海南五指山裸花紫珠通过IL-6/STAT3信号通路对结肠癌体外耐药的逆转作用及其机制研究

目的:探讨海南五指山裸花紫珠对结肠癌体外耐药的逆转作用及其机制。方法:以HCT-8细胞和HCT-8/5-Fu耐药株细胞作为考查对象,分别分为空白对照组、海南五指山裸花紫珠组、5-Fu组和联合组。采用CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光定量PCR法检测细胞耐药基因;Western blot检测IL-6/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果:海南五指山裸花紫珠和5-Fu可显著抑制HCT-8细胞和HCT-8/5-Fu细胞增殖,其作用呈浓度依赖性。海南五指山裸花紫珠25 mg/mL+5-Fu对HCT-8/5-Fu细胞耐药逆转倍数为1.88倍,海南五指山裸花紫珠50 mg/mL+5-Fu对其耐药逆转倍数为3.92倍。各给药组HCT-8细胞和HCT-8/5-Fu细胞凋亡率较空白对照组均显著升高(P<0.05)。与空白对照组比较,各给药组HCT-8细胞Bcl-2、HSP-27 mRNA表达均显著降低(P<0.05),海南五指山裸花紫珠组、联合组HCT-8/5-Fu细胞Bcl-2、HSP-27 mRNA表达均显著降低(P<0.05)。除5-Fu组HCT-8/5-Fu细胞外,各给药组IL-6、STAT3蛋白表达较空白对照组均显著升高(P<0.05)。结论:海南五指山裸花紫珠可通过激活IL-6/STAT3信号通路实现对结肠癌细胞体外耐药的逆转作用。

基于Nrf2/ARE信号通路探讨海南五指山裸花紫珠对鼻咽癌细胞顺铂诱导凋亡敏感性的作用及其机制

目的:探讨海南五指山裸花紫珠(LHZZ)对鼻咽癌(NPC)细胞顺铂(DDP)诱导凋亡敏感性的影响,并探究其作用机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度DDP(0,2,4,8,16,32 mg·L^(-1))和不同浓度海南五指山裸花紫珠(0,25,50,75,100 mg·L^(-1))处理后的细胞存活率。实验分组为空白组(正常HNE1细胞),DDP组(8 mg·L^(-1),24 h),LHZZ组(50 mg·L^(-1),24 h),DDP+LHZZ组(8 mg·L^(-1)DDP+50 mg·L^(-1)LHZZ,24 h),DDP+LHZZ+核因子E2相关因子2(Nrf2)激活剂莱菔硫烷(SFN)组(8 mg·L^(-1)DDP+50 mg·L^(-1)LHZZ,24 h;然后10μmol·L^(-1)SFN,24 h),CCK-8法检测细胞存活率,集落克隆形成实验检测细胞集落形成能力,流式细胞术和原位末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况,荧光探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测培养细胞活性氧(ROS)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞内Nrf2,抗氧化反应元件(ARE)mRNA表达。结果:与空白组比较,经过不同浓度DDP和不同浓度LHZZ处理后,细胞存活率均明显下降(P<0.05);与DDP组和LHZZ组比较,DDP+LHZZ组细胞存活率下降,细胞集落克隆形成数目减少,细胞凋亡水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下调,Bax和Caspase-3蛋白表达水平则上调,差异具有统计学意义(P<0.05);而在DDP+LHZZ组中加入SFN激活Nrf2/ARE信号通路,上述效果均受到抑制(P<0.05)。此外,与空白组比较,LHZZ组细胞内ROS水平下调(P<0.05);与DDP组比较,DDP+LHZZ组ROS水平明显下调(P<0.05);与DDP+LHZZ组比较,DDP+LHZZ+SFN组细胞ROS水平明显上调(P<0.05)。结论:LHZZ可增加DDP诱导的鼻咽癌细胞凋亡的敏感性,其机制可能与阻断Nrf2/ARE信号通路并抑制ROS水平相关。

Wnt/β-catenin信号通路在海南五指山裸花紫珠抗肠癌中的机制研究

目的探讨海南五指山裸花紫珠通过Wnt/β-catenin信号通路的抗肠癌作用及机制。方法采用集落形成实验检测海南五指山裸花紫珠对肠癌细胞增殖的影响;采用HE染色法检测海南五指山裸花紫珠对肠癌细胞集落生长的影响;采用激光共聚焦显微镜检测海南五指山裸花紫珠对肠癌细胞IFITM1跨膜蛋白的影响;采用免疫细胞化学法检测海南五指山裸花紫珠对肠癌细胞抑癌蛋白的影响;采用Western Blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达量。结果海南五指山裸花紫珠浓度的增加可导致SW480和SW620细胞集落数的下调和抑制率的上调,并且呈剂量依赖关系;海南五指山裸花紫珠组(Lhzz组)SW480和SW620细胞相较对照组(con组)集落体积缩小,细胞形态较模糊,集落细胞数明显减少;Lhzz组SW480和SW620细胞相较con组IFITM1跨膜蛋白表达绿色荧光强度减弱,集落生成数减少、体积缩小,胞核固缩且形态不规则;Lhzz组的SW480细胞抑癌蛋白DCC表达水平相较con组显著上调(2.13±0.33比1.05±0.16,t=3.542,P<0.05);Lhzz组的SW620细胞抑癌蛋白DCC表达水平相较con组显著上调(1.89±0.26比0.96±0.12,t=3.466,P<0.05);Lhzz组的SW480细胞Cyclin D1表达水平相较con组显著上调(0.64±0.11比0.38±0.05,t=3.154,P<0.05);Lhzz组的SW620细胞Cyclin D1表达水平相较con组显著上调(0.52±0.09比0.24±0.03,t=3.143,P<0.05);且Lhzz组的SW480和SW620细胞β-catenin表达水平相较con组显著上调(P<0.05)。结论海南五指山裸花紫珠可以通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现对肠癌细胞增殖生长的抑制作用。