不同浓度碘酸钾对仔2代大鼠小脑Purkinje细胞的影响

目的:探讨不同浓度碘酸钾(KIO3)对仔2代Wistar大鼠小脑Purkinje细胞发育的形态学影响。方法:将断乳后一个月Wistar大鼠随机分为5组(NI、5HI、10HI、50HI、100HI),饮用不同浓度的KIO3碘水,取1d、20d、60d龄仔2代大鼠小脑,应用镀银染色法和形态计量术动态观察仔2代大鼠小脑的形态学发育情况。结果:在1d龄仔鼠,与NI组相比,各碘过量组仔鼠小脑Purkinje细胞树突覆盖面积、分枝密度、总长度、棘突密度均无明显变化(P>0.05),在20 d和60d龄仔鼠,各碘过量组与NI组相比均表现出一定程度的脑发育落后,其中以100HI组最为明显(P<0.05)。结论:碘过量会影响仔2代大鼠小脑的发育,且影响程度呈现明显的剂量—效应关系。其机理可能与碘过量所致甲状腺功能低下有关,但大鼠对碘过量有极强的耐受力,当碘摄入量为正常摄入量的50倍以内时,不会影响仔2代大鼠小脑Purkinje细胞的发育。

耐力训练对大鼠小脑Purkinje细胞超微结构的影响

运用形态计量方法对耐力训练后大鼠小脑Ｒｕｒｋｉｎｊｅ细胞线粒体超微结构进行了观察。结果显示，耐力训练大鼠的小脑Ｐｕｒｋｉｊｅ细胞线粒体超微结构发生了明显变化，线粒体体积增大，数目增多，嵴致密，基质电子密度增加。形态计量学显示，线粒体体密度（Ｖυ）、面密度（Ｓυ）、数密度（Ｎυ）均增加，与对照组比较，Ｐ＜０．０１，比表积减少（Ｐ＜０．０５）。

杂色曲霉素对小鼠小脑Purkinje细胞TNF-α和TGF-β_2 mRNA表达的影响

本研究观察了杂色曲霉素(sterigmatocystin,ST)对小鼠Purkinje细胞TNF-α和TGF-β2 mRNA表达的影响。给予BALB/c小鼠一次灌胃ST(3000μg/kg),分别于灌胃后0.5、1、2、4、8和16h处死动物,用原位杂交方法观察了Purkinje细胞TNF-α和TGF-β2 mRNA的表达。TNF-α和TGF-β2mRNA在对照组和处理组各时间点的Purkinje细胞均有阳性表达。但各处理组与对照组比较,TNF-α和TGF-β2 mRNA表达显著增加(P<0.01)。上述结果说明单次ST灌胃后TNF-α和TGF-β2 mRNA在Purkinje细胞表达明显增加,TNF-α和TGF-β2在ST对脑组织的损伤过程中起着重要的作用。

国人胎儿小脑皮质Purkinje细胞层突触的发育

应用超薄切片观察了人胚 19、2 1、2 6、和 34周小脑皮质 Purkinje细胞层突触的发育。观察到轴—树、轴—棘—棘、轴—树—树、树—树、体—体、棘—体突触与树—树—树连续性突触及树—轴—树嵴状突触超微结构的发育。突触多为 Gray 型 ,而

钙调蛋白在C型Niemann-Pick病小鼠Purkinje细胞的表达

目的:探讨钙调蛋白在C型Niemann-Pick病(NPC)小鼠Purkinje细胞的表达。方法:采用免疫组织化学和Westen Blot技术检测3种钙调蛋白Calbindin D28k、IP3R1、SERCA2b在4、6、8周龄NPC小鼠小脑部的表达,以同周龄WT(野生型)小鼠作为对照组。结果:CalbindinD28k和IP3R1在6、8周龄时表达较WT小鼠显著下降,在4周龄时无明显减少,SERCA2b在8周龄时表达较WT小鼠显著下降。结论:3种钙调蛋白表达的下降可能导致钙失衡,参与神经元变性。

Balb/C乳鼠小脑Purkinje细胞原代培养方法

目的建立一种简单、有效的Balb/C乳鼠小脑Purkinje细胞原代培养方法,并初步研究其细胞电生理特性。方法钝性分离生后24h内的乳鼠小脑,采用低浓度胰蛋白酶加机械吹打法获得单细胞悬液,然后用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养,24h候更换为1%N2+1%T3+1%谷氨酰胺的DMEM/F12维持培养,3-5d天后进行细胞免疫荧光染色,7-9d天后用全细胞膜片钳单通道法记录钙电流。结果该方法培养的神经元形态典型,细胞学鉴定阳性率高(>70%),并能记录到钙通道电流。结论该方法取材容易,操作简便,且培养出的原代Purkinje细胞生长状态较好,神经元的活性较高,可用于电生理研究。

C型Niemann-Pick病小鼠小脑Purkinje细胞的电生理特性研究

目的:比较C型Niemann-Pick病(NPC)小鼠与野生型小鼠小脑Purkinje细胞膜电生理特性和钙电流的差异。方法:制备新鲜小鼠小脑脑片,利用组织膜片钳全细胞记录法记录出生后20～24d(P20～24)、出生后5周(P5w)小鼠Purkinje细胞膜的电生理特性、钙通道的I-V曲线和钙电流密度。结果:不同年龄段的NPC小鼠与野生型小鼠相比,Purkinje细胞膜的电生理特性及钙电流变化无统计学差异。结论:NPC小鼠脂质代谢异常并未影响小脑Purkinje细胞的电生理特性,推测Purkinje细胞电生理特性改变在NPC小鼠Purkinje细胞变性机制中起次要作用。

缺氧新生儿小脑Purkinje细胞的体视学观察

缺氧新生儿小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ细胞的体视学观察李新功，吴起嵩（胜利石油管理局中心医院病理科山东东营２５７０３４胜利油田卫生学校病理学教研组）我们在对１３９例缺血缺氧新生儿尸检资料的观察分析中发现，所有病例均存在不同程度的小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ细胞减少［...

锁阳对耐力训练大鼠小脑Purkinje氏细胞线粒体超微结构的影响

采用形态计量学的方法分析了游泳耐力训练后中药锁阳对大鼠小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ细胞线粒体超微结构的影响，探讨了锁阳提高机体运动能力方面的作用。方法：ＳＤ雄性大鼠３２只，随机分成４组，即对照组，游泳组，锁阳对照组，游泳兼喂锁阳组。游泳的两组进行连续１２周的游泳耐力训练。结果：游泳的两组大鼠小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ氏细胞线粒体发生了明显的形态学变化，数目增多，体积增大，嵴致密，基质电子密度增高，但游泳组大鼠线粒体部份发生了损伤性变化。而游泳兼喂锁阳的大鼠小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ氏细胞线粒体未见有退行性变化。进一步形态计量学分析游泳组和游泳兼喂锁阳组大鼠小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ氏细胞线粒体体密度、面密度、数密度均比对照组和锁阳对照组增大Ｐ＜０．０５，而游泳兼喂锁阳组的体密度比游泳组降低，比表面比游泳组的增大Ｐ＜０．０５。结论：中药锁阳能够改善小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ氏细胞线粒体的损伤性变化，进一步提高细胞的整体能量代谢水平，防止运动性疲劳的过早出现。

Morphogenesis and Regulation of Bergmann Glial Processes During Purkinje Cell Dendritic Spine Ensheathment and Synaptogenesis

星形胶质细胞在突触形成中发挥重要作用,但星形胶质细胞突起如何在发育过程中与突触结构相联系还不是很清楚。本文分析在小脑突触发生过程中Bergmann胶质细胞(BG)突起生长的类型。本文发现在这个过程中,BG突起向外生长与树突棘增多的包被作用相关。此外,双光子时间分辩显像显示BG突起是高度动态的,在棘包被过程中突起趋于稳定。虽然突触活力依赖于肌动蛋白的聚合作用,但细胞骨架调节器Rac1和RhoG的活动在胶质细胞突起的动力或密度上并未发挥作用,而是对于保持突起长度起关键性作用。本文扩展这个发现,探查突起形态和包被之间的关系,发现缩短的突起导致棘覆盖的减少。本文进一步发现在BG表达dn-Rac1和低水平突触包被的区域,显示突触数量的增加。这些分析提示BG突起如何生长并包围突触结构,阐明BG突起结构对突触包被适当发育的重要性,并提示包被在突触形成中的作用。

山羊心脏左室条索细胞的定量分析及超微结构

目的观察山羊左室条索细胞的超微结构及其与心内膜下Purkinje细胞的差异。方法对山羊30条左室条索行石蜡切片,苏术精-伊红和Marsson染色,光镜观察;利用计算机图像分析系统对条索的主要细胞进行计量分析;利用透射电镜观察左室条索的超微结构。结果左心室条索的细胞形态为长形、椭圆形、圆形和不规则形。部分细胞有双核。定量分析显示:条索内细胞较心内膜下Purkinje细胞小。电镜下条索内细胞呈束状排列:细胞内肌原纤维多而分散,核周呈现亮区;线粒体和高尔基器丰富。细胞之间有较多的毛细血管、神经末梢。结论山羊左室条索的细胞具备Purkinje细胞特征,是心室正常传导通路的一部分。

丙烯酰胺中毒Ola和6J鼠小脑Purkinje细胞的病理改变

目的 观察丙烯酰胺 (ACR)中毒后Ola和 6J鼠小脑的不同病理改变。方法 采用病理学技术对小脑Purkinje细胞进行光镜和电镜定性分析。结果 光镜下小脑整个Purkinje细胞深染 ,形态不规则 ;电镜下偶见胞膜限局性膨出 ,内含一些管状滑面内质网 ,在突起的表面部分胞膜分层、变厚。上述改变仅见于 6J鼠 ,而Ola鼠未见异常变化。结论 丙烯酰胺中毒导致 6J鼠小脑Purkinje细胞病理改变 。

红腹锦鸡小脑皮层的显微和亚显微结构观察

为探讨红腹锦鸡小脑皮层形态结构特征,用光镜和透射电镜观察了红腹锦鸡的小脑皮层显微和亚显微结构.结果表明,红腹锦鸡小脑皮层可分分子层、Purkinje细胞层、颗粒层3层.分子层含少量小细胞,细胞大小在4.5～8.3μm;Purkinje细胞层细胞体呈梨状,底宽在17.8～25.6μm之间,高约为18～30μm,细胞中含有丰富的粗面内质网、游离核糖体、线粒体、高尔基体、溶酶体等;颗粒层的颗粒细胞细胞核大,细胞质少.有髓鞘神经纤维中轴突直径多在0.66～1.62μm之间,轴突或树突中含有线粒体等细胞器,也含有丰富的微管,髓鞘厚约为0.13μm.血-脑屏障的内皮细胞的细胞核呈扁平形,细胞质中多含有线粒体和少量吞饮小泡.

人胎小脑内Calbind in和Parvalbum in的免疫组织化学研究(英文)

既往研究显示的哺乳动物小脑单位和小脑缝隙，在人类称之为Ｐｕｒｋｉｎｊｅ 细胞群和缝隙。进一步的研究证实，一种钙结合蛋白Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ（ＣＢ）在啮齿动物小脑的发育过程中可作为Ｐｕｒｋｉｎｊｅ 细胞群的短时标志物。为了观察人胎Ｐｕｒｋｉｎｊｅ 细胞群和小脑缝隙的发育变化，并试图证实在小脑Ｐｕｒｋｉｎｊｅ 细胞的发育过程中钙结合蛋白的表达是否有差别，本文选用胎龄１３、１５、２０、２６、３２和３９ 周的小脑分别作ＣＢ和Ｐａｒｖａｌｂｕｍ ｉｎ（ＰＶ）的免疫组织化学反应，ＣＢ和ＰＶ 均显示内外方向的空间分布顺序，并且除１３ 周ＣＢ有表达而ＰＶ 没有表达外，其它胎龄均显示了相似的分布模式。在第１３ 周，ＣＢ阳性的Ｐｕｒｋｉｎｊｅ 细胞前体仅见于小脑蚓，而小脑半球则不存在，阳性细胞体和轴突组合成前后方向的细胞群，与非免疫反应性的条带交替出现。至第１５ 周，小脑蚓和半球的Ｐｕｒｋｉｎｊｅ 细胞均可被ＣＢ和ＰＶ 标记。ＣＢ和ＰＶ 阳性胞体和轴突以非免疫反应的缝隙为界，在小脑蚓和蚓旁组织组成纵向的细胞群。小脑叶片内Ｐｕｒｋｉｎｊｅ 细胞群和缝隙在前后和背腹方向上排列一致。小脑半球内的Ｐｕｒｋｉｎｊｅ 细胞缺乏这种条带状结构。从２４周起。

Cdk4/cyclin D1通路异常参与C型Niemann-Pic病小鼠神经元变性

以Balb/cnihnpc-1小鼠模型为对象,使用免疫组织化学和免疫印迹技术来研究cdk4/cyclinD1/Rb2通路的激活与神经元神经丝蛋白的过度磷酸化及神经元变性的相互关系,探讨C型Niemann-Pick病(NPC)病理性球状神经轴突形成的机制。实验表明,cdk4/cyclinD1在该小鼠模型脑白质球状神经轴突中异常聚集,其下游因子Rb2/p130呈现过度磷酸化并分布在上述病理性结构中。它们的分布随鼠龄增加而逐渐从脑干扩大到其他脑白质区域。球状神经轴突的主要成分之一为过度磷酸化神经丝蛋白,它与cdk4的分布在时空中具有高度的一致性。提示cdk4/cyclinD1/Rb2通路激活参与NPC神经元球状神经轴突形成,并与神经丝蛋白的异常磷酸化关系密切。该通路可作为干预神经元变性的一个新的靶点来挽救病损的神经元。

氨基酰-tRNA合成酶与神经退行性疾病

氨基酰-tRNA合成酶催化tRNA的氨基酰化反应为生物体内的蛋白质合成提供原料.这类古老且保守的蛋白质分子在高等生物复杂的细胞分子网络中分化出的新功能是目前人们关注的焦点.近期在对一些患有神经退行性疾病的病人和小鼠模型的研究中发现,位于酪氨酰-tRNA合成酶、甘氨酰-tRNA合成酶和丙氨酰-tRNA合成酶上的突变,可分别导致DI腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Toothdisease,CMT)C型,腓骨肌萎缩症2D型及小脑浦肯雅(Purkinje)细胞丢失.初步的致病机理研究表明,致病突变对这3种酶的影响各不相同:酪氨酰-tRNA合成酶的氨基酰化催化能力受到影响,甘氨酰-tRNA合成酶受影响的可能是一种未知的新功能,而丙氨酰-tRNA合成酶受影响的则是它的编校功能.这些研究结果揭示了氨基酰-tRNA合成酶涉及神经退行性疾病的广泛性和其机制的复杂性,并将促进对神经退行性疾病这一类常见疾病的病理和治疗方法的研究.

复方氯胺酮口服液对鼠小脑N-甲基D-天冬氨酸受体1和γ氨基丁酸A受体的影响

目的观察大鼠服用复方氯胺酮口服液(CKOS)后不同时点行为变化及小脑中N甲基D天冬氨酸受体1(NMDAR1)和γ氨基丁酸A受体(GABAAR)的分布,探讨其口服液对鼠小脑NMDAR1和GABAAR的影响及其作用机制。方法采用免疫组化、原位杂交技术检测SD大鼠服用CKOS后不同时点NMDAR1和GABAAR在小脑Purkinje细胞的表达情况。结果0点处(正常对照)NMDAR1在小脑Purkinje细胞表达最多;随着药效的增加,NMDAR1在小脑Purkinje细胞上的表达逐渐减少,30min时NMDAR1表达最低值,120min时Purkinje阳性细胞逐渐恢复,360min恢复接近正常。而GABAAR与NMDAR1的表达方式正相反,GABAAR在Prukinje细胞上的表达随着药效的增强而增加,又随着药效减低而减少。结论CKOS对鼠小脑NMDAR1在Purkinje细胞上的表达呈剂量依赖抑制,应产生不协调运动。但GABAAR在Purkinje细胞上的表达呈剂量依赖增强,抑制不协调运动。CKOS对小脑的作用为促使大鼠协调运动。

胚胎脑组织移植长期存活的观察

大鼠胚胎小脑组织移植，移植物能够成活并逐渐生长。普肯野细胞胞体面积移植后５ｄ为３７．０９μｍ２，移植后２０ｄ增至２４７．０１μｍ２。移植后３０ｄ普肯野细胞胞体面积、分子层厚度均明显少于移植后２０ｄ，差异有显著性，（Ｐ＜０．０１）。移植后４０ｄ移植物周围可见巨噬细胞或淋巴细胞聚集，移植后６０ｄ，移植物变小，普肯野细胞缩小为１６６．３２μｍ２。普肯野细胞层和颗粒层可见固缩碎解的细胞核。移植后９０ｄ，移植物中仅见散在的普肯野细胞和巨噬细胞。提示胚胎小脑组织移植，移植物在宿主脑内存活时间比在其它部位长。

C型Niemann-Pick病小鼠P27^(kipl)表达异常与神经元变性和星形胶质细胞增生

目的 探讨细胞周期蛋白抑制物P2 7kipl在NPC小鼠模型中神经元变性、死亡及星形胶质细胞增生中的作用。方法 利用免疫组化和免疫荧光技术检测NPC 1小鼠脑部P2 7kipl表达及胶质细胞增殖的情况。结果 P2 7pipl在野生型小鼠大脑皮质、海马、基底节、脑干广泛的神经元及小脑Purkinje细胞均有较强的表达 ,而且在部分胶质细胞也存在免疫反应性 ,而在NPC小鼠的基底节、脑干神经元及小脑Purkinje细胞中P2 7kipl的表达明显弱于野生型小鼠。GFAP阳性星形胶质细胞出现P2 7kipl表达上调 ,其细胞数在NPC小鼠大脑皮质、海马及脑干 (尤其在桥脑处 )显著增多 ,提示星形胶质细胞异常增生。结论 在NPC小鼠中枢神经元发生病变的同时 ,星形胶质细胞也发生了明显的病理性增生 ,细胞周期蛋白酶抑制物P2