海参硫酸软骨素对大鼠酒精性胃溃疡的保护作用

目的:探讨海参硫酸软骨素对大鼠酒精性胃溃疡的保护作用。方法:将32只大鼠随机分为4组:模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。采用酒精诱导胃溃疡模型,检测胃溃疡出血情况、溃疡指数、胃溃疡发生率及胃溃疡病灶部位组织学观察。结果:与模型组相比,低、中、高剂量对胃出血面积、溃疡指数均具有不同程度的降低作用。结论:海参硫酸软骨素能够明显降低大鼠胃的出血情况和溃疡面积,对胃溃疡有良好的防治作用。

海参硫酸软骨素抑制小鼠黑色素瘤肺转移作用的研究

目的海参硫酸软骨素(sea cucumber chondroitin sul-fate,SC-CHS)由美国肉参中分离所得,研究其结构及对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞实验性肺转移模型的抑制作用。方法采用MTT法检测了SC-CHS对B16-F10细胞生长的影响;细胞黏附实验研究了SC-CHS对B16-F10细胞黏附能力的影响;体内实验,预先腹腔给药5 d后,建立实验性肺转移模型,继续腹腔注射SC-CHS 20d后,检测小鼠肺转移灶形成,血清中唾液酸的含量、γ-谷氨酰转肽酶活力和肺组织中羟脯氨酸、氨基己糖、糖醛酸的含量。结果实验结果显示SC-CHS体外对B16-F10细胞的生长没有影响,但可以明显降低B16-F10细胞同基质和血管内皮细胞的黏附能力(P<0.05)。SC-CHS剂量组小鼠的肺转移灶数量明显减少(P<0.01),平均转移抑制率为62.66%,血清唾液酸含量和γ-谷氨酰转肽酶活力明显降低(P<0.01),肺组织中羟脯氨酸、氨基己糖、糖醛酸的含量明显下降(P<0.01)。结论 SC-CHS能抑制肿瘤细胞在小鼠体内的转移和生长,其机制可能与降低肿瘤细胞与基质的黏附能力和细胞的转移能力有关。

高温1HNMR鉴别8种海参硫酸软骨素

提取了8种海参中的粗多糖,经DEAE-52阴离子交换柱分离纯化得到其中的海参硫酸软骨素(SC-CHS),除日本刺参CHS外其余均为首次获得的海参多糖。对获得的SC-CHS进行分子量、单糖组成及硫酸基含量等基本性质分析后,利用高温1HNMR对SC-CHS结构进行初步鉴别。结果表明,高温条件下SC-CHS的1HNMR图谱具有较好的分辨度。对其支链硫酸化岩藻糖的异头氢进行归属和比较,并以此为指标鉴别不同种类海参硫酸软骨素的结构差异,建立了一种以海参硫酸软骨素结构特征为指标的海参指纹图谱;初步探讨了不同海域生长的海参中硫酸软骨素支链岩藻糖硫酸基的特点,比较发现:寒带海域海参的硫酸软骨素岩藻糖上硫酸基取代以2,4-di OSO3、3,4-di OSO3双取代为主,含部分4-OSO3单取代;温带海域海参以2,4-di OSO3双取代为主,含部分4-OSO3单硫酸基取代;热带亚热带海域海参以2,4-di OSO3双取代和4-OSO单取代为主。这将为海参构效关系的进一步分析鉴定提供理论依据。

次甲基蓝显色法定量海参硫酸软骨素

提取仿刺参、海地呱、梅花参、美国肉参及北大西洋瓜参5种海参中的海参硫酸软骨素作为标准品，以次甲基蓝与阴离子聚合物形成显色的超分子复合物为理论基础，建立一种海参硫酸软骨素的定量方法。将1．00mL质量浓度适当的海参硫酸软骨素溶液与8．00mL5mmol／L磷酸氢二钾-磷酸二氢钾缓冲液（pH7．0）及1．00mL次甲基蓝溶液r0．18rag／mL）混合，其后立即测定545nm波长处的吸光度，吸光度代入对应标准曲线即可计算得出样品质量浓度。该方法操作简便，检出限为1．6～1．8μg／mL，定量限为5．2～6．2μg／mL，精密度、回收率高，可实现对海参硫酸软骨素的快速定量测定。

海参硫酸软骨素的荧光标记方法

海参硫酸软骨素是海参体壁的重要组成物质之一,已被证实具有多种生理调节功能,在功能食品开发方面展现出良好的应用前景。与其他碳水化合物类似,海参硫酸软骨素缺乏特异的发色及发光基团。基于此背景,本研究旨在对海参硫酸软骨素进行荧光标记。以6-氨基荧光素为荧光染料并配合溴化氢活化法成功对该多糖进行了荧光衍生,每分子标记产物中约含4.4分子荧光染料,其最佳荧光激发波长为495 nm、发射波长为520 nm。分子质量测定、硫酸根质量分数测定及傅里叶变换红外光谱比较分析的结果表明,标记前后多糖的结构特征未发生明显变化,标记产物在中性及碱性环境中展现出较强的荧光强度及稳定性,溶液环境中的NaCl对标记产物的影响有限。海参硫酸软骨素荧光标记方法的建立为后续研究该多糖的吸收代谢过程、功能机理、生物分子间相互作用等科学问题提供了有利条件。

海参硫酸软骨素抑制小鼠Lewis肺癌生长和转移作用的研究

目的探讨海参硫酸软骨素(sea cucumber chondroitin sulfate,SC-CHS)对小鼠肿瘤生长和转移的抑制作用及其机制。方法建立C57 BL/6J小鼠Lewis肺癌自发性肺转移模型,连续腹腔注射给药21 d,剥离原位肿瘤和双侧肺,分别称瘤重和计数肺表面转移灶结节数;分离血清,ELISA法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)和γ-干扰素(γ-interferon,γ-IFN)的含量;采用RT-PCR法检测肿瘤组织中缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)mRNA的表达。结果 SC-CHS可以显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,其平均抑制率为31.5%,并可以显著减少肺表面转移灶结节数(P<0.01),平均抑制率为42.3%;SC-CHS可以显著提高血清中TNF-α和γ-IFN的含量(P<0.05),降低荷瘤小鼠肿瘤组织中HIF-1α、VEGF、Hpa mRNA的表达(P<0.05)。结论 SC-CHS能显著抑制肿瘤细胞在小鼠体内的生长和转移,其机制可能与抑制肿瘤血管新生,提高机体免疫力有关。

海地瓜岩藻糖基化海参硫酸软骨素对Ⅱ型糖尿病小鼠胰岛素抵抗改善作用的研究

目的研究海地瓜岩藻糖基化海参硫酸软骨素(fucosylated chondroitin sulfate from the sea cucumber Acaudina molpadioides,Am-CHS)对Ⅱ型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的改善作用。方法以高脂高糖饲料饲喂法建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型。雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、实验A、B、C组。正常对照组饲喂标准饲料,其它组饲喂高脂饲料。阳性对照组、实验A、B、C组分别在饲料中添加罗格列酮(rosiglitazone,RSG,1mg·kg-1·d-1)、高剂量Am-CHS(80mg·kg-1·d-1)、低剂量Am-CHS+RSG(20+1mg·kg-1·d-1)、高剂量Am-CHS+RSG(80+1mg·kg-1·d-1)。各组小鼠自由摄食摄水19周。实验结束后,称重小鼠白色脂肪重量,检测空腹血糖、空腹血清胰岛素及血清脂联素、抵抗素、瘦素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果 Am-CHS可显著降低Ⅱ型糖尿病小鼠的脂肪积累,降低血糖和胰岛素水平,改善胰岛素抵抗,提高血清脂联素含量,降低抵抗素、瘦素和TNF-α含量。Am-CHS与RSG复配使用,效果更显著。结论 Am-CHS能显著改善Ⅱ型糖尿病小鼠的胰岛素抵抗程度,其作用机制可能与改善肥胖引起的脂肪细胞因子的分泌紊乱有关。

海参多糖硫酸根含量的离子色谱法测定及其差异分析

经过三氟乙酸水解后,利用Dionex ICS-2000离子色谱仪对不同海参粗多糖、海参硫酸软骨素(SC-CHS)和海参岩藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)中的硫酸根(SO42-)进行了分离和测定。平均加标回收率为100.90%,相对标准偏差为2.12%,检测限达到3.9×10-2μg/mL。较之传统的多糖硫酸根的测定方法,本方法重复性好,测定更为简便、准确,可应用于其它硫酸多糖硫酸根的定量测定。测定结果显示,所有种类海参SC-CHS的硫酸根含量高于SC-FUC,不同种类海参的多糖硫酸根含量存在特征性差异。

北极海参多糖的分离纯化及抗肿瘤活性研究

采用人肺癌细胞A549、人胃癌细胞SGC-7901、人乳腺癌细胞MCF-7及人胰腺癌细胞PANC-1共4种癌细胞株,通过MTT法研究北极海参多糖组分的体外抗肿瘤活性;利用胃蛋白酶、胰蛋白酶连续水解制备海参粗多糖,用sephadex G-50及DEAE-52分离纯化,得到Ⅱ-ⅠC、Ⅱ-ⅠD和Ⅱ-ⅠE 3种精制多糖;对3种精制多糖的组成及性质进行分析。结果表明：3种精制多糖对4种肿瘤细胞的抑制作用明显强于粗多糖,且与多糖质量浓度正相关;3种精制多糖对MCF-7的抑制作用最强,对A549的抑制作用相对较弱;实验浓度（0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mg/m L）下,Ⅱ-ⅠD和Ⅱ-ⅠE对A549的抑制作用显著强于Ⅱ-ⅠC;Ⅱ-ⅠD对MCF-7、SGC及PANC-1的抑制作用强于Ⅱ-ⅠE和Ⅱ-ⅠC;3种精制多糖的质量分数均大于93%,为不含肽链及核酸的β-吡喃构型,硫酸根的质量分数为31.52%-32.67%。单糖组成分析显示,3种多糖均属于海参硫酸软骨素。