海氏肠球菌与糖蜜联合接种改善葡萄枝叶发酵品质及哈萨克羊养殖效果评价

本试验旨在探究提高葡萄枝叶青贮发酵品质的菌剂添加方法,并以此调制裹包葡萄枝叶青贮,明确其替换部分玉米青贮和玉米秸秆对哈萨克羊生长性能、屠宰性能、血清生化指标及经济效益的影响,为丰富秸秆资源提供基础。发酵试验设4个处理,CK处理(不添加任何菌剂)、EH处理(添加5×10^(6)CFU/g FM海氏肠球菌)、M处理(添加3%FM糖蜜)、EHM处理(联合添加5×10^(6)CFU/g FM海氏肠球菌和3%FM糖蜜),室温发酵60 d后开袋检测营养成分、发酵品质和主要微生物数量。饲喂试验选取20只3月龄体重[(30.0±0.7)kg]相近的哈萨克羊,随机分为2组,每组10只羊。2组分别饲喂玉米青贮、玉米秸秆型全混合日粮(CY组)和葡萄枝叶青贮型全混合日粮(SP组)。预试期7 d,正试期60 d。结果表明:1)与葡萄枝叶原料相比,EHM处理中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)含量和pH及霉菌数量显著降低(P<0.05),乳酸含量与乳酸菌数量显著增加(P<0.05),EHM处理青贮效果最优。2)CY组与SP组之间生长性能、屠宰性能和血清生化指标差异均不显著(P>0.05)。3)与CY组相比,SP组饲料成本显著降低(P<0.05),育肥利润显著升高(P<0.05)。由此可见,海氏肠球菌与糖蜜联合添加可有效改善葡萄枝叶青贮发酵品质,抑制大肠杆菌和霉菌生长,促进乳酸菌繁殖与乳酸含量;且育肥哈萨克羊饲粮中以葡萄枝叶青贮替换部分玉米青贮与玉米秸秆可降低饲料成本,提高经济效益。

海氏肠球菌(Enterococcus hirae)发酵特性及应用

对实验所得并鉴定为海氏肠球菌(Enterococcus hirae)的菌株I-2进行发酵特性的考察,结果显示I-2具有良好的发酵特性。实验还将I-2用于酸奶发酵,并对其产品品质进行测定,各项指标均达到国家标准,且在发酵及后熟20d后活菌数依然能够保持在109CFU/mL以上,说明其具有良好的乳品开发潜力及保健功能。

海氏肠球菌IDO5对猪粪废水中吲哚降解条件优化及降解途径分析

在前期的研究中发现了一株吲哚高效降解菌IDO5,本研究主要对其降解猪粪废水吲哚的性质进行了测定。首先通过形态学和16S rRNA序列分析,并初步分析了IDO5对吲哚的降解效果和可作用的底物类型。其次比较了转速、温度、pH、碳源等因素对IDO5降解猪粪废水中吲哚的影响。最后利用GC-MS分析IDO5降解吲哚的产物结构和降解途径。结果表明,IDO5不仅能够利用吲哚为碳源生长,而且能够降解3-甲基吲哚、苯酚、甲酚等多种污染物,具有广泛的底物谱。菌株IDO5降解猪粪吲哚最适的条件为:温度37℃,转速170 r/min,pH 9,在此条件下24 h内可降解猪粪废水中98.2%的吲哚,去除效率较高。甚至在额外添加100 mg/L吲哚的情况下,IDO5依然能够以93.7%的高降解率去除吲哚。IDO5在降解吲哚过程中形成红色的产物,通过GC-MS分析,菌株IDO5降解吲哚很可能是通过吲哚→靛红→邻氨基苯甲酸→邻甲基苯甲醛途径。本研究表明,菌株IDO5不仅具有较强的吲哚降解能力,而且还能作用多种吲哚类化合物,对pH适应能力也较强,能够在广泛的条件下对畜禽养殖废水中的吲哚进行有效降解,具备一定应用价值。

山东省潍坊市农村人群海氏肠球菌恶唑烷酮类耐药基因流行情况研究

目的了解农村地区无症状人群中氟苯尼考耐药海氏肠球菌的耐药性和恶唑烷酮类耐药基因cfr、optrA、poxtA的携带情况。方法对来自山东省潍坊市的12个村620份粪便样品,用氟苯尼考(10 mg/L)肠球菌培养基进行细菌分离,利用飞行时间质谱仪鉴定菌种,采用琼脂稀释法对15种抗生素进行药敏试验,PCR鉴定耐药基因,对poxtA阳性的海氏肠球菌进行脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分析。结果共分离获得29株海氏肠球菌。所有海氏肠球菌均对四环素、克林霉素耐药,对氯霉素表现为高耐药率,但未检出氨苄青霉素、万古霉素、阿莫西林/克拉维酸耐药菌株,利奈唑胺耐药率为10.3%(3/29)。未检测到携带cfr的海氏肠球菌,optrA和poxtA检出率分别是86.2%(25/29)和17.2%(5/29)。聚类分析显示,5株poxtA阳性海氏肠球菌属于5种PFGE带型。结论山东潍坊市农村地区健康人群中,海氏肠球菌耐药情况严重,optrA和poxtA的携带率很高,呈现高度多态性,提示可能存在公共卫生隐患,应加强相关监测。

海氏肠球菌致泌尿系感染1例

人感染海氏肠球菌较为罕见,本研究报道1例海氏肠球菌致泌尿系感染病例。该患者患有糖尿病、高血压,以腰痛、发热、肾功能不全起病,外周血宏基因组学二代测序检测出海氏肠球菌感染,经抗感染治疗后好转。对该病相关文献进行回顾,分析其易感因素、临床表现、诊断和治疗方法,以供临床医师参考。

青藏高原藏原羚携带海氏肠球菌的特征研究

目的研究青藏高原野生动物藏原羚携带的海氏肠球菌特征。方法分离细菌,采用16S rRNA、rpoA基因序列比对方法鉴定藏原羚携带的海氏肠球菌。采用K-B纸片法进行药敏试验;使用COGs、SwissProt、CARD和VFDB等数据库对基因组进行分析;采用MUMmer和TreeBest软件构建单核苷酸多态性系统进化树图。结果从15份藏原羚粪便样品分离到2株海氏肠球菌。生化分析、16S rRNA和rpoA基因序列分析支持其为海氏肠球菌的鉴定。基因组分析发现其携带荚膜多糖基因簇。系统进化树分析提示2株藏原羚源海氏肠球菌分别属于不同的进化分支,且都与动物源性菌株进化关系更近。2株菌对多种常用抗生素敏感。结论青藏高原藏原羚携带的病原菌海氏肠球菌基因组中存在荚膜多糖基因簇,利于其抵抗不利环境因素,提示YL69可能具备在人群中传播的潜力。

藏羊源肠道海氏肠球菌的分离鉴定及益生特性研究

为了获得具有益生特性的藏羊源海氏肠球菌,试验通过采集健康藏羊肠道内容物,经选择培养基初筛后,进行细菌的分离纯化,利用形态学、生化试验及16S rDNA基因扩增测序对分离菌株进行鉴定,对鉴定得到的菌株进行同源性分析、药敏试验及致病菌抑制能力测定。结果表明:藏羊肠道内容物经细菌分离、筛选,在Pfizer肠球菌选择性培养基上观察到棕黑色菌落,挑取其中一个菌落经革兰氏染色镜检为阳性球菌;分离菌株生化鉴定结果符合肠球菌生化特点,16S rDNA序列与海氏肠球菌基因相似性达100%,综合分析鉴定分离菌株为海氏肠球菌,命名为EH1-ql;分离菌株培养4~12 h为对数生长期,随着细菌的生长,菌液pH值逐渐下降,最终菌液pH值稳定在4.3左右;该分离株具有较好的耐酸性和耐胆盐性,对常见的大部分抗生素敏感,对产气荚膜梭菌抑制能力最强,对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌具有一定抑制能力。说明本次从青海藏羊肠道内容物中分离鉴定得到海氏肠球菌,其作为潜在益生菌可为藏羊源益生菌制剂的研究提供候选菌株。

一株雀形目野鸟源海氏肠球菌的分离、鉴定

为了研究雀形目野鸟肠道益生菌群落的结构,试验采集健康雀形目鸟肠道内容物样本,对其中益生菌进行分离纯化,再经形态学、生化试验及16S r DNA的序列测定。结果表明:试验成功鉴定出一株海氏肠球菌,这株菌有一定耐酸性、耐胆碱盐性,但对常用的抗生素较敏感。

肠球菌属一种——Enterococcus Villorum

最近,比利时学者Vancanneyt等对美国、加拿大等国学者从腹泻仔猪分离到的5株肠细胞粘附性细菌进行研究,发现其表型特性相似于耐久肠球菌和海氏肠球菌,16SrDNA列分析,DNA-DNA杂交。

不同的标准试验菌对有效氯抗力的比较

采用悬液定量杀菌试验，比较了消毒剂鉴定试验中规定采用的不同细菌繁殖体对有效氯的抗力．结果，革兰阳性菌对消毒剂二氯异氰尿酸钠溶液中有效氯的抗力比革兰阴性菌强；金黄色葡萄球菌（ＡＴＣＣ ６５３８）与海氏肠球菌（ ＡＴＣＣ １０５４１）的抗力相近；大肠杆菌 ８０９９株的抗力，较该菌 ＡＴＣＣ１０５３６株强，与绿脓杆菌（ＡＴＣＣ １５４４２）较接近。对该消毒剂含有效氯２５ ｍｇ／Ｌ溶液抗力的大小，依次为海氏肠球菌、大肠杆菌（８０９９）、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆茵（ＡＴＣＣ １０５３６），说明同一种菌的不同菌株抗力差距较大。

滴露消毒液的杀菌效果与抑菌能力研究

滴露消毒液含对氯间二甲苯酚４８％（ｇ ／ ｍｌ）及表面活性剂、香料等。采用欧洲标准悬液试验方法测试其杀菌效果及最小抑菌浓度。结果，含滴露５％（ｍｌ／ｍｌ）的消毒液作用 ５ｍｉｎ，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、海氏肠球菌及１０株临床分离菌株的杀灭可达到欧洲标准（杀灭指数为５０）；但对绿脓杆菌的杀灭指数仅达３８。滴露消毒液对临床分离菌株的最小抑菌浓度为含滴露≤０．６３％（ｍｌ／ｍｌ）， 最小杀菌浓度为含滴露≤１．３％（ｍｌ／ｍｌ），均明显低于消毒应用浓度。

用欧洲标准消毒试验法检测优氯净的杀菌效果

采用欧洲标准悬液消毒试验，比较了欧洲标准菌株与我国《消毒技术规范》所用试验菌对消毒剂二氯异氰尿酸钠（优氯净）溶液中有效氯的抗力。结果，革兰阳性球菌的抗力明显高于革兰阴性杆菌。以含有效氯 ２００ ｍｇ／Ｌ的优氯净溶液作用１０ ｍｉｎ，对金黄色葡萄球菌（ＡＴＣＣ ６５３８）与海氏肠球菌（ＡＴＣＣ １０５４１）的杀灭指数分别为５．０８与３．８２，对大肠杆菌（８０９９）、大肠杆菌（ＡＴＣＣ１０５３６）与绿脓杆菌（ＡＴＣＣ １５４４２）的杀灭指数均≥７．３７。对含有效氯１００ ｍｇ／Ｌ该液抗力的大小，依次为海氏肠球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌（８０９９）、大肠杆菌（ＡＴＣＣ １０５３６）、绿脓杆菌。

3种羊源益生菌对瘤胃体外发酵参数和养分降解率的影响

本试验旨在研究3种羊源益生菌[海氏肠球菌(K2)、枯草芽孢杆菌(Ha)和酿酒酵母菌(Ma)]对瘤胃体外发酵参数及养分降解率的影响。采用瘤胃体外发酵方法,设8个组(每组6个重复),其中7个组分别添加K2、Ha、Ma、K2+Ha、Ha+Ma、K2+Ma和K2+Ha+Ma,K2、Ha和Ma添加浓度分别为1×10^(8)、1×10^(7)和1×10^(7)CFU/g,另设不加菌的对照组,测定发酵2~48 h的产气量以及挥发性脂肪酸、微生物蛋白含量等发酵参数和养分降解率。结果表明:发酵48 h时K2+Ma和K2+Ha+Ma组的产气量均达最高,较对照组分别显著增加了9.54%和6.32%(P<0.05),且快速降解部分产气量和慢速降解部分产气量均显著升高(P<0.05)。与对照组比较,K2+Ma组的微生物蛋白、总挥发性脂肪酸和丙酸含量均显著增加(P<0.05)。另外,不同单菌和复配对养分降解率的影响不同,K2+Ma组的干物质、粗蛋白质和总能降解率最高,而K2+Ha+Ma组的中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维降解率最高,均显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,K2+Ha+Ma和K2+Ma组合体外发酵效果较好,可为饲用益生菌的开发提供借鉴。

瑶鸡粪便中乳酸菌的分离鉴定及筛选

目的从瑶鸡粪便中筛选优质的宿主源性乳酸菌。方法采集健康成年瑶鸡粪便,将鸡粪汁接种至MRS肉汤培养基富集后,按5%体积比取菌液于PBS(pH 3)中处理1 h,离心后的菌泥用含0.3%胆盐的PBS处理1 h,再倍比稀释涂布MRS琼脂平板,选取优势菌株,对其进行菌落形态、革兰染色镜检、16S r RNA基因序列分析鉴定,并测试生长曲线、产酸性能、耐酸特性、耐胆盐特性、抑菌能力等生物学特征。结果分离株为海氏肠球菌,命名为GZYY2021,该菌株在8 h达到稳定期,培养24 h的菌液pH值接近4.43,该菌株对鸡白痢沙门菌有较强的抑菌活性,抑菌圈直径约为18.46 mm,对低pH和胆盐环境均耐受。结论分离获得的GZYY2021菌株可为后续瑶鸡及其他家禽用微生态制剂的研究及其应用提供可选择的菌种资源。

乳酶生菌种脂肪酸组分的GC-MS检测分析

目的:建立气相色谱-质谱联用法测定乳酶生菌种的脂肪酸成分,并对各试样菌株间的同源性进行分析。方法:应用14%三氟化硼-甲醇法对菌株进行脂肪酸甲酯化,采用HP-5MS毛细管色谱柱(30 m×0.250 mm×0.25μm),载气为氦气,程序升温(120℃,5 min;6℃·min^(-1)升至240℃,10 min;10℃·min^(-1)至260℃,2 min),进样口温度250℃,选择EI离子源,溶剂延迟3 min,质谱扫描m/z 35~450。结果:肠球菌属的菌株均具有十四碳烷酸、十六碳烷酸、十六碳烯酸、十八碳烷酸、十八碳烯酸及十九碳烷酸特征峰;批号为20100922和20101001的乳酶生片菌株与海氏肠球菌CGMCC1.595之间,6家生产企业的其他乳酶生片菌株与粪肠球菌140623和屎肠球菌CGMCC1.131之间,具有相似的气相色谱图及相近的脂肪酸组分比值。结论:本方法可用于乳酶生菌种的快速鉴定及同源性分析。