猪流行性乙型脑炎病毒一步法RT-PCR的建立及达州市猪流行性乙型脑炎病毒流行病学调查与分析

为了建立一种快速检测猪流行性乙型脑炎病毒(Janpanese encephalitis virus,JEV)的病原学检测方法,并掌握达州市JEV的感染情况,试验根据GenBank中JEV E基因序列设计1对检测引物,建立一步法RT-PCR,并对退火温度(50,52,54,56,58℃)、模板添加量(1,2,4,6,8μL)、引物添加量(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8μL)进行优化,考察方法的特异性、敏感性、重复性、符合性,同时对2017-2020年分别采集于达州市7个市(县、区)的243份样品进行JEV检测,对检测结果进行不同地区、不同年份、不同季节、不同饲养方式下猪群中JEV阳性率的比较分析。结果表明:优化后的一步法RT-PCR扩增体系为2×Step Buffer 12.5μL,上下游引物(20μmol/L)各0.4μL,RNA(68 ng/μL)4μL,H2O 7.7μL。扩增程序为50℃30 min;95℃5 min;94℃40 s,54℃40 s,72℃40 s,30个循环;72℃10 min;4℃终止反应。该方法能够特异性扩增JEV,而检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均为阴性,对JEV RNA的检测灵敏度为27.2 pg,对JEV、CSFV、PRRSV、PEDV、TGEV、PRV、PCV-2、PPV、3份JEV阳性病料、3份JEV阴性病料重复检测3次的结果完全一致,检测243份猪临床病料样品的平均阳性率为9.05%,其中不同地区阳性率为3.45%~13.04%,2017,2018,2019,2020年阳性率分别为5.77%、6.90%、10.29%和12.31%,夏季和冬季的阳性率分别为13.33%和5.17%,规模化养猪场和散养户的阳性率分别为5.94%和11.27%,说明建立的JEV一步法RT-PCR具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,达州市JEV的流行存在个别地区感染情况较严重、2019年和2020年感染情况较2017年和2018年严重、夏季感染情况较冬季严重、散养户感染情况较规模化养猪场严重等特点。

北京地区野生水禽禽流感流行病学调查与分析

为正确评估野生水禽在禽流感流行病学调查中的作用,于2012年8月至2012年12月间对北京地区的200只野禽进行了粪便样品的采集。采用荧光RT-PCR试验和病毒分离试验对粪便样品进行了病原学检测,检测结果均为阴性。

青海省海北州牦牛血清BVDV、IBRV流行病学调查

为了掌握青海省海北州牦牛血清中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的流行情况,本试验分别采用ELISA方法和PCR方法对2015—2019年采集于青海省海北州的336份牦牛血清样品进行了BVDV和IBRV的抗体和抗原检测。结果表明,2015—2019年BVDV抗体阳性率分别为11.11%、17.19%、22.06%、26.67%和29.76%,IBRV抗体阳性率分别为8.89%、12.50%、13.24%、18.67%和19.05%,BVDV/IBRV抗体混合阳性率分别为0、3.13%、5.88%、6.67%和8.33%,BVDV阳性感染率分别为11.11%、14.06%、16.18%、20.00%和20.24%,IBRV阳性感染率分别为8.89%、9.38%、10.29%、14.67%和19.05%,BVDV/IBRV混合感染率分别为0、3.13%、4.41%、5.33%和5.95%。因此,自2015年开始青海省海北州牦牛群中存在BVDV和IBRV的流行,且BVDV和IBRV阳性感染率自2015—2019年存在逐步升高的趋势,尤其是2018年和2019年的BVDV和IBRV阳性感染率升高幅度均较大。