海洋放线菌Streptomyces sp.大片段DNA基因组文库的构建

目的:构建稀有海洋放线菌Streptomyces sp.基因组文库。方法:以稀有海洋放线菌Streptomyces sp.为实验材料,随机剪切提取的总DNA,5'-磷酸末端补平回收40kb左右的DNA片段,与pWEBTM载体连接,经包装蛋白包装成噬菌体后侵染宿主细胞E.coliEPI100,构建该菌株的基因组文库,并对该文库进行质量鉴定。结果:成功构建了稀有海洋放线菌Streptomyces sp.的基因组文库,效价达9.0×104CFU/mL,得到4000个阳性克隆子,远远大于按覆盖率为99%计算至少所需的837个阳性克隆子数,且平均插入片段长度为36kb,重组率100%。阳性克隆子保存于96孔板中,-80℃保存。结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为了进一步评估Streptomyces sp.所能合成的所有潜在天然产物,还需要进一步检测该文库中包含有生物合成基因簇的大肠杆菌的表达情况。

海洋放线菌Streptomyces sp. 124092中的细胞毒活性成分

对海洋放线菌Streptomyces sp.发酵液的提取物进行柱层析分离,得到5个化合物.经MS,NMR,^1H-^1HCOSY,HSQC和HMBC等数据鉴定,其结构分别为3-氨基-丙酸对甲苯酯（1）、6-Amino-3-（4-hydroxy-benzyl）-1,4-diazonane-2,5-dione（2）、正丁基-α-D-吡喃甘露糖苷（3）、大豆苷元（4）和1H-3-吲哚甲酸（5）.其中化合物1和2为新化合物,细胞毒活性测试结果表明,化合物1～4对人肝癌细胞（SMMC-7721）具有不同程度的生长抑制活性.

海洋放线菌Streptomyces sp.V5产生的一个新的八元环内酯

海洋放线菌Streptomyces sp.V5分离自南中国海红树根部土壤,从其培养液分离获得一个新的八元环内酯octalactin C(A),以及四个已知化合物2-甲基-3-呋喃甲酸(B)、环(脯-亮)二肽(C)、环(丙-缬)二肽(D)和尿嘧啶(E).通过完整的波谱数据解析了它们的结构.

海洋放线菌Streptomyces sp.(#195-02)的代谢产物研究

从一株南海海洋链霉菌属放线菌195-02中分离得到8个化合物,利用波谱技术确定其结构分别为对羟基苯腈（1）、2-甲基-3-呋喃甲酸（2）、2-呋喃甲酸（3）、环（苯丙-苯丙）二肽（4）、环（亮-异亮）二肽（5）、烟酸（6）、吲哚-3-乙酸（7）和邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（8）。化合物1、3、8为首次从链霉菌属中分离得到,化合物4～7为首次从海洋放线菌中分离得到。活性测试表明化合物4和5在浓度为50μg/ml时,对喉癌细胞hep2抑制率分别为51%和47%,对肝癌细胞hepG2抑制率分别为40%和31%。

响应面法优化海洋放线菌Streptomyces sp.YT-10抗菌物质的发酵条件

以啤酒酵母为指示菌,研究了海洋放线菌YT-10产抗菌物质的发酵条件。利用Plackett-Burman设计对影响YT-10产抗菌物质的因素的效应进行评价,筛选出具有显著效应的三个因素:葡萄糖、黄豆粉和氯化钠。利用响应面中心旋转组合设计优化三个显著因素,确定了葡萄糖,黄豆粉和氯化钠浓度分别为0.7%,1.3%,0.952%。优化后抑菌圈直径可达32.6mm,比原来增加了34.7%。

北极海洋放线菌Streptomyces sp.604F中的抗霉素A和伏尔加霉素类成分

极地微生物代谢产生芳香族硝基化合物、肽类、萜类等多种骨架类型的化学成分。为从北极放线菌中发现结构新颖、活性显著的小分子化合物,本研究采用Sephadex LH-20凝胶和半制备HPLC等柱层析分离纯化化合物手段,结合LC-MS、1H-和13C-NMR等波谱学数据和文献对比进行结构解析,从链霉菌Streptomyces sp.604F提取物中分离鉴定出抗霉素A1b(1)、抗霉素A4a(2)、抗霉素A2a(3)、抗霉素A3a(4)、抗霉素A1a(5)以及伏尔加霉素(6)和8-脱氧伏尔加霉素(7)这7个化合物。化合物1—7是首次从北极海洋沉积物来源的微生物中发现,而且是首次从同一菌株中发现抗霉素A和伏尔加霉素这两类化合物。

海洋放线菌Streptomyces sp.AHMU XC 2026次级代谢产物及其抗植物病原真菌活性研究

利用色谱法对一株海洋沉积物来源的放线菌Streptomyces sp. AHMU XC 2026次级代谢产物进行分离纯化,结合NMR波谱分析和文献比对鉴定10个单体化合物,分别为cyclo-(trans-4-OH-D-Pro-D-Phe)(1),cyclo-(D-Pro-D-Phe)(2),cyclo-(L-Ala-L-Phe)(3),cyclo-(L-leucine-L-proline)(4),cyclo-(L-Leu-trans-4-hydroxy-L-Pro)(5),cyclo-(D-Pro-D-Ile)(6),trans-2-methylcinnamic acid(7),indole-3-carboxaldehyde(8),2-pyrrolecarboxylic acid(9),2-hydroxy phenyl acetic acid(10)。采用滤纸片扩散法筛选抗植物病原真菌活性,结果表明化合物10在100μg/disc下对水稻稻瘟真菌Pyricularia oryzae HNM 1003具有微弱的抑制活性,抑制圈直径为8 mm。

海洋放线菌阿维丁链霉菌次生代谢产物研究及杀线虫活性筛选

为研究海洋放线菌杀线虫活性物质,通过液体发酵对81株海洋放线菌进行杀线虫活性筛选,然后对活性菌株的发酵液进行分离纯化,并对单体化合物进行杀线虫筛选.筛选出一株海洋放线菌具有较高杀线虫活性,线虫死亡率达到89.9%.该菌株经鉴定为Streptomyces avidinii,并从其发酵液次级代谢产物中得到7个化合物,分别为pyrrole-2-carboxamide(1)、N-(3-(1H-indole-3-yl)propyl)acetamide(2)、p-hydroxybenzyl alcohol(3)、N-acetyltyramine(4)、4-methyl-1-phenylpentane-2,3-diol(5)、1H-indole-3-aldehyde(6)以及zarzissine(7),其中化合物3和4的杀线虫活性较好.

海洋放线菌Streptomyces sp.(No.30701)次生代谢产物研究

目的研究一株海洋放线菌Streptomyces sp.(No.30701)的化学成分。方法采用硅胶开放柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及高效液相色谱等分离手段进行化合物的分离、纯化;利用理化性质和波谱学分析对单体化合物进行结构鉴定。结果从海洋放线菌Streptomyces sp.(No.30701)发酵物中分离得到9个环二肽类化合物,分别鉴定为环(L-脯-L-缬)二肽(1)、环(D-脯-L-缬)二肽(2)、环(L-脯-L-亮)二肽(3)、环(4-羟基-脯-亮)二肽(4)、环(L-脯-L-异亮)二肽(5)、环(L-脯-L-酪)二肽(6)、环(L-亮-L-缬)二肽(7)、环(D-苯丙-甘)二肽(8)、环(L-苯丙-L-缬)二肽(9)。结论以上化合物均为海洋放线菌常见的次生代谢产物,但化合物2、8含有天然界中不多见的D型氨基酸,并且化合物2是从链霉菌属放线菌中首次分离得到。

海洋放线菌Streptomyces sp．LZ35中的安莎霉素类化合物

目的对海洋放线菌Streptomyces sp.LZ35固体发酵提取物的化学成分进行研究。方法采用Sephadex LH-20,硅胶等色谱柱及重结晶进行分离纯化,用波谱技术鉴定化合物的结构。结果从14 L固体发酵提取物中分离得到7个安莎霉素类化合物,分别鉴定为geldanamycin(1),17-O-demethylgeldanamycin(2),herbimycin B(3),reblastatin(4),17-O-demethylreblasta-tin(5),autolytimycin(6),hygrocin A derivative(7)。结论化合物1～7均为首次从该菌株中分离得到,且首次从一株链霉菌中分离到2种类型的安莎霉素。

海洋放线菌Streptomyces sp.MDW-06中1个新的聚酮类化合物

分离鉴定海洋放线菌Streptomyces sp. MDW-06的次级代谢产物。利用柱色谱等方法对发酵产物进行分离、纯化,运用质谱、核磁共振和比旋光等手段鉴定化合物的结构,采用药敏纸片法和DPPH法评价了化合物的抗菌活性和抗氧化活性。从海洋放线菌Streptomyces sp. MDW-06的发酵产物中分离鉴定了6个化合物(1~6):streptopentanoic acid(1),germicidin A(2),germicidin B(3),isogermicidin A(4),isogermicidin B(5)以及oxohygrolidin(6)。其中化合物1为新化合物。化合物1在100 mg·L-1下显示有弱的DPPH自由基清除活性,清除率为36. 4%。

海洋放线菌Streptomyces variabilis strain 6-1次级代谢产物的研究

目的:对来自海洋软珊瑚的链霉菌6-1(Streptomyces variabilis strain 6-1)进行次级代谢产物的分离和鉴定,寻找具有生物活性的化合物,为人类健康服务。方法:采用液体培养基对分自海洋软珊瑚Scleronephthya sp中的链霉菌6-1(Streptomyces variabi-lis strain 6-1)进行发酵培养,用乙酸乙酯对发酵液进行萃取;采用半制备高效液相色谱(semi-preparative HPLC)分离方法对乙酸乙酯萃取物进行分离纯化,得到单体化合物;运用电喷雾质谱(ESI-MS)、核磁共氢振(1H NMR)、核磁共振碳谱(13C NMR)和物理性质对所得单体化合物进行结构鉴定。结果:从海洋链霉菌6-1(strain 6-1)发酵液的乙酸乙酯萃取物中分离得到3个单体化合物,分别鉴定为:7,4'-二羟基异黄酮(1)、5,7,4'-三羟基异黄酮(2)和丁烯酸内酯-Ⅰ(3)。结论:丁烯酸内酯-Ⅰ是从链霉菌属首次分离得到,化合物1和2均是从Streptomyces variabilis中首次分离得到;变异链霉菌6-1(Streptomyces variabilis strain 6-1)可以作为活性化合物3(丁烯酸内酯-Ⅰ)的重要来源。

海洋放线菌Streptomyces sp.(No.172221)次生代谢产物研究

目的研究一株海洋放线菌Streptomyces sp.(No.172221)的次生代谢产物。方法采用各种色谱方法进行成分分离,综合运用多种波谱学手段确定单体化合物的结构。结果分离到8个化合物,鉴定其结构分别为麦角甾-3β,5α,6β-三醇(1);麦角甾-3β,5α,6β-三醇-3-Ο-β-D葡萄糖苷(2);N-苯甲基氨基甲酸(3);1,3-丙二醇苯乙酸酯(4);环(脯-亮)二肽(5);环(脯-缬)二肽(6);脯氨酸(7)和腺嘌呤核苷(8)。结论化合物1和2为甾体类化合物,其中化合物2为首次从放线菌中分离得到,化合物3、4为新天然产物,化合物5和6为常见的细菌代谢产物环二肽类。

海洋放线菌Streptomyces sp.次级代谢产物的研究

目的系统研究海洋放线菌Streptomyces sp.的次级代谢产物。方法采用硅胶开放柱色谱、SephadexLH-20凝胶柱色谱以及高效液相色谱等分离方法对Streptomyces sp.的次级代谢产物进行分离、纯化;根据理化性质和波谱学分析对所得单体化合物进行结构鉴定。结果与结论从海洋放线菌Streptomyces sp.发酵物的乙酸乙酯萃取物中分离得到12个已知化合物,分别鉴定为3-苄基吡咯并哌嗪-25,-二酮(1)、3-苄基-8-羟基吡咯并哌嗪-25,-二酮(2)3、-对羟苄基-8-羟基吡咯并哌嗪-25,-二酮(3)、3-([1H-吲哚-3'-基)甲基]吡咯并哌嗪-25,-二酮(4)3、-异丁基-6-异丙基哌嗪-2,5-二酮(5)、3-异丙基吡咯并哌嗪-25,-二酮(6)、二吡咯并哌嗪-25,-二酮(7)、N-苯乙基乙酰胺(8)、4'7,-二羟基异黄酮(9)4、'5,7,-三羟基异黄酮(10)4、',7-二羟基二氢黄酮(11)、吡咯-2-甲酸(12)。以上化合物均为首次从该链霉菌属菌株中分离得到。

海洋放线菌Streptomyces sp.SCSIO 1934中次生代谢产物的分离和鉴定

目的:从1株来源于中国南海沉积环境的海洋链霉菌SCSIO 1934的发酵产物中分离鉴定次生代谢产物。方法:对海洋链霉菌SCSIO 1934的发酵液进行有机溶剂萃取,利用硅胶、凝胶柱色谱等方法分离次生代谢产物,通过核磁数据和理化性质对各单体化合物进行结构鉴定。结果:从菌株Streptomyces sp.SCSIO 1934中分离纯化得到17-脱甲基格尔德霉素(17-O-demethylgeldanamycin,1),lebstatin(2),17-O-demethyllebstatin(3),尼日利亚菌素(nigericin,4),尼日利亚菌素钠盐(nigericin sodium salt,5),abierixin(6)。结论:本研究发现了1株能够产生多种抗生素的海洋放线菌Streptomyces sp.SCSIO 1934。

PPtase高表达海洋放线菌Streptomyces sp.SCSIO 40060的次级代谢产物研究

目的对1株南海沉积物来源的PPtase高表达放线菌Streptomyces sp.SCSIO 40060进行次级代谢产物研究。方法利用硅胶柱色谱、薄层色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱(HPLC)等手段对PPtase高表达菌株发酵产物进行分离纯化;运用核磁共振(NMR)、质谱(MS)等波谱方法,并结合相关文献数据比对,鉴定化合物的结构。结果从PPtase高表达菌株发酵产物中分离纯化得到7个化合物,包括5个二酮哌嗪类化合物、1个萘醌衍生物和1个萘甲酸衍生物,分别为methoxyneihumicin(1)、XR334(2)、(S,Z)-3-benzylidene-6-isopropylpiperazine-2,5-dione(3)、(S,Z)-3-benzylidene-6-methylpiperazine-2,5-dione(4)、(3Z,6Z)-3-(4-methoxybenzylidene)-6-(2-methylpropylidene)-piperazine-2,5-dione(5)、2-methoxy-1,4-naphthoquinone(6)、1-hydroxy-4-methoxy-2-naphthoic acid(7)。

海洋放线菌 Nocardiopsis dassonvillei JS106 的抗群体感应活性物质研究

群体感应抑制剂能够通过调控致病菌的群体感应系统来降低其致病力,且不易使其产生抗性突变,有望治疗或协同治疗细菌性感染,以应对细菌耐药性问题。本文研究了一株海洋来源的放线菌达松维尔拟诺卡氏菌JS106中的抗群体感应活性物质。采用减压柱层析和高效液相色谱从JS106的发酵液中分离到6个化合物:1,6-二羟基吩嗪(1)、6-羟基-1-甲氧基吩嗪(2)、4',7-二甲氧基异黄酮(3)、N-(2-羟基苯基)乙酰胺(4)、1-甲氧基吩嗪(5)和2-氨基吩恶嗪-3-酮(6)。在测试浓度下,所有化合物均表现出很好的抗群体感应活性,对紫色色杆菌的色素产生有显著的抑制作用,但没有明显的生长抑制。菌株JS106可产生丰富的吩嗪类化合物,在抗群体感应方面有出色的应用潜力。

刺五加内生放线菌Streptomyces tauricus CWJ-107活性次级代谢产物研究

目的从药用植物刺五加内生放线菌Streptomyces tauricus CWJ-107次级代谢产物中发现抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)活性良好的天然产物。方法采用16S r RNA基因序列分析对菌株CWJ-107进行初步分类鉴定,大量发酵获得粗提物,通过硅胶柱层析、LH20凝胶柱层析、薄层色谱以及高效液相色谱等方法,以抗MRSA活性导向进行目标化合物的分离纯化,利用核磁共振和质谱鉴定化合物结构,并利用微孔板法测定化合物最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),对其抗MRSA活性进行评价。结果菌种鉴定结果显示菌株CWJ-107为Streptomyces tauricus,从菌株CWJ-107的菌丝体中分离得到1个抗MRSA活性化合物107-A,经波谱解析证实其结构为糖基化蒽醌类化合物cinerubin B,抗菌活性测定结果证实其具有良好的抗MRSA活性,MIC值为1μg/m L。结论从刺五加内生放线菌CWJ-107的代谢产物中分离到的107-A经结构鉴定为糖基化蒽醌类化合物cinerubin B,除此之外,本文首次报道了该化合物的抗MRSA活性。

海洋放线菌Actinoplanes sp.M4I6化学成分研究

对海洋放线菌Actinoplanes sp.M4I6的次生代谢产物进行分离鉴定,并评价了其生物活性。采用正相硅胶柱色谱、反相C18柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等技术进行分离纯化,运用核磁共振波谱技术对分离所得化合物进行结构鉴定。对分离得到化合物进行了抗枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC 6633)和抑制乙酰胆碱酯酶活性评价。共分离得到9个化合物,经鉴定为(E)-prop-1-enyl-2-hydroxypropanoate(1)、cyclo-(R-Pro-R-Phe)(2)、cyclo-(L-Val-L-Leu)(3)、cyclo-(L-Phe-L-Val)(4)、cyclo-(L-Leu-L-Phe)(5)、lumichrome(6)、2-(4-hydroxyphenyl)ethylacetate(7)、4-hydroxysattabacin(8)、3-hydroxybutan-2-yl 2-phenylacetate(9),其中化合物1为新天然产物。化合物5、6、8、9对Bacillus subtilis ATCC 6633有一定的抑制活性,化合物4、6对乙酰胆碱酯酶有较弱的抑制活性。

D-101大孔吸附树脂分离放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4活性成分条件的研究

为了优化大孔吸附树脂分离放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4发酵液中活性成分的条件,以洗脱液对猕猴桃溃疡菌(Pseudomonas syringae pv.actinidiae)抑菌活性的强弱为评价指标,采用D-101大孔吸附树脂对放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4的发酵液进行吸附和洗脱试验。结果表明:当发酵液上样量为100mL,pH为6,洗脱流速为150mL/h,解析溶剂为φ=80%的丙酮水溶液,洗脱体积为40mL时,洗脱液的抑菌圈直径最大,吸附解析效果最好。说明,D-101大孔吸附树脂可用于分离放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4发酵液中的活性成分。