉴定 ,新分离的 6株病毒均为乙脑病毒 ( JE virus)。同期用血凝抑制试验对采获的 42 5份棕果蝠血清作乙脑病毒抗体检查 ,阳性 1 53份 ,阳性率为 3 6% ,具有较高的感染率。本次从棕果蝠和金管鼻蝠体内分离出乙脑病毒属具有重要流行病学意义。

开江县2002-2006年猪流行性乙型脑炎病毒感染监测

目的探讨开江县猪流行性乙型脑炎（乙脑）病毒感染强度和感染时间分布，为乙脑防制提供科学依据。方法2002-2006年6—7月上、中、下旬在开江县新宁镇肉联厂采集本地8月龄的屠宰猪血清，采用酶联免疫法（ELISA）进行乙脑抗体IgG检测，阳性计为感染猪。结果5年共采集猪血清592份，乙脑抗体阳性194份，阳性率为32．77％。2002-2006年抗体阳性率分别为43．41％、24．17％、26．89％、4．62％及75．53％，之间差异有统计学意义（X^2=137．32，P〈0．01），感染高峰时间2002-2005年在7月中、下旬，2006年在6月中旬，比前4年早30-40d。结论根据2002-2006年猪乙脑病毒感染率和感染高峰时间，可以预测人间乙脑流行强度和发病高峰时间。由此，可早期做好乙脑防制措施，控制其发病和流行。

猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析

利用RT-PCR技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析,从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒(JEV)M基因和E基因具有高度同源性的预期产物。在3日龄乳鼠脑内接种种猪精液上清,10 d左右即出现典型神经症状,并且病死鼠脑组织RT-PCR结果均为阳性。用病死鼠脑组织研磨上清接种BHK-21细胞,感染60 h后用JEV单抗进行间接免疫荧光鉴定均为阳性,这表明分离毒株均为JEV流行毒株,分别命名为BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3。对新分离毒株进行体外细胞培养,BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3连续传代3次后病毒量均获得明显增加,最高分别可达104.5±0.1TCID50/mL和104.2±0.2TCID50/mL。用生物学软件MEGA 4.0分别构建JEV基因的系统进化树,发现BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3处于同一进化分支,均属于基因Ⅲ型。

伪狂犬病病毒、猪细小病毒和流行性乙型脑炎病毒检测基因芯片的制备

对伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和流行性乙型脑炎病毒(JEV)检测基因芯片的制备及该芯片的检测技术进行了研究。选定靶基因最佳点样质量浓度为200 mg/L,用基因芯片点样仪将其点制在氨基化基片上,经干燥、水合、紫外线交联和洗涤后,成功制备了PRV-PPV-JEV检测基因芯片。以CY3荧光素标记的dCTP经PCR扩增制备探针,对芯片的质量进行了评价。结果表明,制备的芯片质量好,探针最佳使用质量浓度为3 000μg/L,芯片系统检测灵敏度可达3μg/L。该芯片可同时检测PRV、PPV和JEV,其灵敏度高、特异性强,芯片可重复使用,室温下至少可保存4个月。

中国首次分离的二株基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒全基因组序列分析（英文）

目的分析中国首次分离的基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒(JEV)全基因组的基因组特征。方法设计JEV全基因组扩增引物,RT-PCR扩增片断,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因组序列。采用生物学软件进行同源性和系统进化分析。结果 1977和1982年分离自云南蚊虫的M28和BN82215病毒株基因组全长分别为10 969bp和10 970bp,5′非编码区均含有96个核苷酸,3′非编码区含有573和574个核苷酸。它们的开放阅读框(ORF)都从97到10 396位,共10 299个核苷酸,编码3 433个氨基酸。M28和BN82215株与来自GenBank的5个基因型JEV株的全基因组核苷酸和氨基酸同源性分别为78.4%~96.3%和91.4%~99.6%,与近几年国内外基因Ⅰ型流行株的同源性最高,进化关系最接近,都属于基因Ⅰ型。这两株病毒与JEV疫苗株SA14-14-2相比,有56个氨基酸差异,其中E基因有11个氨基酸差异,但都不属抗原关键位点。结论本研究阐明了中国首次分离的基因Ⅰ型JEV的全基因组分子特征,决定病毒抗原和毒力的E蛋白关键位点无明显变化。证实20世纪70和80年代云南省就有基因Ⅰ型JEV流行。

儿童流行性乙型脑炎血清和脑脊液抗体检测的研究

目的：探讨流行性乙型脑炎时血清和脑脊液乙脑抗体IgM（抗JEV-IgM）检测的诊断价值。方法：采用抗体捕获法测定182例乙脑住院病人血清和脑脊液抗JEV-IgM，并分析它与病程、年龄、病型的关系。结果：乙脑病人血清和脑脊液抗JEV-IgM检出的阳性率分别为61.87%、86.67%，且后者明显高于前者（P<0.005）；不同病程、年龄、病型血清和脑脊液抗JEV-IgM的阳性率无显著差异（P>0.05）。结论：用抗体捕获法检测血清和脑脊液抗JEV-IgM对流行性乙型脑炎有早期诊断的价值，且该方法特异性高、敏感性强。

干扰素对流行性乙型脑炎病毒的抑制作用

目的：研究干扰素对流行性乙型脑炎病毒的抑制作用，为临床应用提供理论依据。方法：运用病毒滴定法，在培养病毒增殖系中投入干扰素（IFN），观察其对病毒增殖的影响。结果：用IEN300IU·ml-1处理后病毒产生量在人肝癌细胞HepG2和人神经母细胞瘤细胞株IMR-32中分别为对照的14％和1．6％。结论：IFN对乙脑病毒的增殖有显著阻碍作用。

珠海地区蚊媒携带流行性乙型脑炎病毒的研究

目的了解珠海地区蚊媒携带流行性乙型脑炎(乙脑)病毒情况,为控制乙脑在人群中的流行提供依据。方法采集成蚊进行鉴定,并对蚊悬液采用细胞培养、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)以及荧光定量PCR技术进行病毒鉴定,并进行克隆与序列测定。结果2005年全年在养猪场共捕获成蚊876只,经鉴定隶属4属8种,其中以三带喙库蚊(35.73%)、致倦库蚊(32.54%)和海滨库蚊(21.35%)为主。在珠海各口岸捕获的542只蚊样本中,则以白纹伊蚊为主,占82.47%,其次为致倦库蚊,占16.25%。应用荧光定量PCR技术,在珠海地区注册养猪场和口岸的蚊媒中检出1份乙脑病毒阳性样本,但强度较弱,这与珠海地区是乙脑低发地区相一致。结论珠海地区存在乙脑的主要传播媒介,并且在蚊媒中携带有乙脑病毒,提示不能放松对乙脑的防控工作。