浆细胞瘤异位基因1表达下调对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的影响及机制

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)中的浆细胞瘤异位基因1(PVT1)表达下调对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质(ECM)相关蛋白表达的影响,探讨PVT1在糖尿病肾病发病中的作用机制。方法培养人肾小球系膜细胞,分为正常对照组、高糖组、高糖+control siRNA组、高糖+PVT1 siRNA组。正常对照组在5.55 mmol/L的低糖DMEM完全培养基中培养,高糖组、高糖+control siRNA组、高糖+PVT1 siRNA组均在25mmol/L的高糖DMEM完全培养基中培养。高糖+control siRNA组、高糖+PVT1 siRNA组分别转染control siRNA、PVT1 siRNA。分别培养0、24、48、72 h后,采用CCK-8法测算各组细胞增殖率。采用流式细胞术检测各组细胞G1、S期比例。采用qRT-PCR法检测各组细胞PVT1 mRNA表达。采用Western blot法检测各组细胞ECM相关蛋白纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子β_1(TGF-β_1)及Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子(PAT-1)蛋白的表达。结果高糖组细胞各时间点细胞增殖率均高于正常对照组,高糖+PVT1 siRNA组各时间点细胞增殖率均低于高糖组(P均<0.05)。与正常对照组比较,高糖组细胞G1期比例减少、S期比例增多;与高糖组比较,高糖+PVT1 siRNA组G1比例增加、S期比例减少(P均<0.05)。高糖组、高糖+control siRNA组PVT1 mRNA相对表达量均高于正常对照组,高糖+PVT1 siRNA组PVT1 mRNA相对表达量低于高糖组(P均<0.05)。高糖组、高糖+control siRNA组、高糖+PVT1 siRNA组FN、TGF-β_1、PAT-1蛋白表达均高于正常对照组,高糖+PVT1 siRNA组FN、TGF-β_1、PAT-1蛋白表达均低于高糖组(P均<0.05)。结论在高糖环境下,肾小球系膜细胞中PVT1表达明显增加,下调PVT1表达可明显抑制肾小球系膜细胞的增殖、抑制ECM相关蛋白的表达。

浆细胞瘤多样异位基因1在卵巢癌组织中的表达及其对SKOV3细胞恶性生物学行为的影响

目的:研究人浆细胞瘤多样异位基因1(plasma-cytoma variant translocation gene 1,PVT1)对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:选取2015年11月至2017年4月郑州大学第三附属医院妇产科收治的卵巢癌患者32例。利用实时荧光定量PCR检测PVT1在32例卵巢癌组织及癌旁组织的表达。通过CCK-8法、划痕法及Transwell法检测PVT1对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果:PVT1在SKOV3细胞和卵巢癌组织表达水平均明显升高(均P<0.01);PVT1表达水平与卵巢癌者组织学分级、FIGO分期及淋巴结转移具有相关性(P<0.05或P<0.01)。转染PVT1 siRNA 36、48 h后,SKOV3细胞中PVT1表达水平明显下降(P<0.05);敲减PVT1的表达能够降低SKOV3细胞的增殖能力(P<0.05),抑制SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05或P<0.01)。结论:PVT1在卵巢癌中高表达,抑制PVT1表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力。

变异性浆细胞瘤异位1基因对高糖培养的大鼠心脏成纤维细胞的影响及其机制

目的探讨变异性浆细胞瘤异位1(PVT1)基因对高糖培养的大鼠心脏成纤维细胞(CF)的影响及其作用机制。方法取对数生长期CF并随机分为空白对照组、高糖组、PVT1小干扰RNA(siRNA)组、PVT1 siRNA阴性对照(NC)组(PVT1 siRNA NC组)。空白对照组和高糖组细胞不进行转染,PVT1 siRNA组及PVT1 siRNA NC组细胞分别转染PVT1 siRNA及PVT1 siRNA NC试剂;转染24 h后,高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组细胞用含25 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基培养,模拟高糖培养条件,空白对照组细胞不作处理。采用天狼猩红染色法观察高糖处理24 h后4组细胞胶原纤维沉积情况。流式细胞术检测高糖处理24 h后4组细胞细胞周期分布情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测高糖处理24 h后4组细胞中PVT1、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))mRNA及微RNA(miR)-93-5p的表达。采用Western blot法检测高糖处理24 h后4组细胞中TGF-β_(1)、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad7、p21、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)表达情况。另取对数生长期CF,随机分为未转染组、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组、PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 NC+miR-93-5p NC组;未转染组细胞不进行转染,PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组细胞转染PVT1 siRNA和miR-93-5p inhibitor,PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组细胞转染PVT1 siRNA和miR-93-5p NC,PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组细胞转染PVT1 NC和miR-93-5p inhibitor,PVT1 NC+miR-93-5p NC组细胞转染PVT1 NC和miR-93-5p NC,转染24 h后,用含25 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基处理5组细胞,模拟高糖培养条件。采用Western blot法检测高糖处理24 h后5组细胞中TGF-β_(1)、Smad7、ColⅠ蛋白表达表达情况。结果与空白对照组比较,高糖组细胞数量增多,红色胶原纤维沉积增加;与高糖组比较,PVT1 siRNA组细胞间隙变大,红色胶原纤维沉积减小;PVT1 siRNA NC组细胞红色胶原纤维沉积与高糖组相近。高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组G_(0)+G_(1)期细胞比例显著低于空白对照组,S+G_(2)+M期细胞比例显著高于空白对照组(P<0.05);PVT1 siRNA组G_(0)+G_(1)期细胞比例显著高于高糖组,S+G_(2)+M期细胞比例显著低于高糖组(P<0.05);PVT1 siRNA NC组G_(0)+G_(1)期细胞比例显著低于PVT1 siRNA组,S+G_(2)+M期细胞比例显著高于PVT1 siRNA组(P<0.05);高糖组和PVT1 siRNA NC组G_(0)+G_(1)期细胞比例、S+G_(2)+M期细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组细胞中PVT1、TGF-β_(1) mRNA相对表达量均显著高于空白对照组,miR-93-5p相对表达量显著低于空白对照组(P<0.05);PVT1 siRNA组细胞中PVT1、TGF-β_(1) mRNA相对表达量显著低于高糖组,miR-93-5p相对表达量显著高于高糖组(P<0.05);PVT1 siRNA NC组细胞中PVT1、TGF-β_(1) mRNA相对表达量均显著高于PVT1 siRNA组,miR-93-5p相对表达量显著低于PVT1 siRNA组(P<0.05);高糖组和PVT1 siRNA NC组细胞中PVT1、TGF-β_(1) mRNA及miR-93-5p相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组细胞中α-SMA、ColⅠ、TGF-β_(1)蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)显著高于空白对照组,p21、Smad7蛋白相对表达量显著低于空白对照组(P<0.05);PVT1 siRNA组细胞中α-SMA、ColⅠ、TGF-β_(1)蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)显著低于高糖组,p21、Smad7蛋白相对表达量显著高于高糖组(P<0.05);PVT1 siRNA NC组细胞中α-SMA、ColⅠ、TGF-β_(1)蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)显著高于PVT1 siRNA组,p21、Smad7蛋白相对表达量显著低于PVT1 siRNA组(P<0.05);高糖组和PVT1 siRNA NC组细胞中α-SMA、ColⅠ、p21、TGF-β_(1)、Smad7蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比较差异无统计学意义(P>0.05)。PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组细胞中TGF-β_(1)、ColⅠ蛋白相对表达量显著低于未转染组,Smad7蛋白相对表达量显著高于未转染组(P<0.05);PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组细胞中TGF-β_(1)、ColⅠ蛋白相对表达量显著高于未转染组,Smad7蛋白相对表达量显著低于未转染组;未转染组细胞中TGF-β_(1)、Smad7、ColⅠ蛋白相对表达量与PVT1 NC+miR-93-5p NC组、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组比较差异无统计学意义(P>0.05)。PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 NC+miR-93-5p NC组细胞中TGF-β_(1)、ColⅠ蛋白相对表达量显著高于PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组,Smad7蛋白相对表达量显著低于PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组(P<0.05);PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 NC+miR-93-5p NC组细胞中TGF-β_(1)、ColⅠ蛋白相对表达量显著低于PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组,Smad7蛋白相对表达量显著高于PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组(P<0.05);PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组与PVT1 NC+miR-93-5pNC组细胞中TGF-β_(1)、Smad7、ColⅠ蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PVT1基因沉默可促进miR-93-5p/Smad7通路活化,抑制TGF-β_(1)/Smad通路激活,进而抑制高糖培养的CF纤维化进程。

长链非编码RNA浆细胞瘤多样异位基因1对幽门螺旋杆菌感染胃上皮细胞系引起的炎症反应和细胞迁移的影响

目的研究长链非编码RNA浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)在幽门螺旋杆菌(HP)感染相关胃癌中的作用。方法在HP感染的胃黏膜正常上皮细胞(GES-1)中,用实时定量PCR(qRT-PCR)检测PVT1的表达;通过瞬时转染小干扰RNA,在胃癌细胞系SGC-7901中敲低PVT1,然后与HP共培养,用qRT-PCR检测炎症相关细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-1β、IL-6及IL-8的表达情况;在敲低PVT1后,通过细胞划痕实验,检测PVT1对胃癌细胞增殖及迁移能力的影响。RNA下拉联合质谱分析技术检测能够与PVT1相互结合的蛋白,并用RNA下拉实验联合Western blot验证质谱分析结果的准确性。结果在HP感染的胃黏膜正常上皮细胞GES-1中,PVT1明显上调(t=7.160,P=0.019)。在胃癌细胞中敲低PVT1,再用HP感染,发现炎症因子TNF-α(t=3.899,P=0.011)、IL-1β(t=14.610,P=0.000)、IL-8(t=6.557,P=0.001)的表达受到明显抑制。PVT1敲低后,对胃癌细胞的增殖能力无影响,但抑制细胞的迁移能力。PVT1可能与RPS8蛋白相互作用。结论PVT1可能作为促炎因子促进胃癌细胞迁移,在HP感染相关的胃癌中发挥调节作用。

LncRNA PVT1对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞活性的影响及其机制

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变体异位基因1(PVT1)对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞生物学行为的影响,并分析其潜在机制。方法 收集41例DLBCL病人和15例淋巴结反应性增生(RLH)病人的组织标本,体外培养人正常B淋巴细胞GM12878和人DLBCL细胞(OCI-Ly3、U2932、TMD8),对TMD8细胞进行转染,将其分为control组(只转染Lipofectamine-2000)、si-NC组(转染si-NC)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、si-PVT1组(转染si-PVT1)、miR-145-5p inhibitor组(转染miR-145-5p inhibitor)、si-PVT1+miR-145-5p inhibitor组(转染si-PVT1和miR-145-5p inhibitor)。应用qRT-PCR方法检测各组细胞PVT1 mRNA和miR-145-5p表达,Western Blot方法检测CDK6蛋白表达,CCK-8法检测TMD8细胞增殖,流式细胞术检测TMD8细胞周期变化,Transwell实验检测TMD8细胞迁移和侵袭能力,RNA pull down和双荧光素酶报告基因法验证PVT1、miR-145-5p与细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的靶向关系。结果 DLBCL组织PVT1 mRNA、CDK6蛋白的表达水平高于RLH组织,miR-145-5p表达低于RLH组织(t=14.264~24.445,P<0.05)。与GM12878细胞比较,OCI-Ly3、U2932、TMD8细胞中PVT1 mRNA、CDK6蛋白表达均增加,miR-145-5p表达均减少(F=69.557~234.718,P<0.05)。6组细胞PVT1 mRNA、miR-145-5p、CDK6蛋白表达及增殖率、G0/G1期细胞比例、S期细胞比例、迁移和侵袭细胞数差异有统计学意义(F=25.589~319.150,P<0.05);与control组比较,si-PVT1组细胞PVT1 mRNA、CDK6蛋白、增殖率、S期细胞比例、迁移和侵袭数量降低,miR-145-5p表达、G0/G1期细胞比例升高(P<0.05),miR-145-5p inhibitor组呈相反变化(P<0.05);下调miR-145-5p表达可减弱敲低PVT1对TMD8细胞恶性生物学行为的抑制作用(P<0.05)。过表达PVT1 mRNA增高CDK6蛋白表达、细胞增殖率、S期细胞比例、迁移和侵袭数量,降低miR-145-5p表达、G0/G1期的细胞比例(F=38.025~327.887,P<0.05)。miR-145-5p是PVT1的靶基因,且miR-145-5p可靶向下调CDK6表达。结论 敲低PVT1可抑制DLBCL细胞恶性生物学行为,其作用机制可能与调控miR-145-5p/CDK6轴有关。

PVT1及TNF基因多态性与2型糖尿病性肾病病位、病性的相关性研究

目的:探讨浆细胞瘤异位基因(PVT1)rs6918698及肿瘤坏死因子(TNF)rs1800629基因多态性与2型糖尿病性肾病(DKD)病位、病性形成的相关性。方法:收集195例汉族DKD患者,与134例健康人群相对照。以证素辨证体系剖析DKD病位、病性证素的分布特点,并检测基因多态性,探讨两者的相关性。结果:气虚在PVT1rs6918698GC型上分布比例显著升高,与无气虚比较,差异具有统计学意义(P<0.01);痰证在TNFrs1800629GG基因型上分布比例显著升高,与无痰证比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:PVT1基因rs6918698多态性与气虚相关,风险基因GC可能是DKD患者多发气虚的遗传学基础之一;TNF基因rs1800629多态性与痰相关,提示风险基因GG可能是DKD患者多发痰证的遗传学基础之一。

PVT1通过TGF-β1/SMAD通路促进子宫内膜基质细胞过度纤维化的研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)在调控子宫内膜基质细胞纤维化中的病理生理作用及分子机理。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人子宫内膜基质细胞(HESCs)中PVT1、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、转化生长因子-β1(TGF-β1)、SMAD2及SMAD3的表达水平。结果PVT1过表达促进HESCs增殖(P<0.05),而PVT1沉默抑制HESCs增殖(P<0.05)。过表达PVT1在HESCs中上调胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白ⅢmRNA的表达(P<0.05),而PVT1被敲除时,胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白ⅢmRNA的表达水平被显著下调(P<0.05)。过表达PVT1在HESCs中可以进一步上调TGF-β1/SMAD信号相关基因(TGF-β1、SMAD2、SMAD3)的表达(P<0.05)。当PVT1被敲除时,TGF-β1/SMAD信号相关基因胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白ⅢmRNA的表达水平被显著下调(P<0.05)。PVT1可诱导HESCs上清液中TGF-β1的产生(P<0.05)。结论PVT1可通过TGF-β1/SMAD通路促进子宫内膜基质细胞过度纤维化而产生胶原蛋白。同时,PVT1可能是一个用于治疗子宫内膜粘连的新靶点。

LncRNA PVT1和Foxo3a在卵巢癌患者组织中的表达变化及临床意义

目的:探讨LncRNA PVT1和Foxo3a在卵巢癌患者组织中的表达变化及临床意义。方法:选择2021年1月—2023年12月我院收治的卵巢癌患者156例作为研究对象,将经手术摘除或剥除的卵巢癌组织和癌旁组织,通过RT-PCR技术,研究LncRNA PVT1与Foxo3a在卵巢癌、癌旁组织中的表达水平。采用受试者工作曲线(ROC)检测LncRNA PVT1和Foxo3a在卵巢癌中的诊断价值。采用χ2检验检测LncRNA PVT1、Foxo3a与临床病理特征的关系。结果:LncRNA PVT1、Foxo3a在卵巢癌中的表达与肿瘤的大小、FIGO分期、分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05),与患者的年龄、腹膜转移、组织类型无关(P>0.05)。卵巢癌组织LncRNA PVT1、Foxo3a表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。本次研究中以病理结果为金标准发现,LncRNA PVT1检查真阳性68例,真阴性为78例,Foxo3a检查真阳性为65例,真阴性为75例,联合检测真阳性为70例,真阴性为84例,由此可见,二者联合检测检查诊断情况高于LncRNA PVT1、Foxo3a单项检查,与金标准检出率较为相似。联合检测灵敏度、特异度和准确度均明显高于LncRNA PVT1、Foxo3a单项检测。结论:LncRNA PVT1与Foxo3a在卵巢癌中均呈显著高表达,二者在卵巢癌中具有潜在的临床应用价值。

LncRNA PVT1在结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移中的作用

目的探讨长链非编码RNAs(lncRNAs)浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)在结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移中的作用。方法结直肠癌细胞株HT-29分为三组,干扰PVT1(si-PVT1)组转染si-PVT1,干扰对照(si-NC)组转染si-NC,空白组不进行转染。采用CCK-8法检测24h、48h细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭。结果转染后24h、48h,与空白组和si-NC组相比,si-PVT1组的LncRNAPVT1表达量显著减少(P<0.05),细胞增殖抑制率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),细胞划痕愈合率、细胞侵袭率都显著增加(P<0.05)。结论LncRNAPVT1在结直肠癌中可发挥抑癌基因的作用,抑制LncRNAPVT1的表达从而促进结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移,抑制细胞凋亡。

LncRNA PVT1及PD-L1表达与顺铂耐药上皮性卵巢癌临床病理特征及预后的相关性分析

目的:探讨顺铂耐药性上皮性卵巢癌(cisplatin resistant epithelial ovarian cancer,CREOC)患者的长链非编码核糖核酸(long non-coding ribose nucleic acid,LncRNA)的浆细胞瘤异位基因1(plasma cytoma variant translocation1,PVT1)和程序性死亡配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)的表达关系及其作用。方法:收集2014年1月至2017年12月139例于天津医科大学肿瘤医院经病理诊断为上皮性卵巢癌患者的临床病理资料,采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)和免疫组织化学法分别检测CREOC组织中的LncRNA PVT1和PD-L1表达,分析其与临床病理特征及预后的相关性。结果:CREOC组织中的LncRNA PVT1和PD-L1表达均显著高于正常卵巢组织(P<0.05)。CREOC组织中的LncRNA PVT1和PD-L1表达呈正相关(r=0.629,P<0.001)。LncRNA PVT1和PD-L1的高表达与组织学分级、FIGO分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。LncRNA PVT1高表达与残留病灶大小、血清CA125水平有关(P<0.05)。单因素Logistic生存分析显示,LncRNA PVT1和PD-L1的高表达患者的无进展生存期(progression-free survival,PFS)和总生存期(overall survival,OS)明显低于LncRNA PVT1和PD-L1的低表达者(P<0.05)。结论:CREOC患者组织中LncRNA PVT1和PD-L1的表达明显增高,且LncRNA PVT1的表达与PD-L1呈正相关。LncRNA PVT1和PD-L1的高表达与CREOC患者临床病理特征中的更具侵袭性及较差的预后相关。

乳腺癌组织LncRNA PVT1 ABCG2 mRNA表达与病理特征间关系及KM曲线分析

目的:探讨乳腺癌组织长链非编码RNA浆细胞瘤异位变异基因1(LncRNA PVT1)、三磷酸腺苷结合转运蛋白G2(ABCG2)mRNA表达与病理特征间关系及KM曲线分析。方法:选取2017年1月至2018年12月我院接受手术治疗的80例乳腺癌患者的病例资料;术中留取乳腺癌组织和癌旁组织(距病灶2 cm),比较癌组织及癌旁组织LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表达,分析癌组织LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表达与病理特征的相关性,COX回归分析乳腺癌患者术后复发的影响因素,比较不同癌组织LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表达患者无病生存期。结果:癌组织LncRNA PVT1(0.076±0.011)、ABCG2 mRNA(3.27±0.45)表达高于癌旁组织(0.003±0.001)、(0.82±0.26)(t=59.114、42.165,P<0.05);癌组织LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移有关(P<0.05);复发者癌组织LncRNA PVT1(0.084±0.010)、ABCG2 mRNA(3.75±0.59)表达高于未复发者(0.074±0.009)、(3.13±0.47)(t=4.048、4.644,P<0.05);COX回归分析显示,癌组织LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA高表达均为术后复发独立危险因素(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,癌组织LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA高表达者术后3年无病生存率低于低表达者(P<0.05)。结论:乳腺癌患者癌组织LncRNA PVT1、ABCG2 mRNA异常高表达,且与病理特征及无病生存期相关,有望成为新的治疗靶点。

LncRNA PVT1在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨LncRNA PVT1在结直肠癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法:RT-qPCR法检测130例CRC患者癌组织和癌旁正常组织中LncRNA PVT1的表达,并揭示其表达的临床意义。结果:与癌旁正常组织相比较癌组织中的LncRNA PVT1呈高表达,其高表达与淋巴结转移和远处转移密切相关,而与T分级关系不大。LncRNA PVT1低表达和高表达患者的中位DFS分别为44个月和26个月(P=0.021);COX分析表明LncRNA PVT1表达水平和TNM分期均是预测DFS的独立影响因子。在Ⅰ期CRC中LncRNA PVT1高表达患者所占的比例显著高于血浆CEA升高患者的比例(P<0.0001)。结论:LncRNA PVT1在CRC的高表达与淋巴结转移和远处转移相关,是预测DFS的独立影响因子,另外其异常表达具有早期诊断CRC的潜在价值。

非编码长链RNA PVT1和miR-424拮抗调控宫颈癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的 探讨宫颈癌HeLa细胞增殖及侵袭过程中长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变体异位基因1(PVT1)对miR-424的调控作用,揭示LncRNA PVT1在宫颈癌进程中发挥作用的潜在机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测宫颈癌组织和癌旁组织miR-424表达,分别用miR-424 inhibitor、miR-424 mimics和PVT1 siRNA共转染宫颈癌HeLa细胞。实验组细胞采用miR-424 inhibitor和PVT1 siRNA共转染,对照组细胞采用miR-424 mimics和PVT1 siRNA共转染,转染非靶向序列质粒的细胞作为阴性对照。采用细胞计数盒8(CCK8)法、克隆形成实验检测各组细胞增殖及生长能力变化,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力变化。结果 宫颈癌组织和癌旁组织miR-424相对表达量分别为0.039±0.022和0.092±0.030,差异有统计学意义,t=4.82,P=0.032。Pearson相关性分析表明,宫颈癌组织中PVT1与miR-424成负相关,R~2=0.587,P=0.047。对照组宫颈癌细胞的增殖、生长能力降低,迁移和侵袭能力减弱;实验组细胞增殖能力增强(F=82.281,P=0.021),克隆形成能力增强,t=4.57,P=0.040。对照组迁移能力和侵袭能力差异倍数分别为实验组的0.55±0.16和0.48±0.08,提示实验组细胞迁移能力及侵袭能力增强,F=29.361,P=0.038。结论 抑制miR-424表达可以恢复PVT1 siRNA导致的宫颈癌细胞HeLa增殖及侵袭抑制作用,PVT1可能通过沉默miR-424表达在宫颈癌进程中发挥促癌作用。这可能为宫颈癌提供新的治疗靶点。

PVT1促进PAH大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移的作用机制研究

目的:研究浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)在肺动脉高压(PAH)大鼠中对于肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖和迁移的作用及其可能的机制.方法:将16只成年雄性SD大鼠随机分为肺动脉高压组(PAH组)和对照组,每组8只大鼠.PAH组大鼠通过单次项背部皮下注射MCT溶液造模,对照组大鼠给予单次项背部皮下注射等量生理盐水.通过胸右心室穿刺法测量右心室压力.取各组大鼠肺组织,并进行原代肺动脉平滑肌细胞分离培养.通过RT-qPCR和Western blot检测PVT1及Fxr1在PAH组织及PASMCs中的表达水平;通过HE染色评估PAH组织的血管壁形态;免疫荧光法检测HPASMC的纯度;CCK-8法和伤口愈合迁移实验检测PASMCs增殖和迁移情况.结果:与对照组相比,PAH组大鼠肺组织血管壁厚度偏厚、肺动脉压显著升高(P<0.05).PVT1在PAH组大鼠的PAH组织和PASMCs中的表达水平显著上调(P<0.05),且其表达与肺动脉压呈正相关.与对照组相比,转染sh-PVT1的PASMCs显示出较低的细胞活力,同时转染sh-PVT1有效敲低了PASMCs中PVT1的表达水平(P<0.01).与对照组相比,PVT1的敲低抑制了PASMCs迁移能力(P<0.01).在转染pcDNA-PVT1的PASMCs中发现较高的增殖能力,PVT1的过表达促进了PASMCs迁移能力(P<0.01).与对照组相比,Fxr1在PAH模型组的PAH组织和PASMCs中的表达水平显著上调(P<0.01).结论:PVT1通过调节Fxr1的表达促进PASMCs的增殖和迁移,PVT1可能是PAH诊断和预测指标.

冠状动脉粥样硬化性心脏病患者lncRNA PVT1和miR-145-5p水平与冠状动脉病变相关性分析

目的探讨血清长链非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤多样性异位基因1(PVT1)和微小RNA-145-5p(miR-145-5p)与冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者冠状动脉病变程度的相关性。方法选取郑州人民医院2020-06-01-2021-12-31收治的179例行冠状动脉造影检查患者作为研究对象,依据诊断结果分为观察组(冠心病103例)和对照组(非冠心病76例)。观察组患者根据病变支数分为单支(35例)、双支(29例)和三支(39例)病变组;根据Gensini评分分为轻度(37例)、中度(26例)及重度(40例)病变组。检测各组血清lncRNA PVT1和miR-145-5p水平并分析相关性;Spearman分析血清lncRNA PVT1、miR-145-5p与Gensini评分相关性;采用多因素logistic回归分析影响冠心病发生的因素。结果与对照组比较,观察组高血压史(χ^(2)=9.189,P=0.002)、糖尿病史(χ^(2)=7.278,P=0.007)、高血脂史(χ^(2)=7.667,P=0.006)比例均较高,差异有统计学意义;观察组血清lncRNA PVT1水平为1.69±0.48,高于对照组的1.01±0.22,t=11.486,P<0.001;血清miR-145-5p水平为0.45±0.17,低于对照组的1.00±0.19,t=20.348,P<0.001。不同病变支数患者血清lncRNA PVT1水平由高至低依次为三支(1.92±0.49)、双支(1.69±0.43)和单支(1.44±0.39)病变组,血清miR-145-5p水平由高至低依次为单支(0.60±0.16)、双支(0.45±0.12)和三支(0.31±0.08)病变组;不同Gensini评分患者血清lncRNA PVT1水平由高至低依次为重度(1.91±0.48)、中度(1.68±0.41)和轻度(1.45±0.42)病变组,血清miR-145-5p水平由高至低依次为轻度(0.61±0.14)、中度(0.43±0.13)、重度(0.32±0.09)病变组,lncRNA PVT1和miR-145-5p水平组间差异均有统计学意义,均P<0.05。观察组血清lncRNA PVT1与miR-145-5p水平呈负相关(r=-0.501,P<0.001),Gensini评分与血清lncRNA PVT1呈正相关(r=0.573,P<0.001),与血清miR-145-5p呈负相关(r=-0.479,P<0.001)。多因素分析结果显示,高血脂史(OR=1.984,95%CI为1.201~3.277,P=0.007)和lncRNA PVT1(OR=2.063,95%CI为1.266~3.361,P=0.004)是影响冠心病发生的独立危险因素,miR-145-5p(OR=0.791,95%CI为0.655~0.955,P=0.015)是保护因素。结论冠心病患者血清lncRNA PVT1水平高表达,血清miR-145-5p水平低表达,均与冠状动脉病变支数、Gensini评分有关,影响疾病进展。

支气管哮喘患儿对糖皮质激素的反应性与PVT1的相关性研究

目的探讨支气管哮喘患儿对糖皮质激素治疗的反应性与血浆浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)表达水平的相关性。方法选取2019年1—12月该院收治的60例支气管哮喘患儿为研究对象,采用丙酸氟替卡松吸入气雾剂进行治疗,根据治疗反应性将患儿分为激素敏感型哮喘(SSA)组(n=35)与激素抵抗型哮喘(SRA)组(n=25)。于治疗前后检测两组血浆PVT1表达水平、肺功能指标[1 s用力呼气量(FEV1)、呼气峰流速值(PEF)]、诱导痰中性粒细胞计数(S-NEU)、诱导痰嗜酸性细胞计数(S-EOS)、血液中性粒细胞计数(B-NEU)、血液嗜酸性细胞计数(B-EOS),采用Pearson分析进行相关性分析。结果治疗前,SRA组PVT1[(3.55±1.42)vs.(2.28±1.06)]表达水平明显高于SSA组(P<0.05)。治疗后,SRA组血浆PVT1[(3.11±1.36)vs.(1.15±0.83)]表达水平明显高于SSA组(P<0.05);SRA组FEV1[(42.18±2.15)%vs.(76.30±7.33)%]、PEF[(47.52±5.83)vs.(68.11±6.33)]均明显低于SSA组(P<0.05);SRA组S-NEU[(30.84±4.29)%vs.(6.17±1.32)%]、S-EOS[(4.85±1.60)%vs.(2.19±0.80)%]、B-NEU[(28.75±4.66)%vs.(12.46±2.06)%]、B-EOS[(3.53±0.90)%vs.(1.22±0.45)%]均明显高于SSA组(P<0.05);PVT1与FEV1呈负相关(r=—0.425,P=0.036),与PEF、S-NEU呈正相关(r=—0.397、0.443,P=0.040、0.012)。结论PVT1能够预测支气管哮喘患儿对糖皮质激素治疗的反应性。