海带岩藻聚糖硫酸酯低聚糖对小鼠肝损伤的保护作用

目的 : 研究海带岩藻聚糖硫酸酯低聚糖 (LMFO)的抗氧化活性及对肝损伤的保护作用。方法 : 给药组小鼠分别灌胃 (ig)给 LMFO5 0、1 0 0、1 5 0 mg/ (kg·d) ,连续 1 0 d作预处理 ,以甘利欣 (90 mg/ kg)做阳性对照。然后分别以 0 .2 %CCl4 1 0 ml/ kg和 D-氨基半乳糖 (D- Gal N,6 0 0 mg/ kg) +脂多糖 (LPS,1 μg/ kg)造成肝损伤 ,观察小鼠血清谷草酶 (GPT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)的活性及丙二醛 (MDA)的含量。结果 : 在 CCl4 和 D-Gal N+LPS两种肝损伤模型中 ,LMFO均可以非常显著地抑制肝损伤小鼠的血清 GPT的活性和MDA值的升高 ,并能提高其血清 SOD和 GSH- Px的活性。在 CCl4 和 D- Gal N+LPS肝损伤模型中 ,分别以中浓度和高浓度的 LMFO的抗氧化和肝脏保护作用最好。说明 LMFO可以保护机体和肝细胞内的内源抗氧化系统 ,抑制 CCl4 产生的自由基造成的脂质过氧化 ,抑制过多的自由基和脂质过氧化物对肝细胞的破坏作用 ,从而达到保护肝脏的作用。结论 : LMFO具有很好的肝脏保护作用 ,其作用可能与其很好的抗氧化作用有关。

低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯的清除活性氧自由基和体内抗氧化作用

用化学发光分析法研究了 3种低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯 (LMWF M、LMWF -Ⅰ、LMWF -Ⅳ )体外清除超氧阴离子自由基 (O2-· )及羟基自由基 (·OH)的作用 ,并观察了LMWF M对高脂血症大鼠的抗氧化作用。结果表明低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯组分均有清除活性氧自由基的能力 ,随体系中LMWF浓度的增加 ,其清除活性氧自由基的能力增强。LMWF -Ⅰ清除自由基的能力最强 ,它对O2-·的IC50 为 0 .0 44mg·mL-1,对·OH的IC50 为 0 .0 6 2mg·mL-1。LMWF M能显著降低高脂血症大鼠血清和组织中LPO含量 (P <0 .0 1) ,增强SOD活力 (P <0 .0 1)。

低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯的制备及流感病毒神经氨酸酶抑制活性研究

以海带岩藻聚糖硫酸酯粗多糖为原料,采用Cu2+-H2O2自由基氧化体系结合超滤技术制备低分子量岩藻聚糖硫酸酯。通过比较粗糖质量和H2O2浓度对产物的分子量和化学组成的影响,确定制备高硫酸根高岩藻糖的低分子量岩藻聚糖硫酸酯的最佳条件是:4.5%H2O2与0.026 7mol/L Cu2+降解4.5g岩藻聚糖硫酸酯,得到Fa3(Mw 7.68kDa)和Fb3(Mw 3.89kDa)2个组分,其硫酸根含量较高,为30.32%和32.48%。Fa3组分主要由岩藻糖(64.25%)和半乳糖(30.74%)组成,而Fb3的硫酸根和半乳糖含量高于Fa3,但岩藻糖含量下降。比较发现,H2O2浓度由4.5%上升为9%时,制备的低分子量岩藻聚糖硫酸酯的分子量、岩藻糖含量和硫酸根含量都下降。研究发现Fa3和Fb3对流感病毒神经氨酸酶具有较强的抑制作用,尤其是Fa3组分活性较高。说明分子量对岩藻聚糖硫酸酯的神经氨酸酶抑制活性影响要大于硫酸根含量,而且Fa3组分对流感病毒神经氨酸酶的抑制活性也可能与其单糖组成较均一有关。

海带岩藻聚糖硫酸酯测定方法的研究

应用次甲基蓝分光光度法测定溶液中岩藻聚糖硫酸酯的含量 ,有色化合物的最大吸收波长为 5 6 0 nm ,在 4～ 2 0μg/ m L内线性良好 (r=0 .999) ,回收率为 (96 .2 7± 1.6 6 ) %。在测定过程中 ,无机盐影响较大 ,蛋白质影响很小 ,而 p H值、其它糖没有影响 ,PBS(磷酸盐缓冲液 )能完全消除褐藻胶对测定的影响。实验证明 ,该方法准确、快速、灵敏度高。

岩藻聚糖硫酸酯低聚糖降压作用的初步研究

采用两肾一夹型建立肾血管性高血压大鼠模型。探讨岩藻聚糖硫酸酯低聚糖对肾血管性高血压大鼠的血压、呼吸及血浆中血管紧张素 (Ang )含量的影响。用 GY- 6 0 88型多道生理参数分析记录仪和张力传感器测定、记录血压和呼吸 ;用均相竞争法测定 Ang 的含量。实验表明 ,1 2 .5 ,2 5 ,5 0 mg/ kg的岩藻聚糖硫酸酯低聚糖均能显著地降低肾血管性高血压大鼠的动脉血压。其中 ,高剂量 (5 0 mg/kg)的降压效果与 1 4 mg/kg的卡托普利相当 ;给药大鼠的呼吸频率随血压的变化呈正相关变化 ;1 2 .5 ,2 5 ,5 0 mg/ kg剂量的岩藻聚糖硫酸酯低聚糖均能降低高血压大鼠血浆中 Ang 的含量。其中 ,高剂量 (2 5 ,5 0 mg/ kg)组的 Ang 水平同卡托普利组 (1 4 mg/ kg)相当。岩藻聚糖硫酸酯低聚糖对肾血管性高血压大鼠有显著的降压作用 ,抑制 Ang 生成可能是其降压机制之一。

海带岩藻聚糖硫酸酯对四氯化碳致肝损伤小鼠的保护作用

对小鼠分别灌胃200、400、800 mg/(kg.d)的海带岩藻聚糖硫酸酯(简称FLJ,利用酶解法制备),于第7天腹腔注射四氯化碳制备小鼠急性肝损伤模型,以200 mg/(kg.d)的联苯双酯做阳性对照。测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及肝组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,并观察肝组织形态学变化,研究FLJ对CCl4诱导急性肝损伤小鼠的保护作用。结果表明:FLJ各剂量均能抑制肝损伤小鼠血清ALT、AST活性的升高,且中、高剂量组达到显著水平,并能显著提高肝组织中SOD活力、降低MDA含量,减轻由对肝细胞的病理损伤。FLJ对CCl4造成的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。

海带岩藻聚糖硫酸酯酶解工艺及分离和纯化研究

岩藻聚糖硫酸酯是一种具有多种生物活性的多糖,对用纤维素酶、果胶酶酶解制备海带岩藻聚糖硫酸酯的工艺进行了研究,正交试验结果表明:纤维素酶、果胶酶优化的酶解工艺参数为:纤维素酶0.221%、果胶酶0.074%,温度50℃,pH值4.5,时间50min。经DEAE-52纤维素离子交换柱层析分离得到3个岩藻聚糖硫酸酯组分,3个组分经Sephadex G-200凝胶柱层析进一步纯化得5个分子量很大(大于2MDa)的组分,可能为岩藻聚糖硫酸酯的凝聚体,另5个组分的分子量为57.8KDa、115KDa、125KDa、154KDa、206KDa。

岩藻聚糖硫酸酯低聚糖的制备及其抗氧化活性研究

探讨H2O2降解岩藻聚糖硫酸酯的条件及其产物的抗氧化活性。采用Cu2+-H2O2体系降解原料Fucoidan,结果发现反应时间越长得到的高分子量的组分越少,而低分子量的低聚糖产量增加;H2O2浓度增高,水解所得主要组分的分子量明显减小;温度升高,水解速度明显加快;产物的硫酸根含量随反应温度和H2O2浓度的降低而增加。用Pyrogallol—Luminol系统对水解产物的抗氧化活性进行了研究,发现硫酸根含量低的Fucoidan水解产物除O2.-的活性较好,其中15%H2O2降解得<5KD的低聚糖清除O2.-的活性明显高于肌肽(IC50为0.65mg/mL),IC50为0.17mg/mL。

泡叶藻及海带藻渣中岩藻聚糖硫酸酯的提取及其抗氧化活性

采用超声波辅助提取方法提取泡叶藻(Ascophyllum mackaii)及海带(Laminaria japonica)藻渣中岩藻聚糖硫酸酯,以均匀试验设计建立回归模型优化高效制备提取工艺。采用高效凝胶过滤色谱法(HPGPC)进行了相对分子质量检测及理化性质分析;利用Fenton反应检测法、邻苯三酚自氧化法等进行了抗氧化活性研究。结果表明,优化的高效制备技术的超声波最佳条件为超声70 min,温度为90℃,水提时间2 h,料液比1︰80,泡叶藻及海带藻渣中岩藻聚糖硫酸酯的高效提取率分别为4.49%和3.69%,分子质量分别为142 kDa和136 kDa,泡叶藻和海带藻渣中的岩藻聚糖硫酸酯均具有较好的清除超氧阴离子自由基、羟自由基能力及还原能力。海带的抗氧化活性总体略高于泡叶藻。

海带岩藻聚糖硫酸酯对小鼠的免疫调节作用

目的:采用免疫学评价方法,研究海带岩藻聚糖硫酸酯对小鼠免疫功能的调节作用。方法:以海带粗多糖为原料,采用酸提取、离子交换和自由基氧化降解法制备得到不同的岩藻聚糖硫酸酯组分。KM小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组和海带岩藻聚糖硫酸酯组分F-2、Fa和Fb的低、中、高剂量组。除正常组外,其余皮下注射氢化可的松造成免疫低下模型后灌胃。海带岩藻聚糖硫酸酯F-2、Fa和Fb组小鼠分别灌胃F-2、Fa和Fb不同剂量多糖溶液(分别为25、50、100mg/(kg.d)),阳性对照组灌胃盐酸左旋咪唑(20mg/(kg.d)),进行免疫指标的测定。结果:F-2、Fa和Fb组均能显著提高免疫低下小鼠的脾脏质量/体质量比值,提高血清溶血素含量和提高腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力,且F-2和Fa组能增强迟发型变态反应能力,但Fb组对迟发型变态反应能力无显著性影响。结论:海带岩藻聚糖硫酸酯对免疫低下小鼠具有较好的免疫调节作用,且中、低分子质量的岩藻聚糖硫酸酯对免疫低下小鼠的免疫调节作用没有显著性差异。

自由基氧化法制备海带岩藻聚糖硫酸酯的抗凝血活性

以海带(Laminaria japonica)为原料,采用阴离子交换和自由基氧化降解反应制备了不同分子量和硫酸根含量的岩藻聚糖硫酸酯,然后以血浆复钙时间(RT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)为指标,研究海带岩藻聚糖硫酸酯抗凝血活性的构效关系。结果表明,采用离子交换,可从海带糖提取物中分离出低硫大分子组分F-A和高硫大分子组分F-B。粗糖经自由基氧化降解,可得到分子量为1.5 kD和8.0 kD左右的低分子组分,实验重复性好,产物分子量集中,其中分子量8.0 kD左右的低分子组分硫酸根含量最高。抗凝血实验表明,岩藻聚糖硫酸酯能显著延长RT、APTT和TT,尤以高硫组分大分子F-B抗凝血效果最好,而对PT影响不大,说明岩藻聚糖硫酸酯对外源凝血系统影响很小,它的抗凝血活性主要是通过内源性凝血途径来实现的。岩藻聚糖硫酸酯分子量对抗凝血活性的影响要比硫酸根含量的影响更大,其抗凝血活性随着分子量的降低而显著降低。对于分子量相近的岩藻聚糖硫酸脂,硫酸根含量越高,则抗凝血活性越高。总之,岩藻聚糖硫酸酯分子量和硫酸根含量越高,其抗凝活性越高。

海带岩藻聚糖硫酸酯降解及基本结构分析

用离子交换色谱法对海带岩藻聚糖硫酸酯粗糖进行分离纯化,然后采用铜-过氧化氢氧化降解法获得低分子量多糖,对降解条件和产物进行研究。得出结论:离子交换色谱中加入一定浓度氯化钠,可以获得高硫酸根和岩藻糖含量的岩藻聚糖硫酸酯。红外光谱和核磁共振分析确定硫酸根的位置在C2或C3上,糖构型属于α-D-吡喃糖。研究表明自由基氧化降解海带岩藻聚糖硫酸酯的降解条件与其硫酸根和岩藻糖含量有关,硫酸根含量越高,多糖越难以降解。最优降解条件:60℃下,500μL 20mg/mL糖溶液,加入0.0267mol/L乙酸铜,F3、F4加10μL 15%H2O2,F5加50μL15%H2O2,反应4h。采用PAGE凝胶电泳方法可以很好的分析氧化降解产物的分子量分布。

用复合酶酶解提取海带岩藻聚糖硫酸酯的工艺研究

采用正交试验的方法,研究了用戊聚糖复合酶与复合纤维素酶酶解海带Lam inaria japonica提取岩藻聚糖硫酸酯的工艺参数。结果表明:用戊聚糖复合酶酶解海带的最佳酶解参数为酶加量0.06%,温度为40℃,pH为3.5,酶解时间为30 m in,对岩藻聚糖硫酸酯的提取率为1.845%,粗提物中总硫酸根的质量分数为0.238%;用复合纤维素酶酶解海带的最佳酶解参数为酶加量0.208%,温度为50℃,pH为4.5,酶解时间为50 m in,对岩藻聚糖硫酸酯的提取率为1.279%,粗提物中总硫酸根含量为0.231%。用两种复合酶酶解法提取的岩藻聚糖硫酸酯粗提物提取率均较水煮法高(0.968%)。

海带中岩藻聚糖硫酸酯提取工艺评价模型的建立与探讨

采用均匀设计从海带中热水提取岩藻聚糖硫酸酯,以粗多糖提取率(Yw)、岩藻糖提取率(Yf)和硫酸根提取率(Ys)为评价指标,并采用综合加权评分法综合考虑各试验因素对以上三个指标的影响。利用Minitab软件分析加权值Y与各因素的相关性,再通过回归方程优化岩藻聚糖硫酸酯的工艺参数。建立了加权值Y与提取温度(X1)、提取时间(X2)和液料比(X3)之间的二次回归模型,即Y=65.2+0.555x1+1.73x2+0.587x3+0.0236x12+0.0939x32-0.110x1x2。优化后获得最佳提取工艺参数。

酸法提取海带中岩藻聚糖硫酸酯的研究

研究了海带岩藻多糖的提取、影响因子,岩藻多糖的分离最适条件为:温度80℃,浸提时间10h,料液比为1:8。经浓缩后,再用终φ(乙醇)=60%醇析获得粗品。同时对其红外光谱性质作了研究。

海带废渣中提取岩藻聚糖硫酸酯的工艺研究

采用响应曲面分析法研究了氯化钙水提法从海带废渣中提取岩藻聚糖硫酸酯的制备技术。在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken试验设计原理,通过建立数学模型对提取温度、提取时间、料液比等因素进行显著性和交互性分析研究,获得了最佳提取制备参数。结果表明,提取温度68℃,提取时间6 h,料液比1︰80时,可以获得3.95%的岩藻聚糖硫酸酯。其中岩藻糖含量为17.47%,硫酸根含量为37.14%。

用弱碱性阴离子树脂分离纯化海带岩藻聚糖硫酸酯工艺的研究

对弱碱性阴离子交换树脂分离纯化海带岩藻聚糖硫酸酯的工艺条件进行了研究,并采用苯酚-硫酸法测定总糖浓度绘制解吸曲线,确定最佳样液的pH值和洗脱流速。结果表明:在上样液pH为7.0、洗脱流速为1.0 mL/min时,分别收集0.5 mol/L和1.0 mol/L的NaCl溶液的洗脱部分,得到F-1、F-2两个组分,其回收率分别为22.5%、10.6%,总糖的质量分数分别为30.5%、28.6%。其中F-1为低硫组分,硫酸根的质量分数为11.7%,F-2为高硫组分,硫酸根的质量分数为26.5%

淡黑雷松藻低聚糖硫酸酯的制备及抗凝血活性研究

以淡黑雷松藻(Lessonia nigrescens)为原料,采用分步提取和定向改性的方法获得低聚糖硫酸酯ACV1,对其进行了糖醛酸含量、硫酸基含量、相对分子质量、单糖组成理化性质分析,采用傅里叶变换-红外光谱(FT-IR)和核磁共振碳谱(13C-NMR)对其结构进行了表征。体外抗凝血试验结果显示,ACV1可显著延长活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)(P <0.05),减少纤维蛋白原(FIB)的生成(P <0.05)。体内斑马鱼试验结果显示,ACV1可显著加快斑马鱼的节间血管血流速度(P <0.01)。ACV1作为一种天然活性原料具有良好的抗凝血活性,有潜力改善高凝血状态的药品、日用化妆品等功能性产品的开发。

海带岩藻聚糖硫酸酯抗血栓活性研究进展

海带中提取的岩藻聚糖硫酸酯是一种含有岩藻糖和硫酸根离子的结构复杂的硫酸多糖,影响岩藻聚糖硫酸酯活性的因素有分子量、硫酸根含量、硫酸根的取代位置、单糖的组成等指标,不同物质不同提取方法和降解方法产生不同结构的多糖,其不同结构产生抗凝血、降血脂、抗病毒、抗肿瘤、提高免疫力、抗氧化、抗疲劳、促益生菌生长等特异药理学活性,硫酸多糖研究最早且最广泛的活性是其抗凝血活性。对海带岩藻聚糖硫酸酯的抗凝血活性进行了综述,并对其应用前景进行展望,为其深度开发利用提供参考。

自由基联合超声降解法在海带岩藻聚糖硫酸酯中的应用

为研究广西海域海带岩藻聚糖硫酸酯的基本组成,用水提醇沉法提取岩藻聚糖硫酸酯,用自由基联合降解法降解广西海域海带岩藻聚糖硫酸酯,获得低分子量杂多糖,对广西海域海带的硫酸根含量、岩藻糖含量等指标进行测定,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对自由基降解方法获得的低分子量多糖分子量分布进行研究。结果表明,利用自由基氧化降解联合超声降解法能得到分子量较低且分布比较广的杂多糖,说明该方法简单、降解速率块、无毒副作用,正交试验得出,当超声功率为400 W,温度为60℃,时间为60 min,pH值为8.0时降解速率最佳。