长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1参与盆腔器官脱垂的机制

背景:作者所在课题组前期通过高通量测序结果发现长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1在盆腔器官脱垂患者子宫主韧带中表达明显降低,转化生长因子β1信号通路也是相关通路之一。目的:观察长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1对盆底韧带成纤维细胞的影响,探讨其在盆腔器官脱垂疾病发病机制中的可能作用。方法:提取大鼠盆底韧带组织标本,分离成纤维细胞,进行原代培养。慢病毒构建长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1干扰和过表达载体加入成纤维细胞中。通过免疫荧光、MTT、细胞划痕实验、流式细胞术来检测成纤维细胞的形态、增殖、迁移和凋亡情况;RT-PCR和Western-blot检测转化生长因子β1、smad2/3、c-Myc的mRNA及蛋白表达情况。结果与结论:①长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1过表达时可显著促进成纤维细胞的增殖,提高细胞的迁移能力,抑制成纤维细胞凋亡;长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1干扰时结果相反;②此外,长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1过表达时细胞中的c-Myc、转化生长因子β1、smad2/3的mRNA和蛋白相对表达量均明显增加,其干扰时则显著抑制c-Myc和转化生长因子β1的表达;③提示长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1能够影响成纤维细胞的形态和生物学功能,可能与转化生长因子β1/smad2/3/c-Myc通路有关;该研究可为盆腔器官脱垂患者的临床诊断和治疗提供新思路。

长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位1靶向微RNA-140-5p调控肺癌细胞增殖凋亡及自噬的分子机制

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变异易位1(PVT1)对肺癌细胞增殖、凋亡及自噬的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR检测人肺癌细胞A549、人正常肺上皮细胞BEAS-2B中LncRNA PVT1、微RNA(miR)-140-5p的表达;将A549细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-PVT1组(转染si-PVT1)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-140-5p组(转染miR-140-5pmimics)、si-PVT1+anti-miR-NC组(si-PVT1和anti-miR-NC共转染)、si-PVT1+anti-miR-140-5p组(si-PVT1和anti-miR-140-5p共转染),均以脂质体法转染;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;免疫印迹检测各组细胞中LC3Ⅱ和Ⅰ的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与BEAS-2B细胞相比,A549细胞中PVT1表达升高(1.73±0.14比0.86±0.08,P<0.05),miR-140-5p表达降低(0.43±0.04比1.06±0.12,P<0.05);与si-NC组相比,si-PVT1组A549细胞中PVT1表达降低(P<0.05),细胞抑制率和凋亡率均升高(均P<0.05),LC3Ⅱ蛋白表达降低(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白表达升高(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-140-5p组A549细胞中miR-140-5p表达升高(P<0.05),细胞抑制率和凋亡率升高(均P<0.05),LC3Ⅱ蛋白表达降低(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白表达升高(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低(P<0.05)。PVT1靶向miR-140-5p。与si-PVT1+anti-miR-NC组相比,si-PVT1+anti-miR-140-5p组A549细胞中细胞抑制率和凋亡率降低(均P<0.05),LC3Ⅱ蛋白表达降低(P<0.05),LC3Ⅰ蛋白表达升高(P<0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低(P<0.05),抑制miR-140-5p可逆转敲减PVT1对A549细胞增殖、凋亡及自噬的作用。结论PVT1可促进肺癌细胞的增殖和自噬,抑制凋亡,其机制可能与靶向miR-140-5p有关,将可为肺癌的靶向治疗提供依据。

LncRNA PVT1在非小细胞肺癌中的表达及其与脑转移的相关性

目的探讨长非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤变异易位1(PVT1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达情况,并分析其与脑转移的关系。方法选取2018年1月至2022年6月在南京市溧水区人民医院就诊并确诊为NSCLC患者95例为研究对象,根据是否发生脑转移,分为发生脑转移组(n=40)和未发生脑转移组(n=55);随机选取同期健康人群50例为对照组。收集临床资料,采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清及癌组织中lncRNA PVT1水平,Spearman法分析血清lncRNA PVT1表达水平与脑转移发生的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清lncRNA PVT1水平对NSCLC患者发生脑转移的诊断价值;采用多因素Logistic回归分析NSCLC患者发生脑转移的影响因素。结果与未发生脑转移组比较,发生脑转移组患者血清及癌组织中lncRNA PVT1水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,血清中lncRNA PVT1水平与NSCLC患者脑转移呈正相关(r=0.618,P<0.05);ROC曲线结果显示,血清lncRNA PVT1水平诊断诊断NSCLC患者发生脑转移的曲线下面积为0.859(95%CI 0.773~0.922),灵敏度为80.00%,特异度为87.27%;多因素Logistic回归分析结果显示,lncRNA PVT1、临床分期、淋巴结转移、分化程度均与NSCLC患者发生脑转移有关(P<0.05)。结论发生脑转移的NSCLC患者血清及癌组织中lncRNA PVT1表达水平升高,检测血清lncRNA PVT1表达水平可用于诊断NSCLC患者脑转移的发生。

血清lncRNA ANRIL、lncRNA PVT1水平与急性呼吸窘迫综合征患儿病情及预后的关系

目的探究血清长链非编码RNA INK4位点反义非编码RNA(lncRNA ANRIL)、长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位基因1(lncRNA PVT1)水平与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿病情及预后的关系。方法选取124例确诊的ARDS患儿为患病组,另选取124例同期体检健康者为对照组。ARDS患儿根据病情严重程度分为重度组(34例)、中度组(42例)和轻度组(48例);ARDS患儿根据预后情况分为预后不良组(55例)和预后良好组(69例)。采用荧光定量聚合酶链反应测定血清中lncRNA ANRIL、lncRNA PVT1水平。采用Logistic回归分析法分析ARDS患儿发生预后不良的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA ANRIL、lncRNA PVT1水平对ARDS患儿发生预后不良的预测价值。结果患病组的血清lncRNA ANRIL、lncRNA PVT1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度组、中度组和重度组的血清lncRNA ANRIL、lncRNA PVT1水平随病情严重程度升高(P<0.05)。预后不良组的血清lncRNA ANRIL、lncRNA PVT1水平、氧合指数(OI)、呼吸频率、急性生理与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);OI、呼吸频率、lncRNA ANRIL、lncRNA PVT1为患儿发生预后不良的影响因素(P<0.05)。血清lncRNA ANRIL、lncRNA PVT1水平预测ARDS患儿发生预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.827、0.737,截断值分别是11.35、4.36,二者联合预测的AUC为0.876。二者联合预测的AUC优于血清lncRNA ANRIL、lncRNA PVT1水平单独预测(P<0.05)。结论ARDS患儿的血清lncRNA ANRIL、lncRNA PVT1水平均上调,且lncRNA ANRIL、lncRNA PVT1为患儿发生预后不良的影响因素,二者联合预测的价值较高。

2型糖尿病并发白内障患者血清lncRNA PVT1和lncRNA MALAT1的表达及临床价值

目的探究长非编码RNA浆细胞瘤变异易位1(lncRNA PVT1)和转移相关肺腺癌转录物1(lncRNA MALAT1)在2型糖尿病(T2DM)并发白内障患者血清中的表达及其临床价值。方法收集2021年12月至2022年12月监利市人民医院收治的52例T2DM并发白内障患者为试验组,以及同期收治的52例无任何并发症的T2DM患者作为对照组。收集研究对象临床资料;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测所有受试者血清中lncRNA PVT1和lncRNA MALAT1的表达;logistic回归分析T2DM并发白内障的影响因素;Pearson法分析血清lncRNA PVT1和lncRNA MALAT1水平与T2DM并发白内障影响因素的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA PVT1和lncRNA MALAT1水平对T2DM并发白内障的诊断价值。结果与对照组相比,试验组年龄、糖尿病病程、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、lncRNA PVT1和lncRNA MALAT1水平均明显升高(P<0.05);logistic回归分析发现,年龄大、糖尿病病程久,FBG、HbA1c、HOMA-IR、lncRNA PVT1、lncRNA MALAT1水平高均为T2DM并发白内障的危险因素(P<0.05);Pearson相关性分析显示,血清lncRNA PVT1水平与年龄、糖尿病病程、FBG、HbA1c、HOMA-IR均呈正相关(r=0.672、0.634、0.542、0.685、0.591,P<0.05),lncRNA MALAT1水平与上述指标也均呈正相关(r=0.583、0.629、0.673、0.604、0.617,P<0.05);血清lncRNA PVT1和lncRNA MALAT1二者联合的诊断价值优于单独诊断(Z_(PVT1-二者联合)=2.115,P=0.035;Z_(MALAT1-二者联合)=2.316,P=0.021)。结论LncRNA PVT1和lncRNA MALAT1在T2DM并发白内障患者血清中的表达升高,二者联合对这类患者的诊断价值优于单独诊断。

长链非编码RNA PVT1异常表达对肝癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位基因1(PVT1)对肝细胞癌(HCC)细胞增殖和迁移侵袭过程的影响及潜在调控机制。方法检测HCC肿瘤组织和细胞中PVT1和微小RNA-488-3p(miR-488-3p)的表达水平。将MHCC97-H细胞分为Control组(空白未处理)、siRNA组(转染阴性对照siRNA-NC)、siRNA-PVT1组(干扰PVT1表达)和siRNA-PVT1+miR-488-3p inhibitor组(干扰PVT1表达同时抑制miR-488-3p表达)。MTT、划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测MHCC97-H细胞的增殖、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证PVT1与miR-488-3p之间的靶向关系。结果PVT1在HCC组织和细胞中表达水平增高(P<0.05),miR-488-3p在HCC组织和细胞中表达水平降低(P<0.05)。与siRNA组相比,siRNA-PVT1组MHCC97-H细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数量均降低(P<0.05);与siRNA-PVT1组相比,siRNA-PVT1+miR-488-3p inhibitor组MHCC97-H细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数量均增加(P<0.05)。PVT1能够靶向负调控miR-488-3p。结论PVT1在HCC组织和细胞系中异常高表达,干扰PVT1表达可能通过上调miR-488-3p表达抑制HCC的增殖、迁移和侵袭。

长链非编码RNA-PVT1表达与消化系统恶性肿瘤预后及临床病理关系的meta分析

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)-浆细胞瘤变异易位1(PVT1)表达与消化系统恶性肿瘤患者的临床病理特征和预后的关系。方法检索Web of Science、EMBASE和PubMed数据库,检索时间截至2021年1月。根据检索策略及纳入、排除标准对文章进行筛选,并提取相关数据。使用RevMan v5.3进行meta分析。结果本研究共纳入了32项研究,2873例患者。meta分析结果示:高表达PVT1与较差的总生存期(HR=1.71,95%CI:1.54~1.89,P <0.000 01)和无病生存期(HR=1.95,95%CI:1.67~2.29,P <0.000 01)有关。PVT1高表达与肿瘤直径(OR=2.02,95%CI:1.43~2.86,P <0.0001)、TNM分期(OR=3.42,95%CI:2.86~4.08,P <0.000 01)、淋巴结转移(OR=3.04,95%CI:2.41~3.84,P <0.000 01)、肿瘤分化(OR=1.81,95%CI:1.21~2.72,P=0.004,P <0.001)、远处转移(OR=2.91,95%CI:2.06~4.11,P <0.000 01)和浸润深度(OR=5.19,95%CI:3.52~7.66,P <0.000 01)呈正相关。结论 PVT1可以用来评估消化系统恶性肿瘤患者的临床病理特征和预后。

LncRNA PVT1在肝癌中的研究进展

肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,死亡率亦很高,给我们国家带来了极大的经济社会负担。近年的研究发现长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)参与了肝癌的细胞增殖、迁移、侵袭、转移等过程。本文对lncRNA浆细胞瘤变异易位基因1(plasmacytoma variant translocation gene 1,PVT1)概述的基础上,重点阐述lncRNA PVT1在肝癌的发生、进展、转移等方面的作用。

血清lncRNA PVT1和miR-181-5p表达与支气管哮喘患儿气道炎症及肺功能的相关性分析

目的探讨长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位基因1(lncRNA PVT1),微小RNA-181-5p(miR-181-5p)在支气管哮喘患儿中的表达及与气道炎症及肺功能的相关性。方法选取2021年1月至2022年6月本院收治的118例支气管哮喘患儿为研究对象,其中急性发作期组71例,缓解期组47例。同期选取年龄、性别相匹配的50例健康体检者为对照组。收集一般资料,使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测患儿血清lncRNA PVT1、miR-181-5p水平。Pearson法分析lncRNA PVT1、miR-181-5p与气道炎症及肺功能指标的相关性,采用ROC曲线分析血清lncRNA PVT1、miR-181-5p对支气管哮喘患儿的诊断价值。结果急性发作期患儿血清中lncRNA PVT1表达水平高于缓解期患儿及对照组,miR-181-5p表达水平低于缓解期患儿及对照组,差异有统计学意义(P<0.05);急性发作期患儿血清中hs-CRP、TNF-β、IFN-γ、IL-6、IL-17、IgE、EOS水平均高于缓解期患儿及对照组,FEV1、FEV1%、PEF水平低于缓解期患儿及对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson法分析结果显示,支气管哮喘患儿血清中lncRNA PVT1与miR-181-5p表达呈负相关(r=-0.528,P<0.05);支气管哮喘患儿血清lncRNA PVT1水平与hs-CRP、TNF-β、IFN-γ、IL-6、IL-17、IgE、EOS表达呈正相关(P<0.05),与FEV1、FEV1%、PEF呈负相关(P<0.05);血清miR-181-5p水平与hs-CRP、TNF-β、IFN-γ、IL-6、IL-17、IgE、EOS表达呈负相关(P<0.05),与FEV1、FEV1%、PEF正相关(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清lncRNA PVT1、miR-181-5p水平诊断支气管哮喘患儿的AUC分别为0.885、0.896,二者联合诊断的AUC为0.947,高于单一指标检测,差异具有统计学意义(Z=2.264,P=0.024,Z=2.413,P=0.016)。结论lncRNA PVT1在支气管哮喘患儿血清中呈高表达,miR-181-5p呈低表达,二者与患儿气道炎症及肺功能密切相关。

长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位基因1通过靶基因调控乳腺癌细胞分化、增殖、侵袭、迁移的机制及临床意义

目的分析长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变异易位基因1(PVT1)通过靶基因调控乳腺癌细胞分化、增殖、侵袭和迁移的机制及临床意义。方法2018年1月至2019年12月采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A LncRNA PVT1、微小RNA(miR)-1207-5p表达水平;转染PVT1过表达质粒、PVT1慢性干扰质粒和阴性对照质粒至人乳腺癌细胞,检测转染后PVT1和miR-1207-5p表达水平;CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测各转染乳腺癌细胞的增殖分化、迁移、侵袭能力;qRT-PCR和Western blotting法检测转染miR-1207-5p后信号传导及转录激活蛋白6(STAT6)和P21 mRNA和蛋白表达水平。结果乳腺癌细胞PVT1和miR-1207-5p表达水平均明显高于正常乳腺上皮细胞(1.271±0.305比0.023±0.006和1.679±0.347比0.031±0.009),差异有统计学意义(P<0.01)。转染PVT1过表达质粒乳腺癌细胞PVT1和miR-1207-5p表达水平明显高于转染阴性对照质粒和PVT1慢性干扰质粒乳腺癌细胞(2.357±0.271比1.000±0.000和0.103±0.021、3.265±0.375比1.000±0.000和0.265±0.024),转染阴性对照质粒乳腺癌细胞明显高于转染PVT1慢性干扰质粒乳腺癌细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。转染PVT1过表达质粒后48、72、96和168 h乳腺癌细胞增殖能力明显高于转染阴性对照质粒和PVT1慢性干扰质粒乳腺癌细胞,转染阴性对照质粒乳腺癌细胞增殖能力明显高于转染PVT1慢性干扰质粒乳腺癌细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。转染PVT1过表达质粒后24 h乳腺癌细胞迁移能力和侵袭能力明显高于转染阴性对照质粒和PVT1慢性干扰质粒乳腺癌细胞,转染阴性对照质粒乳腺癌细胞迁移能力明显高于转染PVT1慢性干扰质粒乳腺癌细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。转染miR-1207-5p过表达物后STAT6和P21 mRNA均明显低于转染模拟对照物(0.476±0.102比1.000±0.000和0.429±0.097比1.132±0.236),差异有统计学意义(P<0.01);转染miR-1207-5p过表达物后STAT6和P21蛋白明显低于转染模拟对照物(0.396±0.104比1.062±0.002和0.434±0.067比1.141±0.218),差异有统计学意义(P<0.01)。结论LncRNA PVT1可能为miR-1207-5p调控的宿主基因,协同通过调控靶基因STAT6影响乳腺癌细胞增殖、分化、侵袭及转移,抑制该基因转录可能为乳腺癌治疗的研究新方向。

支气管哮喘患者血清lncRNA PVT1表达与气道炎症、重塑的相关性

目的探究支气管哮喘患者血清长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位基因1(lncRNA PVT1)表达与气道炎症、重塑的相关性。方法选取2019年5月至2020年5月安康市人民医院呼吸科收治的80例支气管哮喘患者作为研究对象,将入组患者分为急性发作期组43例和慢性持续期组37例。另选取同期在本院体检显示健康者78例作为对照组。采用实时荧光定量(qRT-PCR)法检测所有入组者血清LncRNA PVT1表达水平,常规检测入组者气道炎症、气道重塑和肺功能指标水平,采用Pearson法进行相关性分析。结果急性发作期组患者哮喘控制测试(ACT)评分明显低于慢性持续期组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。血清lncRNA PVT1、气道炎症指标白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)、转化生长因子-β(TGF-β)、免疫球蛋白E(IgE)、外周血嗜酸性粒细胞计数(EOS)及气道重塑指标支气管厚度(T/D)、管壁面积占支气道总横截面积百分比(WA%)由高至低依次为急性发作期组、慢性持续期组、对照组;肺功能指标第一秒用力呼气量(FEV1)、一秒率预计值(FEV1%)、最高呼吸气流(PEF)水平由高至低依次为对照组、慢性持续期组、急性发作期组,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。急性发作期组和慢性持续期组患者的血清lncRNA PVT1水平均与IL-6、TGF-β、T/D、WA%水平呈正相关(P<0.05),与FEV1、FEV1%水平呈负相关(P<0.05)。结论支气管哮喘患者血清lncRNA PVT1表达水平显著升高,与气道炎症、气道重塑和肺功能指标变化有关,可作为生物标志物用于临床支气管哮喘患者病情评估和治疗方案确定。

lncRNA PVT1及miR-26b在增生型糖尿病视网膜病变患眼玻璃体、增生膜中的表达研究

目的探讨增生型糖尿病视网膜病变(PDR)患眼玻璃体、增生膜中长链非编码RNA浆细胞瘤变异易位基因1(lncRNA PVT1)、微小RNA-26b(miR-26b)表达水平及意义。方法选取2016年3月至2019年3月本院收治的单眼发病的糖尿病视网膜病变(DR)患者58例为研究对象(PDR组),另选取同期因特发性黄斑裂孔行玻璃体切除术患者35例作为对照组。采用实时荧光定量(qRT-PCR)法检测玻璃体和膜组织中lncRNA PVT1、miR-26b、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达水平,并使用全自动生化分析仪检测血清常规指标。结果PDR组血清空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平明显高于对照组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显低于对照组(P<0.05)。PDR组患眼玻璃体和膜组织中lncRNA PVT1、VEGF mRNA表达水平明显高于对照组,miR-26b表达水平明显低于对照组(P<0.05)。PDR组患眼玻璃体和增生膜中lncRNA PVT1表达水平与miR-26b、患者血清HDL-C表达水平呈负相关(P<0.05),与患者血清FBG、HbA1c、VEGF mRNA呈正相关(P<0.05)。PDR患眼玻璃体和增生膜中miR-26b表达水平均与患者血清FBG、HbA1c、VEGF mRNA呈负相关,与患者血清HDL-C呈正相关(P<0.05)。结论PDR患眼玻璃体和增生膜中lncRNA PVT1水平显著升高、miR-26b水平显著降低,二者之间可能存在相互作用,共同影响PDR进展。

长链非编码RNA-PVT1介导JAK/STAT3信号通路对肺纤维化的研究

目的探讨长链非编码RNA-浆细胞瘤变异易位基因1/蛋白质酪氨酸激酶/信号转导和转录激活因子3(lnc-PVT1/JAK/STAT3)信号通路参与肺纤维化的作用机制。方法采用不同浓度脂多糖(LPS)作用于人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用CCK-8法检测细胞活性、蛋白免疫印迹法检测α-SMA的蛋白相对表达量,对LPS药物浓度进行筛选,选取LPS刺激后最适浓度的BEAS-2B建立肺纤维化体外模型;体外合成针对lnc-PVT1的3个小干扰RNA(siRNA)抑制靶点及对照siRNA,瞬时转染到BEAS-2B,用定量逆转录PCR(RT-qPCR)验证lnc-PVT1的表达,选取有效抑制靶点用于后续研究。实验分为空白对照(Con)组、LPS组、LPS+siRNA对照(LPS+siNC)组和LPS+siPVT1组。瞬时转染siPVT1及siRNA对照进入BEAS-2B后,用10μg/mL LPS刺激24 h,用CCK-8法检测细胞活力,划痕检测细胞迁移,RT-qPCR检测lnc-PVT1 mRNA相对表达量,ELISA检测细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α含量,蛋白免疫印迹法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、STAT3和p-STAT3蛋白表达。结果与Con组相比,10μg/mL LPS处理BEAS-2B细胞后细胞增殖能力增强,α-SMA蛋白相对表达量也上调(P均<0.01);与LPS组相比,敲低lnc-PVT1可抑制LPS诱导的BEAS-2B细胞增殖和细胞迁移(P均<0.01),降低IL-6、IL-1β和TNF-α等炎症因子的含量(P均<0.01),降低α-SMA的mRNA和蛋白表达及磷酸化STAT3蛋白相对表达量(P均<0.01),而STAT3蛋白相对表达量无明显变化(P>0.05)。结论敲低lnc-PVT1可改善LPS诱导的BEAS-2B细胞纤维化过程,可能与lnc-PVT1调控JAK/STAT3信号通路有关。

LncRNA PVT1对脑胶质瘤中GLUT3表达及细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变异易位1(PVT1)对脑胶质瘤中葡萄糖转运体3(GLUT3)表达及细胞增殖、侵袭能力的影响。方法(1)下载中国脑胶质瘤基因组图谱数据库中mRNAseq_325数据集,应用R语言分析222例原发性脑胶质瘤样本中PVT1与GLUT3基因表达的相关性以及二者对患者总生存期的影响。(2)收集海南医学院第一附属医院神经外科自2019年1月至2019年12月手术切除并经病理证实的8例低级别胶质瘤标本(低级别胶质瘤组)及7例胶质母细胞瘤标本(胶质母细胞瘤组),采用荧光原位杂交法检测PVT1的表达,免疫组化染色检测GLUT3蛋白的表达。(3)体外培养人星形胶质细胞NHA及胶质母细胞瘤细胞U87、LN229和U251(NHA组、U87组、LN229组、U251组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中PVT1、GLUT3 mRNA的表达,采用Western blotting实验检测GLUT3蛋白的表达。将U87、LN229细胞分别分为PVT1过表达质粒组与空白质粒组、PVT1短发夹RNA(shRNA)组与阴性对照shRNA组,分别构建慢病毒稳定转染过表达PVT1及其空白对照细胞系、敲低PVT1及其阴性对照细胞系,应用RT-qPCR和Western blotting实验检测各组细胞系中GLUT3 mRNA和蛋白的表达。(4)取PVT1 shRNA组与阴性对照shRNA组U87、LN229细胞,分别采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验、平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力,采用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。(5)将10只BALB/C-nu雌性裸鼠按随机数字表法分为实验组与对照组(n=5),分别移植PVT1 shRNA组与阴性对照shRNA组U87细胞以构建皮下移植瘤模型。移植4周后处死取瘤,称重及测量体积,并采用免疫组化染色检测肿瘤中Ki-67、GLUT3蛋白的表达。结果(1)mRNAseq_325数据集中222例原发性脑胶质瘤样本的PVT1与GLUT3基因表达呈正相关关系(r=0.514,P=0.000);与PVT1低表达组相比,PVT1高表达组的总生存期明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05);与GLUT3低表达组相比,GLUT3高表达组的总生存期明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与低级别胶质瘤组标本相比,胶质母细胞瘤组标本中PVT1、GLUT3蛋白的表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)与NHA组细胞相比,U87、LN229、U251组细胞中PVT1、GLUT3 mRNA和蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白质粒组相比,PVT1过表达质粒组U87、LN229细胞中GLUT3 mRNA和蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与阴性对照shRNA组相比,PVT1 shRNA组U87、LN229细胞中GLUT3 mRNA和蛋白的表达均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)与阴性对照shRNA组U87、LN229细胞相比,PVT1 shRNA组U87、LN229细胞的吸光度值、集落形成数和侵袭细胞数均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(5)与对照组裸鼠相比,实验组裸鼠的皮下移植瘤的体积明显减小、质量明显降低、Ki-67和GLUT3蛋白的表达也明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论下调PVT1可降低GLUT3的表达,从而抑制脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭能力。