海参脑苷脂对前脂肪细胞分化的抑制作用及机制

目的:探究海参脑苷脂在3T3-L1小鼠脂肪细胞增殖以及分化过程中发挥的作用,并研究其具体机理。方法:运用噻唑蓝法探究海参脑苷脂在3T3-L1细胞正常生长过程中发挥的作用;并通过乳酸脱氢酶实验探究海参脑苷脂对前脂肪细胞是否存在毒性作用;诱导3T3-L1细胞为成熟细胞,采用油红O染色法以及测定成熟脂肪细胞中甘油三酯的含量来探究海参脑苷脂是否会改变脂肪细胞的脂质积累情况;反转录荧光实时定量聚合酶链式反应(reverse transcription real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)测定过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα)以及Wnt/β-catenin通路相关基因的表达水平。通过Western blotting法测定β-catenin蛋白向核内转移的情况。结果:海参脑苷脂能极显著抑制3T3-L1细胞的增殖以及分化(P<0.01),且对细胞无毒性作用。qRT-PCR结果显示,海参脑苷脂可极显著抑制脂肪细胞PPARγ和C/EBPα以及Wnt/β-catenin通路相关基因的表达(P<0.01)。Western blotting结果表明,海参脑苷脂可以极显著提高脂肪细胞核内β-catenin蛋白的表达水平(P<0.01)。结论:海参脑苷脂可以明显地抑制3T3-L1细胞的增殖以及分化,产生这种效果的机理和转录因子PPARγ、C/EBPα以及Wnt/β-catenin通路相关。

海参脑苷脂及神经酰胺对小鼠高尿酸血症的改善作用

目的研究海参由来的脑苷脂及神经酰胺对酵母浸粉诱导高尿酸血症的改善作用及其机制。方法通过喂食雄性昆明小鼠20%的酵母浸粉建立高尿酸血症模型,比较了摄食整参及其所含有的脑苷脂(0.02%,0.04%)对血尿酸的影响。在此基础上,利用相同的实验动物模型,比较了海参由来的脑苷脂及神经酰胺对血尿酸的影响,并分别测定小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶(XOD)和腺苷脱氨酶(ADA)活力及其mRNA表达量,对脑苷脂及神经酰胺的降血尿酸作用机制进行了初步探讨。结果摄食海参及其活性成分脑苷脂均可显著抑制酵母浸粉诱发的血清尿酸水平升高,且0.02%的低剂量与0.04%的高剂量效果相同。海参由来的神经酰胺对血清尿酸水平也有显著的降低作用。同时,脑苷脂及神经酰胺均可显著抑制小鼠肝脏XOD及ADA酶活力和mRNA表达量,XOD酶活力分别降低了44.9%及34.8%,ADA酶活力分别降低了25.5%及20.7%;XOD mRNA表达量分别降低了44.6%及31.5%,ADA mRNA表达量分别降低了44.1%及38.7%。结论海参脑苷脂及其主要结构单元神经酰胺对酵母浸粉诱导的高尿酸血症有明显改善作用,其机制与降低了肝脏XOD mRNA和ADA mRNA表达量从而抑制相关尿酸生成酶活力有关。

海参脑苷脂对H_2O_2致PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的研究海参脑苷脂(SCC)对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法建立H2O2致PC12细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率;测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,评价细胞的损伤程度;利用荧光探针DCFH-DA对细胞内活性氧(ROS)进行荧光染色,检测荧光强度;化学比色法测定细胞内总抗氧化能力(T-AOC),黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果海参脑苷脂能明显改善H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤,与模型组相比,SCC处理组可使细胞存活率升高,细胞培养液中LDH的漏出量明显减少(P<0.01),细胞内ROS的积累量明显降低(P<0.01),同时细胞内T-AOC和SOD活性明显增加(P<0.01)。结论 SCC对H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤具有一定的保护作用。