海洋多粘类芽孢杆菌L_1-9菌株50L发酵罐发酵工艺

为了提高海洋细菌L1-9菌株液体发酵的生物量和抑菌活性,进行了50 L发酵罐的分批发酵和补料发酵工艺研究。结果表明:L1-9菌株在50 L发酵罐中分批发酵工艺为:接种量8%(菌龄24 h、浓度为109个细胞/mL)、初始搅拌速度250 r/min、通气量为3 L/min,发酵时间为11～12 h,生物量达2.40×1010CFU/mL;补料分批发酵工艺为:在分批发酵的条件下,发酵13 h开始流加60 g/L葡萄糖溶液,使还原糖浓度保持在0.4 g/L左右,发酵周期30 h,生物量达到4.63×1010CFU/mL,比分批发酵提高了78.07%;抑菌时效测定结果表明,发酵液对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌作用伴随着生物量的增加不断加强,20 h抑菌活性达到高峰,抑菌带宽度为17.75 mm,抑菌活性与生物量呈正相关,为生长关联型。

海洋多粘类芽孢杆菌L_1-9抗菌活性产物的分离与结构鉴定

为了从海洋多粘类芽孢杆菌发酵液中分离鉴定抗菌活性产物,以对禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)的生物活性进行跟踪,采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析、薄层层析和HPLC等技术,对海洋多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)L1-9抗菌活性组分进行分离纯化,采用ESI-M S、1H NM R、13C NM R等波谱分析技术,对活性组分进行结构鉴定。采用牛津杯法测定活性组分的抑菌谱。得到了2种具有强抗菌作用的组分B1和B2;认为组分B1和B2分别为邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)。DBP和DEHP对供试的5种病原真菌和细菌具有抑制作用。邻苯二甲酸二丁酯的抑制作用高于邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯。

海洋细菌L_1-9菌株在日本囊对虾养殖池中的定殖及其抑菌和水质净化作用

将海洋多粘类芽孢杆菌L1-9菌株接种在日本囊对虾养殖池水体中,以不接L1-9菌株为对照组,定期检测水体中L1-9菌株、弧菌、芽孢杆菌及其他异养细菌数量以及氨氮、硝酸盐、亚硝酸盐和磷酸盐的质量浓度和日本囊对虾的成活率。试验结果表明,在日本囊对虾养殖池水体中,随着培养时间的延长,接种L1-9菌株池水中,芽孢杆菌、异养细菌和弧菌的数量以及氨氮、硝酸盐、亚硝酸盐含量显著低于对照组,磷酸盐的质量浓度显著高于对照组,其中对芽孢杆菌和氨氮的影响最为明显,培养第5d处理组芽孢杆菌的菌落数为4.60×102 cfu/mL显著低于对照组的1.80×103 cfu/mL;培养第7d处理组的氨氮质量浓度为60.2μg/L,显著低于对照组的76.7μg/L,表明L1-9菌株在水产养殖中具有一定抑菌及水质净化作用,L1-9菌株对日本囊对虾成活率没有影响。