海洋碱性蛋白酶894在活性胶原肽制备中的优势性研究

以富含胶原的海产品下脚料为原料,以羟自由基清除活性为目标,分别以热水抽提,醋酸水解,海洋碱性蛋白酶894、胃蛋白酶、胰蛋白酶降解法制取活性胶原肽。经比较产物的活性、感官性状,发现酶法所得胶原肽明显好于其他方法,而海洋碱性蛋白酶894降解,所需时间最短,活性最高,感官性状最好,成本又低,在海洋功能食品原料的制备过程中体现出明显的优势。经SDS-PAGE电泳分析发现,其降解产物分子量在10 ku以下。

一株产低温碱性蛋白酶海洋细菌Pseudoalteromonas flavipulchra HH407的筛选与生长特性

对从连云港海域筛选的一株产低温碱性蛋白酶的海洋适冷菌HH407进行的鉴定和生长特性研究结果表明,该菌为革兰氏阴性杆菌,好氧,端生鞭毛,无芽孢及荚膜,大小为0.4～0.7μm×1.0～1.8μm,在酪蛋白培养基的菌落特征为椭圆金黄色、光滑、半透明、四周隆起。根据其生理生化性质、16S rDNA同源性和系统进化树分析初步鉴定该菌属于Pseudoalteromonas flavipul- chra。该菌的生长温度范围为0～40℃,最适生长温度为20℃;pH范围为5.5～11.0,最适生长pH值为8.5;NaCl质量浓度范围为0.5～13 g/dL,最适生长NaCl质量浓度为4 g/dL,无NaCl时不能生长。该菌能较好利用胰蛋白胨、酵母膏和蛋白胨等蛋白质物质,对糖的利用较差。该菌株所产蛋白酶在pH 10.0和35℃时表现最高酶活。

海洋弧菌碱性蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

采用硫酸铵沉淀、Sephadex- 75 ,Sephadex- 10 0凝胶过滤层析等方法纯化海洋弧菌 (Vibriop acini) X4 B- 7菌株产生的碱性蛋白酶 ,得到电泳纯酶制品 ,并对纯化酶的性质进行了研究。结果显示 :纯酶的分子量为 2 7KD,等电点 p I=8.7,最适反应 p H9.0～ 10 .5 ,最适反应温度 5 0～ 6 0℃。ED-TA对酶活力没有影响 ,高酶浓度可以降低 SDS对酶的抑制作用 ,该酶可用于解聚组蛋白。 DNA琼脂糖凝胶电泳证明 :酶对 DNA酶有降解作用 ,而对 DNA没有降解作用 。

产低温碱性蛋白酶海洋适冷菌SY的筛选

从连云港海域、港口、远洋捕捞船及鱼市等地采集的海水和各类海鱼、贝类等样品中分离到217株产蛋白酶的细菌,并从中得到1株产低温碱性蛋白酶的海洋适冷细菌—SY。研究表明,该菌株最适生长温度和最适产酶温度均在15℃左右,0℃下仍可生长;具有一定的耐盐性和嗜盐性,无盐条件不能生长,在3%的NaCl盐浓度时,生长达到最高峰;最适生长和最适产酶pH均为8.0;SY菌所产的蛋白酶可能为一种丝氨酸蛋白酶,酶最适作用温度为50℃,最适作用pH为9.0;酶的热稳定性差,50℃保温20min,酶活下降40%。

海洋细菌Pseudomonas sp.7-11产碱性蛋白酶的研究

本文研究了海洋细菌Pseudomonassp .7 11产碱性蛋白酶的发酵条件及调控机制 ,并对该蛋白酶进行了分离纯化 .实验结果显示 ,7- 11为好氧菌 ,具有某些嗜低温的特性 ,而且适宜在偏碱性的条件下生长并产酶 ;酪蛋白培养基适合该菌株产酶 ;K+对产酶起关键作用 ;复合氨基酸对产酶有抑制作用 .发酵液经盐析和离子交换层析等得到了两个活性峰 ,其中一个峰达到电泳纯 。

一株产低温碱性蛋白酶嗜冷海洋细菌YS-9412-130的分离和培养条件研究

自海水贝类中取样 ,经分离培养基和酪蛋白培养基复合培养 ,用检测蛋白酶产生水解圈和Folin-酚碱性蛋白酶活性测定相结合的方法从 10 0 0多份样品中初步筛到了产碱性蛋白酶活力高、性能优良的菌株 YS- 94 12 - 130。对其初步研究结果表明 ,该菌只能利用有机氮源生长 ;在接近自然海水盐度、温度 2 0℃、p H在 7.0～ 9.0条件下 。

产碱性蛋白酶的海洋适冷细菌CHS的初步研究

从连云港海域、港口、远洋捕捞船及鱼市等地采集的海水和各类海鱼、贝类等样品中分离得到一株产碱性蛋白酶的海洋适冷细菌CHS。研究表明,CHS最适生长温度和产酶温度均在15℃左右,0℃下仍可生长;具有一定的耐盐性和嗜盐性,无盐条件下不能生长,在质量分数为5%的NaCl中生长最好;最适生长pH为8.0,最适产酶pH为9.0。

海洋假单胞菌碱性蛋白酶的纤溶和溶栓作用研究

目的:为进一步确认海洋假单胞菌碱性蛋白酶(MPAP)的纤溶性质,并观察其抗栓作用。方法:通过体外试凝块实验,观察MPAP对纤维蛋白和纤维蛋白原的降解作用;建立家兔肺动脉血栓模型,观察MPAP的溶栓作用以及对组织型纤溶酶原激活剂(t—PA)和组织型纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI)纤溶功能的影响。结果:MPAP有直接降解纤维蛋白和纤维蛋白原的作用,而无纤溶激酶活性;MPAP能明显溶解肺动脉血栓,MPAP用药后t—PA/PAI明显升高。结论:MPAP具有明显的溶栓和提高纤溶系统活性的作用。

海洋假单胞菌碱性蛋白酶对实验性家兔股动脉血栓的溶解作用

目的研究海洋假单胞菌碱性蛋白酶(MPAP)对体内血栓的溶解作用及对凝血功能的影响。方法建立家兔股动脉血栓模型,股动脉造影观察用药后股动脉血栓的溶解情况,通过测定PT,TT,KPTT及Fbg含量,评估MPAP对家兔凝血和纤溶功能的影响。结果结果显示,MPAP能明显促进家兔股动脉血栓再通,用药后,TT,PT,KPTT显著延长,Fbg含量降低。结论MPAP对实验性家兔股动脉血栓有一定的溶解作用,并且有明显的抗凝功能。

海洋假单胞杆菌QD80低温碱性蛋白酶的化学修饰

海洋假单胞杆菌QD80低温碱性蛋白酶(QDAPr)具有良好的低温适应性,且与常见的增稠剂及表面活性剂有良好的配伍性.因此该蛋白酶在日用化学领域,尤其是低温洗涤领域,具有广泛的应用价值.为研究其结构与功能之间的关系,用EDC、PMSF、N-AI、2,3-丁二酮等8种化学修饰剂修饰该低温碱性蛋白酶,然后检测残余酶活力,借以研究酶分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系.结果表明,羧基、丝氨酸、ε-氨基、巯基等残基与酶活性无关;而色氨酸、组氨酸、酪氨酸残基侧链的化学修饰引起酶活性的大幅度下降,说明色氨酸、组氨酸、酪氨酸残基是酶活力所必需的基团.精氨酸残基侧链的化学修饰引起酶活性的轻微下降,说明精氨酸对酶活性具有一定贡献,但不处于活性中心.

海洋碱性蛋白酶性质研究及其在羊毛加工中的初步应用

文章对一种新型海洋碱性蛋白酶的部分性质及其简单应用做了初步的研究。实验结果表明:该蛋白酶的最适pH值为9,最适作用温度为50℃,在温度低于35℃时该酶可以较好地保持酶活性,在pH值6～10的区间内也可以保持良好的酶稳定性。该酶对金属离子的耐受能力较强,Cu2+对该酶活有激活作用,与常见的增稠剂及化学试剂配伍性良好。在处理羊毛方面,该蛋白酶可以较好的水解磷脂层,而对皮质层的损害比较轻微,表现出良好的处理羊毛特性及发展潜力。

海洋低温碱性蛋白酶的急性毒性研究

应用酶工程技术 ,得到在室温下有较高酶活力的海洋低温碱性蛋白酶。为对海洋低温碱性蛋白酶进行安全性评价 ,作者应用小鼠和大鼠急性毒性试验及最大耐受量 ( MTD)测定 ,观察海洋低温碱性蛋白酶对小鼠 1次口服后产生的急性毒性反应和大鼠完整皮肤短期内接触海洋低温碱性蛋白酶所产生的毒性反应。结果表明 ,小鼠 1次口服海洋低温碱性蛋白酶的 MTD>2 0 g/kg为实际无毒物 ,其中毒的靶器官是肝脏 ,未见大鼠经皮的急性毒性反应。

海洋低温碱性蛋白酶的刺激性研究

探究海洋低温碱性蛋白酶的刺激性 ,并为其应用提供实验依据。作者应用新西兰大耳白兔 ,以 4 0 %、2 0 %和 5‰浓度的海洋低温碱性蛋白酶进行皮肤急性刺激试验 ,5‰海洋低温碱性蛋白酶的皮肤多次刺激性试验 ,1‰的海洋低温碱性蛋白酶的兔角膜刺激性试验 ,评价其安全性。结果表明 ,5‰和 2 0 %海洋碱性蛋白酶单次应用实验皮肤未出现红斑和水肿 ,对皮肤无刺激性。 4 0 %海洋低温碱性蛋白酶液对皮肤有中度刺激性。皮肤病理学显示 5‰的海洋低温碱性蛋白酶液未见皮肤的慢性刺激反应 ,皮肤结构完整、层次清晰。

海洋低温碱性蛋白酶的皮肤变态反应研究

利用酶工程技术制得的海洋低温碱性蛋白酶 ,主要用于加酶的洗涤剂 ,在室温下有较高的酶活力。为确保海洋低温碱性蛋白酶使用的安全性 ,并为其应用提供实验依据 ,本文以豚鼠为受试动物 ,进行皮肤致敏反应试验。结果表明 ,经致敏接触和激发接触 ,2 ,4 -二硝基氯苯组 ( DNCB)皮肤最大平均反应值为 3.3,致敏率为 10 0 %。海洋低温碱性蛋白酶组皮肤最大平均反应值为 0 .0 5,致敏率为5%。

海洋假单胞菌碱性蛋白酶的纤溶及抗血栓形成作用

①目的 探讨海洋假单胞菌碱性蛋白酶 (MPAP)的纤溶作用及对血栓形成和血小板聚集功能的影响。②方法 通过纤维蛋白平板实验 ,观测MPAP的纤溶活性 ;建立大鼠颈动脉血栓形成模型 ,观察静脉应用MPAP后血栓形成时间及血小板最大聚集率的变化。③结果 MPAP具有较强的直接溶解纤维蛋白的作用 ;MPAP(1 0 0、2 0 0mg/kg体质量 )静脉用药后 ,血栓形成时间明显延长 (F =4 .72 ,q =3.78、4 .97,P <0 .0 5 ) ,血小板的最大聚集率显著降低 (F =4 0 .5 6 ,q =8.4 2、1 3.85 ,P <0 .0 5 )。

壳聚糖固定化海洋低温碱性蛋白酶YS-80-122的研究

以壳聚糖为固定化载体,采用吸附交联法,以戊二醛为交联剂,对海洋低温碱性蛋白酶YS-80-122进行固定化。通过单因素和正交试验优化得到最佳固定化条件为pH7·0,戊二醛终浓度0·2%,吸附时间50min,酶载体比例40mg/g,交联时间16h,交联温度10℃,固定化酶酶活回收可达47·52%。固定化酶和游离酶的最适作用温度均为30℃,最适作用pH分别为9·0和10·0,相比游离酶,固定化酶可在更宽的温度和pH范围内发挥高活性,且其温度和pH稳定性得到显著提高。室温下经冷冻干燥的固定化酶贮存90d后活性基本保持不变,贮藏半衰期约为190d。以酪蛋白为底物,重复使用7次后酶活仍保留有79·2%,操作半衰期约为21次使用率。

海洋低温碱性蛋白酶亚慢性毒理学研究

应用大鼠经口、经皮肤亚慢性毒性试验 ,对海洋低温碱性蛋白酶毒理学进行研究。 12 0只Wistar大鼠 ,随机分为 6组 :对照组 ,海洋低温碱性蛋白酶 1.2 g/ kg(经口 ) ,1.2 g/ kg、0 .135g/ kg、0 .0 15g/ kg(经皮 )和 1.2 g/ kg(经皮追踪组 ) ,用药周期 90 d,追踪组增加 2 8d观察。记录和检测大鼠的一般状况和体质量增长、脏器系数、血常规、凝血时间、肝肾功、部分血液生化和离子浓度及病理检查。结果表明 ,海洋低温碱性蛋白酶各组 (经皮、经口 )大鼠的各项指标与对照组比较均未见明显异常 ( P均 >0 .0 5) ,提示大鼠能耐受长期给予 1.2 g/ kg(经皮、经口 )

碱性蛋白酶水解海洋鱼鳞工艺改进

鱼鳞中含有丰富的蛋白质资源,如何充分利用该资源越来越受到关注.利用碱性蛋白酶水解海洋鱼鳞蛋白制备鱼鳞蛋白多肽.通过考察温度、时间、酶量、底物浓度等单一因素对水解鱼鳞蛋白的影响,确定并设计了L9(34)正交试验因素和水平,最终获得了碱性蛋白酶水解海洋鱼鳞蛋白优化工艺条件,即温度60℃,时间1.5h,酶量3%(质量分数),底物质量分数10%.在此条件下,酶解所得水解度为32.38%.与其他方法比较,该工艺条件下水解时间大大缩短.检测了该条件所得蛋白肽段的分子质量分布,结果表明酶解产物主要集中在1～6ku.由此可见,该优化条件适合规模化生产,所得蛋白肽可以满足食品、化妆品行业的需求.

一株海洋细菌产碱性蛋白酶的研究

对 1株产碱性蛋白酶的海洋细菌Pseudomonassp .7- 11发酵产生碱性蛋白酶的条件和酶的调控机制进行了初步研究。结果显示 ,7- 11为好氧菌 ,具有某些嗜低温特性 ,且适宜在偏碱性的条件下生长并产酶 ,该菌产生碱性蛋白酶表现出初级动力学特征 ;酪蛋白培养基适合菌株产酶 ;K+对于菌株产酶有关键作用 ;复合氨基酸对产酶有抑制作用 ;初步显示 ,7- 11产生蛋白酶受诱导及阻遏两种方向的调控。

海洋氧化短杆菌15E碱性蛋白酶的酶学性质

对氧化短杆菌15E菌株(Brevibacterium oxydans)所产的碱性蛋白酶酶学性质研究表明,15E菌株所分泌的碱性蛋白酶分子质量为49.0 ku、等电点为9.3.该酶的最适作用温度为60℃,最适pH值为7.0-9.0;Ca2+、Mg2+、K+对酶有激活作用.酶对一些变性剂如SDS、尿素、盐酸胍具有一定的耐受性;PMSF和AEBSF能抑制该蛋白酶,表明该酶属于丝氨酸蛋白酶;EDTA对该蛋白酶有抑制作用,说明该蛋白可能含有金属离子.