长链非编码RNA浆细胞瘤转化迁移基因1在结直肠癌组织和细胞中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)在结直肠癌(CRC)组织和细胞中的表达及临床意义。方法选取2006年4月至2011年3月在新乡医学院第一附属医院接受手术切除治疗的CRC患者的癌组织和配对癌旁组织标本112例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测CRC组织和癌旁组织中PVT1 mRNA的表达;并分析PVT1 mRNA表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系。培养CRC细胞系LoVo和RKO细胞,待细胞融合度达70%以上时随机分为siPVT1组(转染PVT1干扰序列)和siRNA-对照序列组(转染阴性对照序列),转染后继续培养48 h。采用实时荧光定量PCR法检测LoVo和RKO细胞中PVT1mRNA表达,流式细胞术检测LoVo和RKO细胞增殖和凋亡情况;Transwell分析法检测LoVo和RKO细胞的侵袭和迁移能力。结果CRC组织和癌旁组织中PVT1 mRNA高表达率分别为61.61%(69/112)、44.64%(50/112),CRC组织中PVT1 mRNA高表达率显著高于癌旁组织(χ^2=6.472,P<0.05)。CRC组织中PVT1表达与患者的年龄及性别无关(P>0.05),与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移及远处转移有关(P<0.05)。siPVT1组LoVo、RKO细胞中PVT1 mRNA相对表达量均显著低于siRNA-对照序列组(P<0.05)。培养0、24 h时,siPVT1组与siRNA-对照序列组LoVo细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72、96 h时,siPVT1组LoVo细胞增殖能力显著低于siRNA-对照序列组(P<0.05)。培养0 h时,siPVT1组与siRNA-对照序列组RKO细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养24、48、72、96 h时,siPVT1组RKO细胞增殖能力显著低于siRNA-对照序列组(P<0.05)。siPVT1组LoVo和RKO细胞凋亡率均显著高于siRNA-对照序列组(P<0.05)。siPVT1组LoVo、RKO细胞迁移和侵袭数均显著低于siRNA-对照序列组(P<0.01)。结论PVT1在CRC组织中呈高表达,且与肿瘤的恶性程度有关,沉默LoVo、RKO细胞中PVT1可有效抑制细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。

衰老髓核细胞中环状RNA浆细胞瘤转化迁移基因1的表达及调控机制

背景:研究发现环状RNA浆细胞瘤转化迁移基因1(cyclic RNA plasmacytoma variant translocation 1,circPVT1)与成纤维细胞的衰老有关,但circPVT1与髓核细胞衰老的关系及机制目前尚不清楚。目的:观察circPVT1在衰老髓核细胞中的表达,并探究其可能作用机制。方法:体外培养人髓核细胞,电离辐射(5 Gy,6 d)诱导髓核细胞衰老,qRT-PCR检测细胞circPVT1、let-7 mRNA表达;circPVT1 siRNA、anti-let-7共转染至正常髓核细胞,分为空白组、si-NC+anti-NC组、si-circPVT1+anti-NC组、si-NC+anti-let-7组、si-circPVT1+anti-let-7组,qRT-PCR检测细胞circPVT1、let-7 mRNA表达,CCK-8法检测细胞增殖抑制情况,平板细胞克隆形成实验检测克隆形成数量,SA-β-gal染色检测细胞衰老情况,免疫印迹法检测细胞衰老相关蛋白p21、p27以及let-7靶标HMGA2、KRAS表达,双荧光酶素活性实验验证let-7对HMGA2、KRAS靶向调控关系。结果与结论:①与正常髓核细胞相比,辐射组细胞中circPVT1 mRNA表达降低,let-7 mRNA表达升高,SA-β-gal染色阳性率升高(P<0.05);②与空白组、si-NC+anti-NC组相比,si-circPVT1+anti-NC组circPVT1 mRNA表达降低,let-7 mRNA表达升高,细胞增殖抑制率升高,克隆形成数量降低,SA-β-gal染色阳性率升高,p21、p27蛋白表达升高,HMGA2、KRAS蛋白表达降低(P<0.05);而si-NC+anti-let-7组正好相反(P<0.05);③si-circPVT1+anti-let-7组circPVT1 mRNA表达、克隆形成数量、HMGA2、KRAS蛋白表达高于si-circPVT1+anti-NC组,低于si-NC+anti-let-7组;let-7 mRNA表达、细胞增殖抑制率、SA-β-gal染色阳性率、p21、p27蛋白低于si-circPVT1+anti-NC组,高于si-NC+anti-let-7组(P<0.05);④双荧光酶素活性实验显示HMGA2、KRAS是let-7的靶标;⑤结果表明,抑制circPVT1表达后加速髓核细胞衰老,其机制可能是通过结合let-7进而抑制靶向HMGA2、KRAS蛋白实现的。

浆细胞瘤转化迁移基因1在结直肠癌患者血浆中的表达与临床意义

目的:检测长链非编码RNA浆细胞瘤转化迁移基因1(plasmacytoma variant translocation gene 1,PVT1)在结直肠癌患者血浆中的表达并探讨其临床意义。方法:收集90例结直肠癌患者术前血浆、30例结直肠腺瘤患者血浆、42例体检健康者(对照组)血浆及29例配对的结直肠癌患者术后2~3周的血浆标本。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测上述标本的PVT1表达水平,并对29例结直肠癌患者术前、术后进行比较。分析血浆PVT1表达量与结直肠癌临床病理参数的相关性。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估血浆PVT1对结直肠癌的诊断效能。结果:与对照组相比,结直肠腺瘤组、结直肠癌组及TNMⅠ/Ⅱ期结直肠癌组血浆PVT1表达水平均显著升高(P均<0.05),且结直肠癌患者术后表达水平较术前明显降低(P<0.01);结直肠癌患者血浆中PVT1表达水平与年龄、性别及肿瘤的部位、大小、分化程度、TNM分期等无相关性(P>0.05);血浆PVT1单独诊断结直肠癌的效能高于常规肿瘤标志物癌胚抗原;PVT1与癌胚抗原联合检测对结直肠癌及TNMⅠ/Ⅱ期结直肠癌诊断价值均高于PVT1、癌胚抗原单独检测。结论:lncRNA PVT1在结直肠癌及癌前病变患者血浆中表达上调,其可作为结直肠癌临床诊断和术后监测潜在的循环分子标志物。

人浆细胞瘤转化迁移基因1单核苷酸多态性与糖尿病及糖尿病肾病的关系

目的分析人浆细胞瘤转化迁移基因(PVT)1的11个单核苷酸多态性(SNPs)与糖尿病(DM)及糖尿病肾病(DN)关系。方法利用Mass ARRAY质谱分析对DM及DN患者进行PVT1基因11个SNP位点(rs11993333、rs1499368、rs1499373、rs2250888、rs2648876、rs2720659、rs2720660、rs2720662、rs2720666、rs2720667、rs3815871)检测,分析各位点多态性在DM、DN组及健康对照组分布差异,探讨PVT1基因不同SNP位点与DM及DN的相关性。结果 DN组与DM组10个SNPs(rs11993333、rs1499368、rs2250888、rs2648876、rs2720659、rs2720660、rs2720662、rs2720666、rs2720667、rs3815871)多态性均有显著差异;DN组及健康对照组11个SNPs位点多态性均无显著差异;DM组及健康对照组5个SNPs(rs2250888、rs2648876、rs2720660、rs2720666、rs2720667)具有统计学差异(P<0.05)。结论中国人群PVT1基因多态性与DM及DN存在易感相关性。

长链非编码RNA-浆细胞瘤转化迁移基因在糖尿病肾脏疾病中的表达及其临床意义的研究

目的 探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)-浆细胞瘤转化迁移基因1(plasmacytoma variant translocation 1,PVT1)在糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease, DKD)表达变化并分析其临床意义。方法 选取2019年5月至2021年5月收治的DKD患者76例(DKD组)和2型糖尿病(diabetes mellitus type 2,T2DM)患者81例(T2DM组)为研究对象,另选取健康志愿者79名为对照组,使用实时荧光定量PCR法检测纳入对象外周血LncRNA-PVT1表达水平,比较各组纳入对象LncRNA-PVT1表达、肾功能、血糖水平的变化,Spearman相关性分析血LncRNA-PVT1表达与肾功能指标和血糖指标水平关系,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve, ROC)分析LncRNA-PVT1表达对DKD发生的预测效能。结果 与对照组相比,DKD组、T2DM组患者的体重指数(body mass index, BMI)、LncRNA-PVT1表达、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin, HbA1c)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、尿β2-微球蛋白(microglobulin, MG)、尿α1-MG、尿微量白蛋白/尿肌酐比值(albumin-creatinine ratio, ACR)、尿素氮(urea nitrogen, BUN)、血肌酐(serum creatinine, Scr)、胱抑素C(cystatin C,Cys C)水平均升高(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)水平降低(P<0.05)。与T2DM组相比,DKD组患者的LncRNA-PVT1表达、HbA1c、LDL-C、尿β2-MG、尿α1-MG、ACR、BUN、Scr、Cys C水平均升高(P<0.05),HDL-C水平降低(P<0.05)。LncRNA-PVT1表达与HbA1c、LDL-C、尿β2-MG、尿α1-MG、ACR、BUN、Scr、Cys C水平呈正相关(P<0.001),而与HDL-C水平呈负相关(P<0.001)。LncRNA-PVT1表达对DKD发生预测的曲线下面积为0.907(95%CI:0.862~0.953,P<0.001),截断值为1.830。结论 LncRNA-PVT 1表达在DKD中呈升高趋势且与肾功能、血糖水平存在相关性,还对DKD发生有较高的预测价值。

浆细胞瘤转化迁移基因1在类风湿关节炎患者诊断中的临床应用

目的评价长链非编码RNA浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)对RA的临床诊价值。方法选取本院健康体检中心119名健康体检者作为健康对照,收集RA患者158例,同时收集SLE及pSS患者各50例作为疾病对照,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RA、健康对照及SLE、pSS患者血浆中PVT1的相对含量;分析RA患者血浆中PVT1的含量与RF、IL-6及抗CCP抗体的相关关系。采用t检验、方差分析和Speraman相关性分析。受试者工作特征曲线(ROC)分析PVT1对RA的诊断效能。结果与健康对照组(1.32±1.22)和SLE(1.15±0.83)及pSS(1.46±0.88)相比,RA患者血浆中PVT1的表达量(3.71±2.68)明显增高(t=8.36,P<0.01;t=6.83,P<0.01;t=5.98,P<0.01);相关性分析显示,RA患者血浆中PVT1的表达与RF、IL-6及抗CCP抗体的表达均呈正相关(r=0.41,P<0.01;r=0.38,P<0.01;r=0.40,P<0.01);血浆PVT1在诊断RA的曲线下面积(AUC)为0.79;当PVT1临界值为1.97时,诊断灵敏度为68.27%,特异度为86.45%,此时可达到最大的诊断效能;当PVT1联合RF诊断RA时,AUC则为0.88[95%CI(0.83,0.93),P<0.01],其灵敏度和特异度分别为80.22%和82.73%。结论血浆PVT1对RA具有潜在的诊断价值,可能成为诊断RA的新型标志物,对RA的诊断提供新的临床依据。

水苏碱调节Shh/Gli1信号通路对口腔癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨水苏碱(Sta)调节超音速刺猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)信号通路对口腔癌(OC)细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用蛋白质印迹技术检测Shh、Gli1在正常口腔上皮角质细胞HOK和OC细胞株系(Cal-27、Tca8113、SCC-9、HSC-3)中的表达,选择其中高表达的HSC-3细胞为研究对象,随机分为Control组、L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组、PM组。EdU染色检测HSC-3细胞增殖;划痕实验检测HSC-3细胞的迁移;Transwell实验检测HSC-3细胞侵袭;采用蛋白质印迹技术检测Sta对E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1蛋白表达的影响;小鼠荷瘤实验验证Sta对OC肿瘤生长和OC组织Shh、Gli1蛋白表达的影响。结果L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组HSC-3细胞EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达低于Control组,E-cadherin表达高于Control组(P<0.05);与H-Sta组相比,PM组EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达升高,E-cadherin表达降低(P<0.05)。Sta组移植瘤质量、体积、Shh阳性率、Gli1阳性率低于对照组(P<0.05)。结论Sta可以抑制OC细胞迁移、侵袭和EMT,其机制可能是通过调节Shh/Gli1信号通路实现的。

浆细胞瘤转化迁移基因1在肿瘤中的研究进展

浆细胞瘤转化迁移基因（PVT1）是一个重要的长非编码RNA,在人类基因组PVT1定位于染色体8q24.21.PVT1的异常表达和多态性与人类多种肿瘤如恶性淋巴瘤、乳腺癌、结直肠癌、胰腺癌等密切相关,并能影响肿瘤患者的生存和预后.目前认为其作用机制可能是通过与Myc基因、微小RNA或其他蛋白的相互作用,以及基因多态性等,但还不明确,对PVT1的深入研究有望为肿瘤的诊断治疗提供新靶点.

LncRNA PVT1对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞活性的影响及其机制

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变体异位基因1(PVT1)对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞生物学行为的影响,并分析其潜在机制。方法 收集41例DLBCL病人和15例淋巴结反应性增生(RLH)病人的组织标本,体外培养人正常B淋巴细胞GM12878和人DLBCL细胞(OCI-Ly3、U2932、TMD8),对TMD8细胞进行转染,将其分为control组(只转染Lipofectamine-2000)、si-NC组(转染si-NC)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、si-PVT1组(转染si-PVT1)、miR-145-5p inhibitor组(转染miR-145-5p inhibitor)、si-PVT1+miR-145-5p inhibitor组(转染si-PVT1和miR-145-5p inhibitor)。应用qRT-PCR方法检测各组细胞PVT1 mRNA和miR-145-5p表达,Western Blot方法检测CDK6蛋白表达,CCK-8法检测TMD8细胞增殖,流式细胞术检测TMD8细胞周期变化,Transwell实验检测TMD8细胞迁移和侵袭能力,RNA pull down和双荧光素酶报告基因法验证PVT1、miR-145-5p与细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的靶向关系。结果 DLBCL组织PVT1 mRNA、CDK6蛋白的表达水平高于RLH组织,miR-145-5p表达低于RLH组织(t=14.264~24.445,P<0.05)。与GM12878细胞比较,OCI-Ly3、U2932、TMD8细胞中PVT1 mRNA、CDK6蛋白表达均增加,miR-145-5p表达均减少(F=69.557~234.718,P<0.05)。6组细胞PVT1 mRNA、miR-145-5p、CDK6蛋白表达及增殖率、G0/G1期细胞比例、S期细胞比例、迁移和侵袭细胞数差异有统计学意义(F=25.589~319.150,P<0.05);与control组比较,si-PVT1组细胞PVT1 mRNA、CDK6蛋白、增殖率、S期细胞比例、迁移和侵袭数量降低,miR-145-5p表达、G0/G1期细胞比例升高(P<0.05),miR-145-5p inhibitor组呈相反变化(P<0.05);下调miR-145-5p表达可减弱敲低PVT1对TMD8细胞恶性生物学行为的抑制作用(P<0.05)。过表达PVT1 mRNA增高CDK6蛋白表达、细胞增殖率、S期细胞比例、迁移和侵袭数量,降低miR-145-5p表达、G0/G1期的细胞比例(F=38.025~327.887,P<0.05)。miR-145-5p是PVT1的靶基因,且miR-145-5p可靶向下调CDK6表达。结论 敲低PVT1可抑制DLBCL细胞恶性生物学行为,其作用机制可能与调控miR-145-5p/CDK6轴有关。

长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1参与盆腔器官脱垂的机制

背景:作者所在课题组前期通过高通量测序结果发现长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1在盆腔器官脱垂患者子宫主韧带中表达明显降低,转化生长因子β1信号通路也是相关通路之一。目的:观察长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1对盆底韧带成纤维细胞的影响,探讨其在盆腔器官脱垂疾病发病机制中的可能作用。方法:提取大鼠盆底韧带组织标本,分离成纤维细胞,进行原代培养。慢病毒构建长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1干扰和过表达载体加入成纤维细胞中。通过免疫荧光、MTT、细胞划痕实验、流式细胞术来检测成纤维细胞的形态、增殖、迁移和凋亡情况;RT-PCR和Western-blot检测转化生长因子β1、smad2/3、c-Myc的mRNA及蛋白表达情况。结果与结论:①长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1过表达时可显著促进成纤维细胞的增殖,提高细胞的迁移能力,抑制成纤维细胞凋亡;长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1干扰时结果相反;②此外,长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1过表达时细胞中的c-Myc、转化生长因子β1、smad2/3的mRNA和蛋白相对表达量均明显增加,其干扰时则显著抑制c-Myc和转化生长因子β1的表达;③提示长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1能够影响成纤维细胞的形态和生物学功能,可能与转化生长因子β1/smad2/3/c-Myc通路有关;该研究可为盆腔器官脱垂患者的临床诊断和治疗提供新思路。

白藜芦醇阻断TGF-β1/Smad信号通路抑制脑胶质瘤细胞迁移侵袭及上皮间质转化

目的探究白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞黏附、迁移、侵袭、上皮间质转化(EMT)及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路的调控作用。方法体外培养人脑胶质瘤T98G细胞,分为对照组(不做干预)、实验组(12.5μmol·L^(-1)白藜芦醇组、25μmol·L^(-1)白藜芦醇组、50μmol·L^(-1)白藜芦醇组)、5-氟尿嘧啶组(50 mg·L^(-1)的5-氟尿嘧啶)、抑制剂组(50μmol·L^(-1)白藜芦醇+10μmol·L^(-1) TGF-β1/Smad通路抑制剂LY2109761)和激活剂组(50μmol·L^(-1)白藜芦醇+10μmol·L^(-1)TGF-β1/Smad通路激活剂SRI-011381),干预24 h。用细胞计数试剂盒比色(CCK-8)、倒置显微镜、黏附实验、划痕实验、Transwell小室及蛋白印迹(Wb)法对细胞活力、形态、黏附、迁移、侵袭能力及EMT和TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达水平进行分析。结果与对照组比较,12.5、25μmol·L^(-1)白藜芦醇组对细胞活力没有显著变化(P>0.05),50μmol·L^(-1)白藜芦醇组和5-氟尿嘧啶组的细胞活力显著降低(P<0.05),12.5、25μmol·L^(-1)白藜芦醇组较5-氟尿嘧啶组细胞活力显著升高(P<0.05)。其中50μmol·L^(-1)白藜芦醇组细胞活力接近50%且与5-氟尿嘧啶组差异无统计学意义(P>0.05),因此,选择在该浓度基础上分别加入TGF-β1/Smad通路抑制剂LY2109761和激活剂SRI-011381进行TGF-β1/Smad通路验证,且实验组中不再选取12.5和25μmol·L^(-1)白藜芦醇组进行后续实验,其他组别不变。与对照组相比,50μmol·L^(-1)白藜芦醇组和5-氟尿嘧啶组T98G细胞生长受到抑制、细胞黏附、迁移、侵袭能力及N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(FN)、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达水平显著降低,而E-钙粘蛋白(E-cadherin)、Smad7蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与50μmol·L^(-1)白藜芦醇组相比,抑制剂组T98G细胞生长进一步受到抑制、细胞黏附、迁移、侵袭能力、N-cadherin、Vimentin、FN、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而E-cadherin、Smad7蛋白表达水平显著增加(P<0.05);激活剂组较50μmol·L^(-1)白藜芦醇组T98G细胞生长状态较好,细胞黏附、迁移、侵袭能力、N-cadherin、Vimentin、FN及TGF-β1、p-Smad3蛋白表达水平显著增加(P<0.05),而E-cadherin、Smad7蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论白藜芦醇可显著抑制人脑胶质瘤T98G细胞的生长、黏附、迁移及侵袭,其作用机制可能与通过抑制TGF-β1/Smad通路的信号转导抑制EMT进程相关。

DJ-1过表达通过PTEN/Akt通路促进人胃癌MGC803细胞的增殖、迁移、侵袭与上皮间质转化

目的:探讨DJ-1基因过表达对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭与上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。方法:利用基因转染技术构建DJ-1基因过表达MGC803细胞,实验分为MGC803、空载体和DJ-1过表达组。采用MTT、平板克隆形成、细胞划痕和Transwell实验分别检测DJ-1过表达对MGC803细胞增殖、克隆形成、迁移与侵袭的影响;qPCR和WB法检测DJ-1过表达对各组细胞DJ-1、PTEN、Akt、p-Akt、Snail、vimentin、E-cadherin、MMP-9与TIMP-3表达的影响,相差显微镜下观察MGC803细胞形态学的变化。裸鼠荷瘤实验检测DJ-1过表达对MGC803细胞移植瘤体内生长的影响。结果:成功构建DJ-1基因稳定过表达的MGC803细胞。与MGC803组和空载体组比较,DJ-1过表达组细胞的增殖能力与克隆形成数均显著增加(均P<0.05),细胞迁移距离明显增加、划痕距离明显缩短(均P<0.05),迁移与侵袭细胞数显著增多(均P<0.05),DJ-1 mRNA与蛋白表达明显上调、PTEN mRNA与蛋白表达下调(均P<0.05),Akt总蛋白各组比较无明显差异(均P>0.05),p-Akt蛋白表达明显上调(P<0.05),Snail、vimentin与MMP-9表达上调、E-cadherin与TIMP-3表达下调(均P<0.05)。相差显微镜下见长梭形细胞数目增多,圆形与椭圆形细胞减少,异型性更为明显。荷瘤裸鼠体内实验结果表明,与MGC803组相比较,DJ-1过表达组MGC803细胞移植瘤生长速度明显加快、移植瘤质量显著增加(均P<0.05)。结论:DJ-1过表达可通过PTEN/Akt通路在体内外抑制MGC803细胞的增殖、迁移、侵袭与EMT。

circPVT1靶向调控miR-195-5p/SOX9轴影响结肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化

目的:探究环状RNA浆细胞瘤变体易位1(circPVT1)靶向调控微小RNA-195-5p(miR-195-5p)/性别决定区Y框蛋白9(SOX9)轴对结肠癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养人正常结肠上皮细胞NCM-460、人结肠癌细胞系(SW480、HCT116、HCT29、LOVO、SW620)至对数期,将SW480细胞分为对照组(正常培养SW480细胞不进行转染)、空载质粒组(转染空载质粒)、circPVT1沉默组[转染circPVT1小干扰RNA(siRNA)质粒]、miR-195-5p过表达组[转染miR-195-5p模拟物(mimics)质粒]、SOX9沉默组(转染SOX9 siRNA质粒)、circPVT1沉默+miR-195-5p低表达组(转染circPVT1 siRNA和miR-195-5p siRNA质粒)。各组转染相应质粒后培养48 h。荧光定量PCR法检测NCM-460细胞、人结肠癌细胞系(SW480、HCT116、HCT29、LOVO、SW620)和各组SW480细胞circPVT1、miR-195-5p、SOX9 mRNA的表达;噻唑蓝和流式细胞仪分别检测各组SW480细胞增殖和凋亡;蛋白印迹法检测各组SW480细胞SOX9、凋亡和EMT相关蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测circPVT1与miR-195-5p、miR-195-5p与SOX9的靶向关系。结果:与NCM-460细胞比较,SW480细胞、HCT116细胞、HCT29细胞、LOVO细胞、SW620细胞中circPVT1、SOX9 mRNA表达显著升高,miR-195-5p表达显著降低(P<0.05);其中,SW480细胞中circPVT1、SOX9 mRNA表达最高,miR-195-5p表达最低;故选择SW480细胞进行后续实验。与对照组和空载质粒组比较,circPVT1沉默组circPVT1、SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低,miR-195-5p表达显著升高(P<0.05);miR-195-5p过表达组miR-195-5p表达显著升高,SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);SOX9沉默组SOX9 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。与对照组和空载质粒组比较,circPVT1沉默组、miR-195-5p过表达组、SOX9沉默组细胞增殖率、Bcl-2、Vimentin蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。与circPVT1沉默组比较,circPVT1沉默+miR-195-5p低表达组miR-195-5p、凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著降低,SOX9 mRNA及蛋白、细胞增殖率、Bcl-2、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05)。circPVT1与miR-195-5p、miR-195-5p与SOX9存在靶向调控关系。结论:沉默circPVT1可以靶向上调miR-195-5p表达,抑制SOX9表达,进而抑制SW480细胞增殖和EMT进程,促进其凋亡。

HMGB1、MYCN在儿童神经母细胞瘤组织中的表达及其意义

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、骨髓细胞瘤病毒相关基因(MYCN)在儿童神经母细胞瘤(NB)组织中的表达及临床意义。方法回顾性分析75例NB患儿临床资料。术中采集所有患儿病理标本及癌旁组织标本,术后及时送至病理科检验,并开展免疫组织化学法检测HMGB1、MYCN在病理标本及癌旁组织标本中的表达情况。比较HMGB1、MYCN在肿瘤组织及癌旁组织中的表达水平;分析HMGB1表达、MYCN表达与病理特征间的关系。结果肿瘤组织HMGB1阳性表达率、MYCN阳性表达率均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。HMGB1阳性组肿瘤转移率、肿瘤分期Ⅲ期率、低分化率高于HMGB1阴性组,差异有统计学意义(P<0.05);MYCN阳性组肿瘤转移率、肿瘤分期Ⅲ期率、低分化率高于MYCN阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HMGB1、MYCN在儿童NB组织中呈高表达,且阳性表达与肿瘤转移、肿瘤分期及分化程度存在密切关系,或可作为临床诊疗新靶点。

长链非编码RNA浆细胞瘤多样异位基因1对幽门螺旋杆菌感染胃上皮细胞系引起的炎症反应和细胞迁移的影响

目的研究长链非编码RNA浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)在幽门螺旋杆菌(HP)感染相关胃癌中的作用。方法在HP感染的胃黏膜正常上皮细胞(GES-1)中,用实时定量PCR(qRT-PCR)检测PVT1的表达;通过瞬时转染小干扰RNA,在胃癌细胞系SGC-7901中敲低PVT1,然后与HP共培养,用qRT-PCR检测炎症相关细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-1β、IL-6及IL-8的表达情况;在敲低PVT1后,通过细胞划痕实验,检测PVT1对胃癌细胞增殖及迁移能力的影响。RNA下拉联合质谱分析技术检测能够与PVT1相互结合的蛋白,并用RNA下拉实验联合Western blot验证质谱分析结果的准确性。结果在HP感染的胃黏膜正常上皮细胞GES-1中,PVT1明显上调(t=7.160,P=0.019)。在胃癌细胞中敲低PVT1,再用HP感染,发现炎症因子TNF-α(t=3.899,P=0.011)、IL-1β(t=14.610,P=0.000)、IL-8(t=6.557,P=0.001)的表达受到明显抑制。PVT1敲低后,对胃癌细胞的增殖能力无影响,但抑制细胞的迁移能力。PVT1可能与RPS8蛋白相互作用。结论PVT1可能作为促炎因子促进胃癌细胞迁移,在HP感染相关的胃癌中发挥调节作用。

锌转运体1基因在脑胶质瘤组织中的表达及其对U87细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:检测锌转运体1(zinc transporter 1,ZnT1)基因在胶质瘤组织中的表达,初步探索ZnT1对U87细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:收集2015年10月至2017年1月中国医科大学附属第一医院神经外科收治的术前未接受过放化疗的Ⅱ~Ⅲ期胶质瘤患者20例,采用Real-time PCR和Western blotting检测胶质瘤组织与瘤旁组织中ZnT1 mRNA和蛋白的含量。向胶质瘤细胞系U87中分别转染ZnT1和si-ZnT1质粒,构建ZnT1过表达和低表达细胞系,MTT和Transwell实验分别检测ZnT1对U87细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:ZnT1mRNA和蛋白在胶质瘤组织中表达显著高于瘤旁组织(均P<0.05)。成功构建ZnT1过表达和低表达U87细胞系。与空白和空质粒对照组相比,转染12 h后,ZnT1过表达U87细胞的增殖(0.54±0.01 vs 0.45±0.04、0.43±0.03,P<0.01)、侵袭和迁移能力(均P<0.05)显著升高;而转染12 h后ZnT1低表达U87细胞的增殖(0.37±0.03 vs0.45±0.01、0.44±0.03,P<0.01)、侵袭和迁移能力(均P<0.05)显著降低。结论:ZnT1在胶质瘤组织中呈高表达,ZnT1可以促进胶质瘤U87细胞的增殖、迁移和侵袭。

浆细胞瘤多样异位基因1在卵巢癌组织中的表达及其对SKOV3细胞恶性生物学行为的影响

目的:研究人浆细胞瘤多样异位基因1(plasma-cytoma variant translocation gene 1,PVT1)对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:选取2015年11月至2017年4月郑州大学第三附属医院妇产科收治的卵巢癌患者32例。利用实时荧光定量PCR检测PVT1在32例卵巢癌组织及癌旁组织的表达。通过CCK-8法、划痕法及Transwell法检测PVT1对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果:PVT1在SKOV3细胞和卵巢癌组织表达水平均明显升高(均P<0.01);PVT1表达水平与卵巢癌者组织学分级、FIGO分期及淋巴结转移具有相关性(P<0.05或P<0.01)。转染PVT1 siRNA 36、48 h后,SKOV3细胞中PVT1表达水平明显下降(P<0.05);敲减PVT1的表达能够降低SKOV3细胞的增殖能力(P<0.05),抑制SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05或P<0.01)。结论:PVT1在卵巢癌中高表达,抑制PVT1表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力。

沉默ZEB1基因对胶质瘤U87细胞上皮-间质转化的影响

目的:探讨沉默锌指E盒结合同源框1(ZEB1)基因对胶质瘤U87细胞间质标志物表达和细胞迁移的作用,阐明ZEB1对胶质瘤细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:将构建的ZEB1短发夹RNA(shRNA)干扰质粒(shZEB1#1和shZEB1#2)和对照质粒(shCtrl)转染至胶质瘤U87细胞,Westernblotting法检测干扰效果。将胶质瘤U87细胞分为对照组(转染shCtrl的胶质瘤U87细胞)、EMT组[转染shCtrl的胶质瘤U87细胞用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导EMT]和ZEB1基因沉默组(转染shZEB1的胶质瘤U87细胞用TGF-β1诱导EMT)。Westernblotting法检测各组细胞中间质标志物(N-钙黏蛋白和波形蛋白)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达水平,划痕愈合实验检测各组细胞的迁移率。结果:Westernblotting法检测,转染shZEB1#1和shZEB1#2的胶质瘤U87细胞中ZEB1蛋白表达水平较转染shCtrl的细胞明显降低(P<0.05或P<0.01),shZEB1#2对ZEB1表达的抑制效果更明显,表明ZEB1已稳定转染到U87细胞。与对照组比较,EMT组胶质瘤U87细胞中N-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-9蛋白表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01);与EMT组比较,ZEB1基因沉默组N-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。EMT组细胞迁移率明显高于对照组(P<0.01),而ZEB1基因沉默组细胞迁移率明显低于EMT组(P<0.01)。结论:沉默ZEB1基因表达可抑制胶质瘤U87细胞EMT,并降低细胞迁移能力,提示ZEB1可作为侵袭性胶质瘤治疗的重要靶标。

转化生长因子-β1对淋巴瘤细胞生长及c-myc基因表达的影响

目的利用Burk itt淋巴瘤细胞株-Jiyoye细胞探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对淋巴瘤细胞生长的抑制作用和c-myc基因的影响。方法利用MTT及RT-PCR方法检测细胞生存率、c-myc基因的表达水平。结果不同浓度的TGF-β1作用于Jiyoye细胞24,48 h和72 h后,细胞生存率随浓度的升高和时间的延长而逐渐降低。实验组各时间段的生存率与对照组相比显著降低(P<0.01),同时,实验组各组间均有显著性差异(P<0.01)。实验组中c-myc基因的表达24 h开始下降,48 h和72 h时明显受抑制,与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。结论TGF-β1可在浓度和时间依赖性抑制Jiyoye细胞株生长的同时抑制c-myc基因的表达。

变异性浆细胞瘤异位1基因对高糖培养的大鼠心脏成纤维细胞的影响及其机制

目的探讨变异性浆细胞瘤异位1(PVT1)基因对高糖培养的大鼠心脏成纤维细胞(CF)的影响及其作用机制。方法取对数生长期CF并随机分为空白对照组、高糖组、PVT1小干扰RNA(siRNA)组、PVT1 siRNA阴性对照(NC)组(PVT1 siRNA NC组)。空白对照组和高糖组细胞不进行转染,PVT1 siRNA组及PVT1 siRNA NC组细胞分别转染PVT1 siRNA及PVT1 siRNA NC试剂;转染24 h后,高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组细胞用含25 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基培养,模拟高糖培养条件,空白对照组细胞不作处理。采用天狼猩红染色法观察高糖处理24 h后4组细胞胶原纤维沉积情况。流式细胞术检测高糖处理24 h后4组细胞细胞周期分布情况。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测高糖处理24 h后4组细胞中PVT1、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))mRNA及微RNA(miR)-93-5p的表达。采用Western blot法检测高糖处理24 h后4组细胞中TGF-β_(1)、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad7、p21、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)表达情况。另取对数生长期CF,随机分为未转染组、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组、PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 NC+miR-93-5p NC组;未转染组细胞不进行转染,PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组细胞转染PVT1 siRNA和miR-93-5p inhibitor,PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组细胞转染PVT1 siRNA和miR-93-5p NC,PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组细胞转染PVT1 NC和miR-93-5p inhibitor,PVT1 NC+miR-93-5p NC组细胞转染PVT1 NC和miR-93-5p NC,转染24 h后,用含25 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基处理5组细胞,模拟高糖培养条件。采用Western blot法检测高糖处理24 h后5组细胞中TGF-β_(1)、Smad7、ColⅠ蛋白表达表达情况。结果与空白对照组比较,高糖组细胞数量增多,红色胶原纤维沉积增加;与高糖组比较,PVT1 siRNA组细胞间隙变大,红色胶原纤维沉积减小;PVT1 siRNA NC组细胞红色胶原纤维沉积与高糖组相近。高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组G_(0)+G_(1)期细胞比例显著低于空白对照组,S+G_(2)+M期细胞比例显著高于空白对照组(P<0.05);PVT1 siRNA组G_(0)+G_(1)期细胞比例显著高于高糖组,S+G_(2)+M期细胞比例显著低于高糖组(P<0.05);PVT1 siRNA NC组G_(0)+G_(1)期细胞比例显著低于PVT1 siRNA组,S+G_(2)+M期细胞比例显著高于PVT1 siRNA组(P<0.05);高糖组和PVT1 siRNA NC组G_(0)+G_(1)期细胞比例、S+G_(2)+M期细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组细胞中PVT1、TGF-β_(1) mRNA相对表达量均显著高于空白对照组,miR-93-5p相对表达量显著低于空白对照组(P<0.05);PVT1 siRNA组细胞中PVT1、TGF-β_(1) mRNA相对表达量显著低于高糖组,miR-93-5p相对表达量显著高于高糖组(P<0.05);PVT1 siRNA NC组细胞中PVT1、TGF-β_(1) mRNA相对表达量均显著高于PVT1 siRNA组,miR-93-5p相对表达量显著低于PVT1 siRNA组(P<0.05);高糖组和PVT1 siRNA NC组细胞中PVT1、TGF-β_(1) mRNA及miR-93-5p相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。高糖组、PVT1 siRNA组、PVT1 siRNA NC组细胞中α-SMA、ColⅠ、TGF-β_(1)蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)显著高于空白对照组,p21、Smad7蛋白相对表达量显著低于空白对照组(P<0.05);PVT1 siRNA组细胞中α-SMA、ColⅠ、TGF-β_(1)蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)显著低于高糖组,p21、Smad7蛋白相对表达量显著高于高糖组(P<0.05);PVT1 siRNA NC组细胞中α-SMA、ColⅠ、TGF-β_(1)蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)显著高于PVT1 siRNA组,p21、Smad7蛋白相对表达量显著低于PVT1 siRNA组(P<0.05);高糖组和PVT1 siRNA NC组细胞中α-SMA、ColⅠ、p21、TGF-β_(1)、Smad7蛋白相对表达量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比较差异无统计学意义(P>0.05)。PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组细胞中TGF-β_(1)、ColⅠ蛋白相对表达量显著低于未转染组,Smad7蛋白相对表达量显著高于未转染组(P<0.05);PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组细胞中TGF-β_(1)、ColⅠ蛋白相对表达量显著高于未转染组,Smad7蛋白相对表达量显著低于未转染组;未转染组细胞中TGF-β_(1)、Smad7、ColⅠ蛋白相对表达量与PVT1 NC+miR-93-5p NC组、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组比较差异无统计学意义(P>0.05)。PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 NC+miR-93-5p NC组细胞中TGF-β_(1)、ColⅠ蛋白相对表达量显著高于PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组,Smad7蛋白相对表达量显著低于PVT1 siRNA+miR-93-5p NC组(P<0.05);PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组、PVT1 NC+miR-93-5p NC组细胞中TGF-β_(1)、ColⅠ蛋白相对表达量显著低于PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组,Smad7蛋白相对表达量显著高于PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor组(P<0.05);PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor组与PVT1 NC+miR-93-5pNC组细胞中TGF-β_(1)、Smad7、ColⅠ蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PVT1基因沉默可促进miR-93-5p/Smad7通路活化,抑制TGF-β_(1)/Smad通路激活,进而抑制高糖培养的CF纤维化进程。