阳春砂与绿壳砂、海南砂的ITS-1测序鉴别

目的:从分子水平鉴别阳春砂及其伪充品。方法:从阳春砂及其常见伪充品绿壳砂、海南砂中提DNA,以核基因组通用引物ITS-1为引物进行扩增,扩增产物经纯化后,用PCR产物直接测序法进行测序。结果:样品ITS-1序列长度均为248bp,但绿壳砂有7个碱基与阳春砂不同,海南砂有12个碱基与阳春砂不同。结论:1序列可有效地鉴别阳春砂及其伪充品。

超临界CO_2流体萃取海南砂有效成分的研究

用超临界CO_2流体萃取技术对海南砂有效成分进行萃取,用GC-MS-计算机联用技术对其进行分析。结果表明,海南砂化学成分与阳春砂基本一致,这为临床合理用药提供了依据。

海南砂种苗繁育技术规程

从种子繁殖、分株繁殖和组培繁殖的育苗技术,以及种苗病虫害防治、种苗出圃和包装运输等方面,明确规定了海南砂的种子苗、分株苗和组培苗生产技术规程,为海南砂种苗标准化生产提供依据。

海南砂生殖生物学特性研究

为了提高海南砂的产量,研究了其小花数目、花粉活力、柱头可授性、落果率等生殖生物学特性以及海南砂花粉在不同贮藏条件下的活力。结果表明,海南砂每个花序有7.28(±0.83)朵小花;小花的花期为1.5 d;离体萌发法测定花粉活力在花朵刚刚开放时达83.6%,开花12 h后降为21.0%,24 h后降为11.4%;柱头和花粉在花朵开放6 h内都具极强可授性,寿命维持24 h,比花粉寿命长12 h以上;人工授粉率和自然授粉率分别为64.10(±29.80)%和17.55(±15.49)%、落果率为20.65(±31.39)%和11.11(±32.34)%。高湿度条件下贮藏花粉12 h后活力降为0.6%,而在低温高湿条件下贮藏花粉12 h的活力为23.4%,表明低温更有利于海南砂花粉贮藏。

海南砂种子贮藏条件的研究

为了探索海南砂种子的最佳贮藏条件,分别研究了沙磨、赤霉素(GA3)处理、贮藏条件、贮藏时间对海南砂种子萌发率的影响。以当年采收的海南砂种子为试验材料,对其进行沙磨、GA3处理,并将种子分别在不同条件下贮藏,进行种子萌发试验,统计萌发率。研究结果表明:沙磨处理并不能显著提高海南砂种子的萌发率,但可促进GA3进入种子内部并发挥作用;GA3对海南砂种子萌发具有浓度效应,且80μmol/L GA3处理8 h效果较好,浓度过高则表现出抑制作用;阴室贮藏是海南砂种子的最佳贮藏方式,有利于种子后熟,最高萌发率可高至(97.78±3.84)%,最佳贮藏时间为8个月。该试验获得了海南砂种子的最佳贮藏条件,为推广海南砂播种育苗技术奠定了坚实的基础。

阳春砂、绿壳砂与海南砂高效液相色谱指纹图谱比较研究

目的探索建立阳春砂、绿壳砂和海南砂的高效液相色谱指纹图谱,并比较三者的差异。方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-Aq C18分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.05%甲酸溶液(B),二元梯度洗脱(0 min,5%A;5 min,5%A→15%A;10 min,15%A→26%A;20 min,26%A→40%A;45min,40%A→70%A;58min,70%A→100%A,63 min,100%A),检测波长为263 nm,柱温30℃,流速1.0 m L·min-1。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.0版本)和SPSS21.0对谱图进行相似度分析和聚类分析。结果从对照指纹图谱和聚类分析结果看,阳春砂与海南砂共有模式相似,两者与绿壳砂差别明显,分别建立对照指纹图谱,各有29和25个共有峰。结论首次建立了3种砂仁非挥发性成分HPLC指纹图谱,为不同品种砂仁的鉴别和质量控制提供参考。

阳春砂与海南砂BPPS启动子比较及GCN4-motif正调控作用的鉴定

目的龙脑基二磷酸合酶(bornyl diphosphate synthase,BPPS)是砂仁药效萜类合成途径中的关键酶,获得海南砂AlBPPS的启动子并与阳春砂AvBPPS启动子进行调控元件和瞬时表达的比较,以期解析AvBPPS在种子中高表达的分子机制。方法通过FPNI-PCR的方法从海南砂gDNA中克隆AlBPPS的启动子,并与阳春砂AvBPPS启动子进行序列比较,对启动子相似区域进行截短,获得其相应的截短片段;对AvBPPS启动子截短片段中的GCN4-motif进行突变;构建由上述启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(β-glucuro-nidase gene,GUS)的重组表达载体,利用农杆菌介导法注射侵染本氏烟草叶片进行瞬时表达,验证启动子的活性和GCN4-motif的功能。结果克隆获得365 bp的AlBPPS启动子序列,3’端约300 bp的序列与AvBPPS启动子的相应序列相似度高达93%,但AlBPPS启动子不含有AvBPPS启动子的GCN4-motif。构建成功与GUS报告基因融合的系列启动子重组载体——VBP∷GUS(AvBPPS启动子全长)、VBPT∷GUS(AvBPPS启动子截短至320 bp)、VBPT-GM∷GUS(截短AvBPPS启动子且突变GCN4-motif)和LBP∷GUS(AlBPPS启动子全长)、LBPT∷GUS(AlBPPS启动子截短至305 bp)。通过GUS染色发现虽然上述启动子均具有驱动GUS基因转录的活性,然而,含有GCN4-motif的启动子,包括全长或截短的AvBPPS启动子(VBP∷GUS和VBPT∷GUS)的活性均高于GCN4-motif突变(VBPT-GM∷GUS)或无GCN4-motif的启动子(LBP∷GUS和LBPT∷GUS)。结论GCN4-motif对基因转录具有正调控作用,为进一步探究AvBPPS启动子的调控机制奠定了基础。

砂仁的真伪性状鉴别

砂仁的植物来源：本品为姜科植物阳春砂（别名：缩砂密,Amomum villosum Lour,绿壳砂Amomum villo-sumLour.var.xanthioides T.L.Wu et Senjen,或海南砂Amomum longiligulare T.L Wu）的干燥成熟果实。

砂仁煎煮的技巧小议

砂仁为姜科多年生草本植物砂仁Amomumvillosum Lour.或海南砂A.Iongiligulare T.1.Wu的成熟果实。具化湿开胃、温脾止泻,理气安胎等功效,为临床医生所喜用。我们在实践过程中发现按常规方法（即后下法）煎煮砂仁,将煎煮后的砂仁掰开仍能发现果实内部干爽如故，果仁部分几乎没有水分进人，这说明砂仁的有效成分根本无法溶出到煎煮液中。

和胃消食用砂仁

砂仁,又称缩砂蜜。为姜科植物阳春砂、绿壳砂或海南砂的成熟果实。始载于唐甄权所著《药性本草》。今药用砂仁有国产和进口两类,均为姜科砂仁,属植物的果实。阳春砂主产于广东、广西;绿壳砂产于云南西双版纳、景洪等地。海南砂主产于海南、广西等地。

正、伪品砂仁的鉴别

砂仁是果实类中药，因其具有化湿开胃、温脾止泻、理气安胎的功效，在临床上较为常用。近年来，多种伪品在市场上时有出现。正品砂仁分为三种，分别是阳春砂、绿壳砂、海南砂，其中以广东产的阳春砂质量最优。

阳春砂龙脑基二磷酸合酶关键氨基酸位点筛选及突变体的构建

目的对阳春砂萜类合成关键酶龙脑基二磷酸合酶(bornyl diphosphate synthase,BPPS)催化生成龙脑基二磷酸(bornyl diphosphate,BPP)的关键氨基酸位点解析,为阳春砂BPPS的功能优化并且促进其在代谢工程中的应用奠定基础。方法比较阳春砂、海南砂的BPPS (AvBPPS、A1BPPS)及已报道的其余3种植物的BPPS,发现AvBPPS催化产生BPP的比率较高。通过分子建模和底物对接、保守基序预测,以及与其他BPPS、单萜合酶序列多重比对的方法,筛选关键氨基酸位点,探索决定AvBPPS产生BPP及其较高比率BPP的关键活性位点,据此设计突变体,并用快速定点突变的方法获得突变体。结果筛选出了20个可能影响AvBPPS催化的关键位点,并根据这些位点,设计了20个AvBPPS突变体及1个A1BPPS突变体,成功构建其中17个突变体,诱导表达获得了纯化蛋白。结论综合使用多种分析方法,理性设计BPPS的突变位点,并获得了相应突变体及蛋白,为通过氨基酸定点突变探索BPPS的催化机制及功能优化提供了基础。

砂仁品种的鉴别研究

目的 对3种《中国药典》收载的砂仁(阳春砂、绿壳砂、海南砂)进行对比鉴别,为不同来源砂仁的准确鉴别提供依据。方法 前往栽培基地采集样品并对比3种砂仁原植物形态特征;采用性状鉴别法对比3种砂仁外观性状特征;利用显微鉴别法对比3种砂仁种子横切面显微特征;采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术结合SIMCA-P软件寻找3种砂仁挥发油中的差异性成分。结果 原植物形态可通过穗状花序总花梗、膜质胞片长度,鲜果颜色,毛刺形状进行鉴别;性状可通过果壳颜色、厚度,毛刺形状,气味进行鉴别;显微方面可通过种皮表皮细胞壁外壁厚度,油细胞长度,色素层列数进行鉴别;3种砂仁挥发油中共鉴定出18种成分,阳春砂与绿壳砂对比,有5种差异成分,其中ɑ-蒎烯、莰烯是阳春砂特有成分,4-methyl-2,3,4,5,6,7-hexahydro-1H-indene、3-蒈烯、α-Copaene是绿壳砂特有成分;阳春砂和海南砂对比,只有石竹素为海南砂特有成分;绿壳砂与海南砂对比,有2个差异成分,其中α-Copaene是绿壳砂特有成分,石竹素是海南砂特有成分。结论 3种不同来源的砂仁在原植物形态、外观性状、种子横切面显微特征存在差异,挥发油中,绿壳砂、海南砂与阳春砂对比均有差异性成分。

国产砂仁高价还能走多远

砂仁分为国产和进口，国产砂仁分为阳春砂、绿壳砂，海南砂；阳春砂主产于广东阳春、高州，信宜；绿壳砂主产于云南西双版纳、临沧、思茅、红河，文山；海南砂，家野皆有，主产海南澄迈、崖县，广西博白，陆川。进口砂仁主要来自越南、缅甸，老挝；众多砂仁中以国产阳春砂粒大、饱满，色黄为佳品，价格最高。

糖尿病性胃肠病的妙药——砂仁

砂仁又名阳春砂，是姜科植物阳春砂、海南砂或缩砂的干燥成熟果实。这里面还有个民间故事。传说很久以前，广东的阳春县发生了一次大范围的牛瘟，全县境内方圆数百里的耕牛相继病死。然而蟠龙金花坑附近村庄一带的耕牛却没有发病．而且个个体格强壮。当地人仔细观察，发现牛很喜欢吃这儿生长的一种叶子散发出浓郁芳香、根部发达、结果实的草。

草果叶绿体基因组特征及系统发育分析

目的明确草果Amomumtsao-ko叶绿体基因组结构特征及其在姜科的进化地位。方法利用IlluminaHiseq4000测序平台对草果叶绿体基因组进行测序,通过生物信息学分析方法进行序列组装、注释和特征分析,并以绿苞闭鞘姜为外类群,通过MEGA6软件构建ML系统发育树,分析姜科物种间系统发育关系。结果草果叶绿体基因组全长163 648 bp,鸟嘌呤和胞嘧啶含量(guanine-cytosine content,GC)为36.0%,包括一对29 776 bp的反向重复区(IRs)、一个大单拷贝区(LSC,88 741 bp)和一个小单拷贝区(SSC,15 355 bp);共注释得到113个基因,包括4个rRNA基因、30个t RNA基因和79个蛋白编码基因;在草果叶绿体基因组中共检测到123个SSR位点,大部分SSR均由A和T组成;豆蔻属物种叶绿体基因组大小和结构相似,IR边界高度保守;聚类分析显示草果与豆蔻属的海南砂A.longiligulare、阳春砂A.villosum、绿壳砂A.villosum var. xanthioides、爪哇白豆蔻A. compactum和白豆蔻A. kravanh亲缘关系最近;适应性进化分析发现rpl20、rps11、ccsA、clpP、ycf1和ycf2 6个基因在进化过程中被正向选择。结论获得了完整的草果叶绿体基因组序列,明确了姜科物种间的亲缘关系,为研究豆蔻属植物的系统进化及物种鉴定提供科学依据。