浮舰蛋白-1在非小细胞肺癌组织的表达及意义

目的研究浮舰蛋白-1(Flotillin-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及意义。方法选取2010年2月至2011年3月经病理科证实的NSCLC及癌旁组织各87例。采用Western blot方法分别检测癌与癌旁组织的Flotillin-1蛋白表达并进行对比,同时对比不同患者的Flotillin-1蛋白表达。结果NSCLC组的Flotillin-1阳性率为88.51%,显著高于癌旁组的27.59%。不同浸润深度、临床分期的NSCLC组织中Flotillin-1表达存在显著差异(均P<0.05)。Flotillin-1低表达的NSCLC患者无瘤生存期、总生存期分别为(4.6±0.5)年、(5.7±0.4)年,均显著高于高表达的(1.7±0.2)年、(2.2±0.3)年。结论 Flotillin-1在NSCLC组织中的表达与浸润深度、临床分期具有相关性,对评估患者预后有一定的参考价值。

水牛浮舰蛋白2基因克隆及序列分析

试验旨在克隆水牛浮舰蛋白2(Flotillin 2,FLOT2)基因并对其进行生物信息学分析,为揭示该基因在水牛发育繁殖中的作用奠定基础。本研究通过PCR扩增获得了FLOT2基因全长并进行克隆测序,结合生物信息学分析方法,预测及分析其蛋白质结构。结果表明,水牛FLOT2基因编码区长1 287bp,编码428个氨基酸,3′UTR区长277bp。多重序列比较分析显示,水牛FLOT2基因核苷酸序列与牛、山羊、绵羊、小鼠、马、猫和人相应序列的相似性分别为98%、98%、97%、90%、93%、92%和92%,系统进化树分析结果表明,FLOT2基因在不同物种以及进化的过程中具有高度保守性。对FLOT2蛋白质的分析表明,该蛋白呈弱酸性,无信号肽,细胞亚定位于细胞质中,存在SPFH_flotillin和SPFH_hflk等结构域。microRNA预测结果表明,bta-miR-2438、bta-miR-2379和bta-miR-1777a可能是其3′UTR潜在靶标。研究结果为今后阐明FLOT2基因在水牛繁殖性能中的功能,尤其是在配子及胚胎发生过程中的作用及分子机制奠定了基础。

中华绒螯蟹类浮舰蛋白基因Esflol的克隆和组织表达分析

为了解甲壳动物高血糖激素如何调节中华绒螯蟹体内的血糖水平,实验前期进行了转录组和表达谱分析,最终选取Esflol作为研究对象。根据转录组数据提示,结合RACE方法首次从中华绒螯蟹肝胰腺组织中克隆得到Esflol基因并进行了序列及组织表达分析。结果显示Esflol基因开放阅读框(ORF)1 281 bp,编码426个氨基酸,具有典型的SPFH超家族和PHB结构域,不含信号肽序列。多重序列比对分析表明,Esflol氨基酸序列与中华绒螯蟹flotillin-1相似度最高,达到57%。荧光定量PCR结果显示成熟中华绒螯蟹Esflol基因在肝胰腺组织中的表达量最高,其次为肌肉,另外在心脏、鳃、肠道、胸神经节和胃中均有一定量表达,在脑中表达量较低。上述实验结果为下一步继续研究中华绒螯蟹糖代谢的生理机制奠定了基础,也为其他养殖类甲壳动物糖类代谢的研究提供了重要参考。

浮舰蛋白-1与肿瘤

浮舰蛋白(flotillin)是细胞膜上一类高度保守的脂筏标记蛋白,且广泛存在于体内不同的组织和细胞.浮舰蛋白在细胞信号转导、细胞黏附、细胞骨架重构、胞吞等生物过程中发挥重要作用.近年研究发现,浮舰蛋白-1(flotillin-1)与肿瘤的发生、发展及转移关系密切.本文就浮舰蛋白-1在恶性肿瘤中的研究现状做一综述,旨在为进一步研究浮舰蛋白-1与恶性肿瘤发病机制的关系及作为治疗的靶标提供参考.

利用生物信息学方法预测黑腹果蝇Flotillin-1蛋白的结构

生物信息学是对核酸和蛋白序列进行比对及分析,结合生物学知识,通过蛋白结构预测等方法在生物大分子水平上对其结构和功能进行研究,是生物科学发展的核心领域。浮舰蛋白-1(Flotillin-1)是脂筏标记蛋白,与轴突再生、学习记忆和肿瘤形成等过程相关。近年发现,从无脊椎到脊椎动物的很多种类都有Flotillin-1的表达,且在进化上高度保守。果蝇属于完全变态昆虫,是一种重要的模式生物,利用生物信息学方法预测果蝇Flotillin-1蛋白的结构,为深入研究该蛋白的功能提供依据。

脂筏标记蛋白Flotillin-1结构与功能

浮舰蛋白(Flotillin-1)是一种脂筏标记蛋白,它作为一种常见的蛋白,在动植物体内分布广泛,无论在原核生物还是真核生物中序列都十分保守,不仅能标记脂筏,还充当了脚手架的作用,为许多蛋白质的反应提供了平台,在信号转导、神经元轴突再生、细胞增殖以及癌症早期诊断等现象中起到了重要的作用,因此有很高的研究价值。本文总结了近年来Flotillin-1在各领域中的研究现状,为细胞基础研究、神经疾病、糖尿病和癌症等疾病的研究和治疗提供新的思路。

血清Flotillin表达对阿尔茨海默病的早期诊断价值

目的检测阿尔茨海默病(AD)早期患者血清中浮舰蛋白(Flotillin)水平,同时进行精神状态量表(MMSE)评分,并探讨Flotillin mRNA水平对AD的早期诊断价值。方法选取52例AD早期患者为研究对象(AD组),同期选取68例健康体检者作为对照(对照组)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组受试者血清中Flotillin mRNA水平,并进行MMSE评分;分析AD患者血清Flotillin mRNA水平与MMSE总评分相关性;分析血清Flotillin mRNA水平对AD的早期诊断价值;Logistic回归分析影响AD发生的危险因素。结果AD组血清Flotillin mRNA水平高于对照组,MMSE总评分、定向力评分、记忆力评分、计算力评分、回忆评分、语言评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AD患者血清中Flotillin mRNA水平与MMSE总评分呈负相关(r=-0.586,P=0.000);血清Flotillin mRNA诊断AD的曲线下面积(AUC)为0.842,截断值为1.486,特异性为88.2%,敏感度为69.2%;Flotillin mRNA高表达、MMSE低评分是影响AD发生的危险因素。结论血清Flotillin mRNA水平在AD患者中明显升高,且与MMSE总评分呈负相关。血清Flotillin mRNA可能有助于疾病早期诊断,对评价AD的早期危险性有重要意义。

细胞型朊蛋白PrP^C与浮舰蛋白flotillin功能的研究进展

朊蛋白和脂筏是当今研究的热点。细胞型朊蛋白(PrPC)能够通过构象转变生成致病型的朊病毒(PrPSc),导致海绵状脑病的发生,但是目前关于PrPC的转变机制还不清楚。PrPC也是重要的信号转导蛋白,引发众多的信号转导事件。Flotillin属于新被命名为SPFH(stomatin/prohibitin/flotillin/HflK/C)的蛋白家族,是重要的脂筏标识性蛋白,它们不仅被动地担当着非胞膜窖脂筏的脚架,为蛋白质的相互作用和蛋白质复合体的组装以及信号转导提供平台,而且本身还主动地扮演着信号蛋白的角色,在许多的细胞事件中发挥重要作用。PrPC与flotillin能够发生相互作用,flotillin蛋白为PrPC的跨膜信号转导和PrPC转变成PrPSc提供了环境。本文重点综述了近5年来关于PrPC和flotillin蛋白功能的研究进展,尤其是信号转导方面的研究。

浮舰蛋白flotillins在细胞生理和疾病中的作用

浮舰蛋白flotillin-1和flotillin-2参与多个细胞生理活动过程,包括调节细胞黏附、物质内吞、蛋白质分选与再循环和细胞迁移,同时也与一些退行性疾病和肿瘤的发生发展有密切联系。该文介绍了flotillins的结构与定位,综述了flotillins从发现至今影响个体形态发生、神经元生长和功能以及调控多个信号转导途径等几个方面的研究进展,并展望flotillins在疾病机制研究以及临床诊断治疗中的作用。

牛浮舰蛋白-2在真核细胞中的表达与鉴定

采用基因重组法将牛浮舰蛋白-2(Flotillin-2)基因的整个开放阅读框(ORF)克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-His(B),通过脂质体法将重组质粒转入中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,利用Western-blot分析目的基因的表达情况。为确定35ku的小蛋白来源,采用融合PCR法构建突变体,分别利用标签抗体和针对浮舰蛋白-2的抗体鉴定突变体表达蛋白的特性。测序结果表明,成功构建了Flotillin-2基因的全长ORF及其突变体mFlotillin-2的重组质粒。Western-blot结果显示,Flotillin-2基因的全长ORF在CHO细胞中表达时除出现与预期大小相一致的48ku目的蛋白带外,还有1个35ku的条带。基因序列分析发现,在第430~438位核苷酸存在1个似Kozak序列(CGCATGGGC)。将ATG突变成GCT(丙氨酸)后,Western-blot结果显示,突变前后35ku的小蛋白始终存在。本研究以pcDNA3.1(-)/Myc-His(B)为载体,实现了牛Flotillin-2基因的全长ORF的真核表达,证明了35ku小蛋白并不是由于重新起始翻译导致的,而可能是浮舰蛋白-2在翻译过程中的裂解产物。

HDAC6通过介导FLOT2去乙酰化维持其在鼻咽癌中的稳定及促瘤作用

目的:浮舰蛋白(flotillin-2,FLOT2)是典型的致瘤蛋白和潜在的肿瘤治疗靶点,但靶向FLOT2的干预策略仍未确定。翻译后修饰作为表观调控的重要方式,对蛋白质的活性、定位和稳定性等特性具有重要的调控作用,揭示蛋白质翻译后修饰的调控机制和功能是靶向治疗开发的一种有效手段。本研究旨在研究鼻咽癌中FLOT2赖氨酸乙酰化修饰的调控机制及其功能,为靶向FLOT2的肿瘤干预手段提供新思路。方法:利用PhosphoSitePlus数据库分析FLOT2的赖氨酸乙酰化位点,并构建赖氨酸乙酰化位点突变的FLOT2突变体[FLOT2(K211R)];用组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases, HDAC)抑制剂曲古菌素A(trichostatin A, TSA)、 Sirt家族去乙酰化酶抑制剂烟酰胺(nicotinamide,NAM)处理鼻咽癌细胞,TSA处理转染FLOT2突变体质粒的人胚肾细胞(human embryonic kidney,HEK)-293T细胞;利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)检测FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平以及特定赖氨酸(K)位点突变对FLOT2总赖氨酸乙酰化水平的影响。用蛋白质印迹法检测TSA处理未转染/转染FLOT2突变体质粒后的鼻咽癌细胞中FLOT2/FLAG-FLOT2的蛋白质表达,实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)检测TSA处理后鼻咽癌细胞中FLOT2 mRNA的表达。用TSA分别联合MG132或氯喹(chloroquine,CQ)处理鼻咽癌细胞后,检测FLOT2的蛋白质表达。用放线菌酮(cycloheximide,CHX)分别处理已转染FLAG-FLOT2(WT)或FLAG-FLOT2(K211R)质粒的HEK-293T细胞,检测FLAG-FLOT2、FLOT2(K211R)的蛋白质表达水平以反映蛋白质的降解速率。通过BioGrid数据库查询FLOT2与HDAC6之间是否可能存在相互作用,并采用Co-IP验证。用FLAG-FLOT2(WT)/FLAG-FLOT2(K211R)质粒分别联合空白对照(Vector)/HDAC6质粒转染HEK-293T细胞,分为FLAG-FLOT2(WT)+Vector、 FLAG-FLOT2(WT)+HDAC6、 FLAG-FLOT2(K211R)+Vector、 FLAG-FLOT2(K211R)+HDAC6共4组,分析K211R突变对FLOT2总赖氨酸乙酰化水平的影响。在6-0B细胞中,分别过表达FLOT2(WT)和FLOT2(K211R),用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、平板克隆形成和Transwell侵袭检测FLOT2乙酰化位点突变体的生物学功能。结果:PhosphoSitePlus数据库显示FLOT2的K211位点存在乙酰化修饰,Co-IP结果证实FLOT2蛋白存在明显的乙酰化修饰,且TSA可以显著上调FLOT2的总乙酰化修饰水平,而NAM则无此作用;K211位点突变后FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平显著下降,且不受TSA影响。TSA下调鼻咽癌细胞中FLOT2的蛋白质表达水平,而不影响FLOT2 mRNA的表达水平,也不影响转染FLAG-FLOT2(K211R)的鼻咽癌细胞中FLOT2(K211R)的蛋白质表达水平。FLOT2(K211R)的蛋白质降解速率显著慢于FLOT2(WT)的降解速率。蛋白酶体抑制剂MG132可以阻止TSA引起的FLOT2降解,溶酶体抑制剂CQ则无此功能。BioGrid数据库数据显示FLOT2与HDAC6可能存在相互作用,Co-IP结果证实FLOT2与HDAC6抗体可以相互共沉淀对方蛋白。在敲减HDAC6表达的鼻咽癌细胞中,FLOT2的总赖氨酸乙酰化水平显著提高;共转染HDAC6和FLAG-FLOT2(WT)可显著降低总赖氨酸乙酰化水平,而共转染HDAC6和FLAG-FLOT2(K211R)不影响总赖氨酸乙酰化水平。敲减HDAC6可以显著下调FLOT2的蛋白质水平而不影响其mRNA水平;MG132可以阻止敲减HDAC6引起的FLOT2降解。敲减HDAC6,FLOT2的降解速率显著加快。转染FLOT2(K211R)突变体的鼻咽癌细胞增殖速度和侵袭能力显著强于转染FLOT2(WT)的细胞。结论:FLOT2 K211位点存在乙酰化修饰,HDAC6通过介导FLOT2 K211的去乙酰化修饰抑制FLOT2经蛋白酶体途径降解,维持其在鼻咽癌中的稳定和促瘤功能。