海洋侧孢短芽孢杆菌Lh-1抗菌活性物质的分离及特性研究

采用超滤、DEAE-Sephadex A25和CM-Sepharose FF离子交换层析及HPLC反相层析等步骤得到了海洋侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）Lh-1的抗菌活性物质，命名为R-1。HPLC纯化出的抗菌物质经质谱测定其分子量为1608．023Da，BIO．RAD等电聚焦测得其pI为8．55，氨基酸分析表明该物质由Leu、Tyr、val、Ile、Lys、Gly、Met、Ser、Ala9种氨基酸组成。该抗菌物质具有极强的耐热、耐酸碱特性，在pH 11．0～12．0条件下，121℃处理1h，其活力保持在75％以上。经3种蛋白酶（碱性蛋白酶、胰酶、胃蛋白酶）处理后，活性保持在80％以上。茚三酮反应阳性。推测R-1可能是低分子量的脂肽。抑菌试验表明对食品腐败菌、致病性革兰氏阴性、阳性菌及少数真菌均有抑菌活性。

海洋侧孢短芽孢杆菌Lh-1株所产多肽药物R-1抗鸡新城疫病毒的研究

试验为了研究海洋侧孢短芽孢杆菌Lh-1株产生的新型抗菌药物R—1对新城疫病毒的抗病毒活性及抗病毒作用机理，通过抗菌药物R—1对病毒的直接作用试验、调节细胞免疫功能试验和鸡胚中抑制新城疫病毒增殖释放试验对该物质的抗病毒活性、感染动力学、毒性和可能的抗病毒机理进行了研究。结果表明：R-1的浓度为100mg／mL和50mg／mL时，体外与新城疫病毒作用3h杀灭率可分别达到94．51％、92．93％；使用R-1免疫鸡胚细胞后，对注入的新城疫病毒的作用有不同程度的抑制效果，最低发病率可以达到13．34％；在新城疫病毒侵入鸡胚细胞1h后注入100mg／mL R-1，病毒的杀灭率可以达到89．13％，并抑制了病毒在细胞内的增殖。

海洋侧孢短芽孢杆菌Lh-1株所产多肽R-1性质分析及作用原理探讨

对海洋侧孢短芽孢杆菌（Brevibacillus laterosporus）Lh-1所产多肽R-1的性质及作用机理进行了研究。R-1对温度和pH稳定,在pH 11.0~12条件下,121℃处理1 h,其活力保持在75%以上。经3种不同浓度的蛋白酶（碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶）处理4 h后,活性保持在80%以上。与常见的金属离子和化学试剂在一起反应,对抗菌肽R-1的活性无明显影响,可以配合一起使用,仅吐温和SDS对其影响较大。氨基酸分析表明,抗菌肽R-1由亮氨酸（Leu）、酪氨酸（Tyr）、缬氨酸（Val）、异亮氨酸（Ile）、赖氨酸（Lys）、甘氨酸（Gly）、蛋氨酸（Met）、丝氨酸（Ser）、丙氨酸（Ala）9种氨基酸组成,其中疏水氨基酸居多。抑菌试验表明R-1的抑菌谱广泛,对经培养分离出来的大肠杆菌及白假丝酵母菌的扫描电境超微结构观察表明,R-1的杀菌机制主要是通过含有带正电荷的Lys与带负电荷的磷脂分子结合,然后R-1的疏水端插入到指示菌的疏水区,改变膜的构象,从而导致菌体的死亡。

海洋侧孢短芽孢杆菌(AMCC 100018)对设施黄瓜的应用效应研究

在绿源有机肥中添加不同比例的海洋侧孢短芽孢杆菌菌株(AMCC 100018),制成生物有机肥作为基肥施用在设施黄瓜上,同时以单施绿源有机肥为对照,研究了不同处理对黄瓜生长、品质、产量及土壤化学性状的影响。试验结果表明,海洋侧孢短芽孢杆菌菌剂与生物有机肥按1∶250施用,即海洋侧孢短芽孢杆菌菌剂用量6.67 kg/hm2,生物有机肥施用量1 665 kg/hm2,可有效促进黄瓜生长,显著改善黄瓜果实的营养品质。

海洋侧孢短芽孢杆菌的分离鉴定及其抗菌活性物质初步研究

采用滤纸片和牛津杯法对分离自大连海参养殖圈海水及海底污泥的506株细菌进行了抗菌活性筛选,获得了1株抗菌活性较强的菌株HS-A465。经形态观察及生理生化实验,结合16S rDNA序列分析,确定为海洋侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)。采用薄层层析和茚三酮显色检测,在其发酵上清液中存在2种具有较强抗菌活性的代谢物质,对每一种成分进行了分离纯化和抑菌实验。结果发现,成分2和3具有显著的抑菌作用。进一步分析表明,成分2和3还具有很强的热稳定性和pH稳定性,对有机溶剂耐受性较好。根据茚三酮显色结果,可以初步推断该活性物质结构上含有游离的氨基酸,初步推断它们是直链的肽类物质。这一研究成果将为海洋抗菌活性物质的进一步开发利用提供理论参考。

侧孢短芽孢杆菌溶藻活性代谢产物部分特性的研究

研究了不同因素对侧孢短芽孢杆菌（Brevibaci Uuslaterosporus）无菌滤液溶藻效果的影响，并对无菌滤液进行了紫外光谱扫描分析，探讨侧孢短芽孢杆菌溶藻活性代谢产物的物质特性、探究物质的组成成分．结果显示：无菌滤液分别经不同温度、pH值、蛋白酶和紫外照射时间处理后，均仍具有极为显著的溶藻能力（P〈0．01），溶藻实验7d后颤藻（Oscillatoria sp．）叶绿素a质量浓度的平均下降率分别为：58．65％、63．88％、61．50％和62．61％，藻体干重的平均下降率分别为：39．77％、39．30％、36．49％和37．02％，表明溶藻活性代谢物质具有耐酸、耐碱、耐高温、抗蛋白酶水解、抗紫外辐射的特性；同时，分别在4、28℃环境中贮存28d的无菌滤液，始终保持着极高的溶藻活性，溶藻实验7d后颤藻叶绿素a质量浓度的平均下降率分别为：50．84％和60．39％，藻体干重的平均下降率分别为：37．82％和37．54％，说明该物质的结构极其稳定，在环境中可长久存在；另外，加热与未加热处理的无菌滤液的紫外光谱最大吸收峰都在290～300nm之间．分析表明，溶藻活性代谢产物极大程度上属于具有极强稳定性的肽类物质．