不同环境因子对海洋细菌Pseudoalteromonas issachenkoniiHZ引导糖基转移酶基因表达的影响

为了研究海洋细菌Pseudoalteromonas issachenkonii HZ所产多糖的生物合成基因簇,首先需要克隆到在多糖合成中起关键作用的引导糖基转移酶基因。通过设计引物,采用PCR技术从海洋细菌Pseudoalteromonas issachenkonii HZ成功克隆到该基因,并通过实时荧光定量PCR技术检测了温度、p H及海盐浓度对引导糖基转移酶基因表达量的影响。结果表明:低温有利于引导糖基转移酶的表达,随着温度的上升,引导糖基转移酶基因的表达量先增后减,在20 h时,引导糖基转移酶的表达量急剧上升,15℃和35℃引导糖基转移酶表达量分别是20℃表达量的5.2倍、5.8倍;海盐浓度为4.5%时引导糖基转移酶的表达量为海盐浓度3.5%的2.5倍,海盐浓度为5.5%时引导糖基转移酶的表达量为海盐浓度3.5%的2.0倍;10 h时p H为8、9的培养基中引导糖基转移酶的表达量分别为p H为7的1.64和1.67倍。该结果为探究菌体环境适应性机制提供了一定的基础。

一株产低温碱性蛋白酶海洋细菌Pseudoalteromonas flavipulchra HH407的筛选与生长特性

对从连云港海域筛选的一株产低温碱性蛋白酶的海洋适冷菌HH407进行的鉴定和生长特性研究结果表明,该菌为革兰氏阴性杆菌,好氧,端生鞭毛,无芽孢及荚膜,大小为0.4～0.7μm×1.0～1.8μm,在酪蛋白培养基的菌落特征为椭圆金黄色、光滑、半透明、四周隆起。根据其生理生化性质、16S rDNA同源性和系统进化树分析初步鉴定该菌属于Pseudoalteromonas flavipul- chra。该菌的生长温度范围为0～40℃,最适生长温度为20℃;pH范围为5.5～11.0,最适生长pH值为8.5;NaCl质量浓度范围为0.5～13 g/dL,最适生长NaCl质量浓度为4 g/dL,无NaCl时不能生长。该菌能较好利用胰蛋白胨、酵母膏和蛋白胨等蛋白质物质,对糖的利用较差。该菌株所产蛋白酶在pH 10.0和35℃时表现最高酶活。

海洋细菌Pseudoalteromonas sp．G23产低温淀粉酶发酵条件的研究

从江苏连云港海域筛选和分离到1株产低温淀粉酶的海洋细菌Pseudoalteromonas sp.G23,对该菌株进行了产α-淀粉酶发酵条件研究,结果表明,该菌株发酵16h后到达产酶高峰,最适产酶温度为15℃,最适产酶pH值为8.5,装液量为20%。可溶性淀粉、酵母膏和蛋白胨促进产酶。利用响应面方法对菌株Pseudoalteromonas sp.G23产α-淀粉酶的发酵条件进行了优化,结果表明,可溶性淀粉浓度为1.16%、蛋白胨浓度为2.11%,发酵温度12.38℃,酶活为41.4U/mL,较优化前提高了7倍。

海洋细菌Pseudoalteromonas issachenkonii产胞外多糖EPSPⅡ的发酵工艺优化

目的:本实验对一株产胞外多糖EPS-PⅡ的海洋细菌Pseudoalteromonas issachenkonii的发酵条件进行优化。方法:采用单因素实验,确定培养基组成,并采用Plackett-Burman联用Box-Behnken设计确定最佳发酵条件。结果:实验确定发酵培养基由葡萄糖,酵母浸膏和海盐组成,发酵条件为培养时间33.8 h,接种量8.8%,摇床转速170 r/min。结论:采用最优发酵条件得出EPS-PⅡ最高产量可达2.62 g/L,比优化前提高了116.5%。

北极海洋细菌Pseudoalteromonas sp.2018抑菌活性及其代谢产物研究

从2014年第六次中国北极科学考察采集的海洋沉积物中,分离获得了具有抑制农作物病原真菌活性的菌株Pseudoalteromonas sp.2018。测定了该菌株对病原真菌的抑制范围和对黄瓜白粉病的大棚防治效果,并对该菌株代谢产物通过硅胶色谱、凝胶色谱及半制备HPLC等进行分离纯化,通过质谱(MS)、氢谱(1 H NMR)和碳谱(13 C NMR)等进行结构鉴定。研究结果表明,Pseudoalteromonas sp.2018菌株对辣椒疫霉(Phytophthora capsici)、褐孢霉(Fulvia fulva)、链格孢(Alternaria alternata)、黄瓜专化型尖孢镰孢(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)、番茄专化型尖孢镰孢(Fusarium oxysporumf.sp.lycopersici)和细极链格孢(Alternaria tenuissima)等具有抑制作用,对大棚黄瓜白粉病的防治效果达66.7%;研究分离获得了环(脯-酪)二肽、环(脯-异亮)二肽、环(脯-亮)二肽和环(脯-苯丙)二肽,其中环(脯-酪)二肽和环(脯-亮)二肽对测试病原真菌的最小抑制浓度为125~500μg/mL。该研究为极地微生物农用资源的开发利用提供理论参考。

海洋细菌Pseudoalteromonas sp.NJ631中NRPS基因簇及核心模件的发掘

【目的】运用基因组信息发掘技术(Genome Mining)对海洋细菌Pseudoalteromonas sp.NJ631基因组中的非核糖体肽合成酶(Nonribosomal peptides synthetases,NRPSs)基因簇资源及其核心模件进行发掘分析,旨在为Pseudoalteromonas属中非核糖体肽(Nonribosomal peptides,NRPs)的发现提供理论依据和数据支持。【方法】依托第二代测序技术获得的Pseudoalteromonas sp.NJ631基因组序列草图,在分析其次生代谢产物编码基因的基础上,利用NRPS-PKS knowledgebase在线预测软件鉴定潜在的NRPSs基因簇,并对其基因组中的NRPSs核心模件腺苷酰化(Adenylation,A)结构域编码基因信息进行发掘。【结果】在NJ631基因组序列草图中发现3个典型结构组成的NRPSs基因簇,命名为NGC1、NGC2和NGC3,分别位于scaffold6,9和11。进一步的结构域预测分析表明,3个NRPSs基因簇均含有3个ORFs,其中NGC1编码7个NRPSs模块;NGC2和NGC3均编码6个NRPSs模块。对A结构域的信息发掘显示NJ631基因组中含有38个A结构域编码基因,特异性选择18种氨基酸底物。【结论】通过运用基因组信息发掘技术对海洋细菌Pseudoalteromonas sp.NJ631全基因组信息进行NRPSs基因簇及核心模件A结构域的发掘分析,结果提示,通常只在放线菌或真菌中发现的NRPSs基因资源也在Pseudoalteromonas属中大量存在。研究结果也为今后Pseudoalteromonas属中非核糖体肽(Nonribosomal peptides,NRPs)的发现提供理论依据。

中国南海海域海洋深层水细菌多样性

中国南海与作为海洋生物多样性中心的印太珊瑚大三角区具有一定的环境与生物连通性,其生境多样,为各种生物类群提供了有利的热带和亚热带海洋环境栖息地,具有极其丰富的生物多样性,是中国海洋生物多样性热点地区,也是重要的海洋生物多样性资源宝库。海洋细菌在生态系统循环中发挥重要作用,通过对南海海洋深层水细菌的探测,可以更加清晰地了解西太平洋和印太交汇区的生物多样性。研究基于参加开放项目获得的南海的深海站点水样,采用高通量测序进行了16S rRNA基因序列测序,分析了南海深海海水细菌群落多样性、菌群构成和多样性特征。该站点南海海洋深层水测定的细菌分属于15门、20纲、24目、86科、140属、150种,表明该区海洋深层水细菌群落丰富。测得优势菌属包括类芽胞杆菌属(Paenibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、海旋菌属(Thalassospira)、噬甲基菌属(Methylophaga)、拟杆菌属(Bacteroides)、纤细芽胞杆菌属(Gracilibacillus)、海洋芽胞杆菌属(Oceanobacillus)、海源菌属(Idiomarina)、嗜油菌属(Oleiphilus)、食碱菌属(Alcanivorax),这些属的细菌在生物材料或药物、生物燃料、水处理、降解石油烃等方面均有开发利用的潜力。属内的解淀粉芽孢杆菌(Lentibacillus amyloliquefaciens)、施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)、柴油食烷菌(Alcanivorax dieselolei)、三浦半岛盐乳杆菌(Halolactibacillus miurensis)、海迪茨氏菌(Dietzia maris)可以具体鉴定到种,这些深海细菌目前已在产抗生素、生物防治、石油降解、反硝化等方面被开发利用。基于高通量测序显示出采样点南海海洋深层水细菌具有独特菌群特征和多样性,有其极为丰富的生物学开发利用价值。

产蛋白酶海洋细菌Bacillus sp.4sp5分离鉴定及降解南极磷虾原肌球蛋白的研究

目的从海洋样品中筛选产蛋白酶海洋细菌及可以降解南极磷虾原肌球蛋白(tropomyosin,TM)的蛋白酶。方法采用透明圈法筛选产蛋白酶菌株,并根据聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)和酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)确定降解效果最佳菌株,对其产的蛋白酶的酶学特性及降解原肌球蛋白条件进行研究。结果最佳为菌株4sp5,经16SrDNA鉴定为Bacillus sp.。蛋白酶的最适作用温度和pH分别为60℃和9。Na^(+)和K^(+)对蛋白酶活有促进作用,其对有机溶剂敏感,表面活性剂对其影响较小。3种抑制剂均可抑制酶的活性。当加酶量为24U/mL时,7.0h能够有效地降解南极磷虾原肌球蛋白,经ELISA试剂盒测定,其致敏性消除率达98.63%。结论菌株4sp5及其产生的蛋白酶在南极磷虾原肌球蛋白脱敏作用中具有应用前景。

产细菌素海洋乳酸菌的筛选及细菌素抑菌机制

【目的】筛选海洋源产细菌素乳酸菌,探讨细菌素抑菌机制。【方法】从市售海鱼的肠道中筛选出一株对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠埃希菌(Escherichia coli)有较强抑菌效果的菌株GOFEL226,通过16S rDNA序列鉴定乳酸菌,用乙酸乙酯提取细菌素,利用分光光度法、电导率法、扫描电镜技术探究细菌素的抑菌机制。【结果】菌株GOFEL226为戊糖乳植物杆菌(Lactiplantibacillus pentosus),GFEB226细菌素对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的最小抑菌质量浓度为0.883 mg/mL;其对指示菌的生长有明显的抑制作用,可导致细胞的蛋白质、核苷酸、带电离子泄漏到细胞外,对细胞膜具有破坏作用。【结论】GFEB226细菌素可通过破坏革兰阳性和革兰阴性菌的细胞膜,使其胞内物质泄漏到胞外,进而导致细胞的死亡。

海洋鱼类细菌性疾病防治研究进展

简述了海洋鱼类主要的细菌性疾病及其危害,介绍了目前抗生素的应用以及耐药性和残留积累。指出,噬菌体治疗、疫苗接种、生物表面活性剂、抗菌肽和合成肽、益生菌、中草药以及精油等,在预防和治疗各种鱼类细菌性疾病方面极具优势。提出,应结合鱼的种类、致病的病原体、疾病的发展阶段、养殖设施的状况,探索出更好、更可持续的海产养殖细菌性鱼病防治技术,为人类提供更安全的食物和更安全的环境。

海洋红酵母、光合细菌和EM菌对锦鲤色素稳定性的影响研究

在水产养殖中,益生菌作为饲料添加剂既能促进鱼生长发育和新陈代谢,同时又能增加鱼体光亮度。海洋红酵母、光合细菌和EM菌具有丰富的营养和生物活性物质,同时含有天然色素——虾青素。本试验中,以锦鲤幼鱼为研究对象,采取拌料投喂方式,将海洋红酵母、光合细菌和EM菌应用于锦鲤的养殖试验中,旨在探析海洋红酵母、光合细菌和EM菌对锦鲤体色的影响。

海洋细菌的分子鉴定分类

从南海海底沉积物中分离到一批细菌,克隆了其中产抗菌活性物且培养形态多变的细菌ZS110的16SrDNA,通过测定和比较16SrDNA的部分序列,对ZS110进行了分子鉴定,结果表明它是一株适应了海洋环境的芽孢杆菌属(Bacillus)的枯草芽孢杆菌种(Bacillussubtilis).

南海海洋细菌Pseudomonas sp.产生的一种抗肿瘤蓝色素

Pseudomonassp.是从大亚湾表面海水分离到的一株新的海洋细菌,在改变培养条件之后,能产生不同的次级代谢产物。从该菌培养液的脂溶性部分分离得到一种蓝色素Blue-1,它的结构通过NMR,2D-NMR,FABMS,元素分析得到确定,与从陆生菌Chromobacteriumviolacewn(Bacillusvidaceus)中分离得到紫色杆菌素(violacein)的结构一致。抗肿瘤活性试验结果表明,Blue-1对肿瘤细胞生长有很强的抑制作用,对MCG803的IG50为4.6μg/mL,对BEL-7402的IC50为6.8μg/mL。

海洋沉积物中特有细菌类群的初步探讨

通过构建 16SrRNA基因文库对中国南海南沙海区沉积物中细菌多样性进行分析 ,并将获得的16SrRNA基因序列与国际基因数据库GenBank进行相似性比较及聚类分析 ,结果发现来自海洋沉积物的未能培养的微生物往往组成一簇 ,并与现已获培养并鉴定的微生物自然分开 ,这一现象表明 。

中国海域海洋细菌的分离与鉴定方法研究

目的探讨理想的海洋细菌增菌、分离与鉴定方法。方法海洋细菌经8种不同种类增菌液增菌后,选择11种不同种类的培养基进行分传,然后挑选单个菌落应用VITEK全自动微生物鉴定仪(VITEK-AMS)、API微生物鉴定系统和BIOMIC检测仪进行检测,用微量生化反应管进行手工补充鉴定。结果从中国四大海域采集的海水中共分离到72种411株细菌与真菌。弧菌为海水中的优势菌(177株,43.1%)。弧菌应首选碱性蛋白胨水和嗜盐菌增菌液进行增菌,然后用TCBS平板和血平板进行分传。其他细菌适合用2号营养肉汤增菌后再用血平板和中国蓝平板分离。真菌适合用真菌肉汤液增菌,用沙氏平板进行分传。对所分离的细菌采用VITEK-AMS、API系统和BIOMIC检测仪结合微量生化反应管进行手工补充鉴定,获得了良好的分离效果。结论对于海洋中不同种类的细菌与真菌,应选用不同种类的增菌液和培养基进行增菌与分离。采用VITEK-AMS、API系统、BIOMIC检测仪结合微量生化反应管进行手工补充鉴定,是较理想的海洋细菌检测方法。

海洋真菌与细菌发酵物中的环二肽

从红树林真菌 1 3 5 6菌株发酵液中分离到 4个环二肽 ,它们是环Pro Tyr,环Pro Ile,环Gly Phe和环Ala Phe。另从海洋细菌 1 1 0菌株发酵液中分离到 5个环二肽 ,它们是环Leu Ile,环Val Leu ,环Ala Val,环Ala Ile和环Ala Leu。这些环二肽多数是新发现的微生物产物。本文比较了新分离的环二肽与已经报道的环二肽在来源、结构、功能等方面的区别。

海洋细菌抑菌活性菌株的筛选

从不同海区的海洋底质、生物样、水样中分离到 480株海洋细菌 ,其中包括 1 50株芽孢细菌和 1 0 8株粪大肠杆菌 .利用纸片法对其抑菌活性进行检测 ,结果表明 :1 1 7株海洋细菌具有抑菌活性 ,占总分离菌株的 2 4.4% ;一般细菌、芽孢细菌、粪大肠杆菌的抑菌活性菌株分别占各供测菌株的 1 7.1 %、2 7.3 %、3 5.2 % ;抑菌活性菌株的比例与样品来源密切相关 ,且各类海洋细菌的抗菌谱有很大的不同 .

海洋源拮抗细菌对水稻纹枯病的防治

从连云港海域的海水和海泥中分离海洋细菌,以水稻纹枯病菌为指示菌对分离到的海洋细菌的抑菌活性进行检测,经过初筛、纯化、定量复筛,获得11株抑菌效果较好的海洋细菌。采用室内抑菌法测定了这11个活性菌株对8种植物病原真菌的抑制效果,结果表明,菌株MG-sm-3、PY-sw-1、PY-sw-9和Ns-sw-6的抑菌谱广且抑菌活性强。用硫酸铵沉淀法提取了这11个活性菌株的胞外粗蛋白,平板抑菌试验结果表明,菌株PY-sw-1的胞外粗蛋白对7种病原真菌的菌丝生长均有抑制效果,尤其对云薹链格孢(Alternaria brassicae)、灰梨孢(Pyriculariagrisea)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)有显著抑制作用。田间试验结果表明,菌株PY-sw-1及其胞外物质对水稻纹枯病的防治效果最好,喷施后7 d的防效分别为63.2%和53.9%。以上试验结果说明一些海洋源微生物对植物病害的防治具有一定的功效。

大亚湾海洋细菌Pseudomonas sp.中的红色素

海洋细菌Pseudomonassp .,采集于大亚湾 ,从该菌的菌体提取物分离得到 2个红色素 :灵菌红素A和新的衍生物二甲基灵菌红素B。它们的结构通过NMR ,LC_MS等确定 ,并得出灵菌红素是具有强烈抗微生物和细胞毒性的化合物 ,同时研究了它的培养条件。

海洋产灵菌红素细菌的基因分析与鉴定

报道了从大亚湾表面海水中分离到的１株海洋产灵菌红素细菌的分子鉴定结果．通过对该菌株１６ＳｒＲＮＡ基因的测定与分析，并与Ｇｅｎｂａｎｋ的数据进行比较，认为该菌属于假单胞菌属而不是色杆菌属．对于该菌株种的确定尚需进一步实验研究．