嗜热四膜虫染色体浓缩调节因子(RCC1)的定位及功能

真核细胞中染色体浓缩调节因子(regulator of chromosome condensation 1,RCC1)是RanGTPase唯一的鸟嘌呤核苷酸交换因子.染色质结合的RCC1和RanGTPase相互作用,催化细胞核内RanGDP向RanGTP的转化,进而调控了核质间的定向运送、有丝分裂期纺锤体的组装以及核膜的形成.本实验从原生生物嗜热四膜虫大核基因组中鉴定了1个新的RCC1(TTHERM_00530380)基因.该基因全长2 541 bp,包含2个内含子序列,开放阅读框为2 181 bp,编码726个氨基酸.实时荧光定量PCR表明,RCC1在四膜虫营养生长、饥饿以及有性生殖时期都有表达,且在有性生殖转录水平达到最高.免疫荧光定位分析表明,HA-RCC1在营养生长和饥饿时期,定位于大核和小核中;在有性生殖时期,定位于亲本大核、减数分裂的小核、新生成的大核和凋亡的大核中.过表达RCC1导致大核的无丝分裂异常,细胞增殖变慢,最终产生无大核的后代细胞.敲减RCC1导致了多小核的产生.结果表明,RCC1参与调控了四膜虫细胞核的分裂,RCC1的正常表达对核分裂以及细胞增殖起到重要的调控作用.

泛素E3连接酶CHIP介导RCC2的泛素化及降解

目的 本课题组前期构建了一种正交泛素传递方法,并发现染色体浓缩调节蛋白2(RCC2)是泛素连接酶CHIP的潜在底物。本实验旨在验证CHIP是否能介导RCC2的泛素化及降解,以期通过CHIP来泛素化调控RCC2的表达和功能。方法 首先构建CHIP及其突变体质粒,验证CHIP与RCC2是否有相互作用;然后构建pLVX-RCC2-FLAG重组质粒并转染进CHIP敲减细胞株(shCHIP)、HEK293细胞株、CHIP过表达细胞株(OE CHIP),通过免疫共沉淀下拉富集RCC2-FLAG并检测其泛素化水平;接下来在HEK293细胞中转染不同量的CHIP,以及设置CHX chase蛋白稳定性实验,检测RCC2的蛋白水平变化;最后利用泛素突变体K48R-Ub及K11R-Ub进行CHIP介导RCC2上形成泛素链的实验检测。结果 在HEK293细胞中,CHIP能够介导RCC2的泛素化,并在RCC2上形成K48和K11多聚泛素链,促进其通过蛋白酶体发生降解。结论 泛素连接酶CHIP能够介导RCC2的泛素化及降解,为实现通过CHIP来泛素化调控RCC2提供了理论基础。

联合多个修复相关基因的mRNA用于大鼠骨骼肌损伤时间推断

目的探讨DNA聚合酶δ相互作用蛋白3(polymerase delta-interacting protein 3,POLDIP3)、类染色体浓缩调节样蛋白(regulator of chromosome condensation 1 like,RCC1L)、高脯氨酸蛋白5(proline-rich 5,PRR5)、核糖核酸输出蛋白1(ribonucleic acid export 1,RAE1) 4种修复相关基因的mRNA联合应用于早、中期损伤时间推断的方法。方法制备大鼠骨骼肌挫伤模型,于损伤后4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44和48h取挫伤区肌肉组织,观察大鼠骨骼肌挫伤后修复过程中的组织形态学变化。利用逆转录实时定量聚合酶链反应(reverse transcription real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Poldip3、Rcc1l、Prr5、Rae1 mRNA的相对表达量。利用4种基因在损伤后各时间点的表达模式对损伤过程进行分段,再通过Fisher判别法对上述分段结果进行准确性验证。结果组织形态学变化结果显示,骨骼肌挫伤后随着时间的延长发生修复,联合4种基因的表达趋势可将48h内的损伤时间分为4～12h、16～28h、32～48h 3个时间段,Fisher判别分析结果显示此3个时间段分类的准确率分别为83.3%、75.0%、73.3%。结论根据各基因相对表达量进行分组判别的准确度较高,联合多种基因mRNA的相对表达较单一指标进行损伤时间推断更为准确,结合Fisher判别分析可应用于早、中期损伤时间推断。

直肠癌组织中RCC1的表达及临床意义

目的探讨直肠癌组织中染色体浓缩调节因子1(RCC1)的表达及临床意义。方法采用GEPIA数据库分析RCC1在结直肠癌组织中的表达情况及与预后的关系。收集本院2015年1月至2018年10月经病理确诊的66对直肠癌组织和配对癌旁组织,采用实时定量PCR(QPCR)检测上述组织中RCC1 mRNA水平,分析RCC1表达与直肠癌临床病理特征(性别、年龄、TNM分期、肿瘤大小、分化程度、浸润深度和淋巴结转移)的关系。结果GEPIA数据库分析显示结肠癌和直肠癌组织中RCC1水平均高于正常组织(P<0.05);结直肠癌全组分析显示RCC1表达与总生存期(OS)无关,但低表达的无复发生存期(RFS)优于高表达(HR=0.83,P=0.026);结肠癌亚组分析显示低表达的OS和RFS均优于高表达(HR=0.59,P=0.034;HR=0.55,P=0.016),而直肠癌亚组分析显示RCC1表达与OS和RFS均无关(P>0.05)。直肠癌组织中RCC1 mRNA水平为1.987±0.713,高于癌旁组织的1.152±0.561(P<0.05)。RCC1表达与性别、年龄和分化程度均无关(P>0.05),而与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期均有关(P<0.05)。结论肿瘤细胞RCC1的异常表达可能参与人直肠癌的发生发展,RCC1表达可能是肿瘤细胞进展和预后不良的潜在标志物。

石川岛播磨公司煤粉燃烧器的技术进展

简介了石川岛播磨公司的“DF双调燃烧器”和“IHI-FW卧式旋风分离器燃烧器”,重点介绍了该公司正在研制中的“内部分隔型宽调节比燃烧器”技术,分析了该公司煤粉燃烧器技术发展的特点和趋势。