细菌海洋酶提取虹鳟鱼皮胶原蛋白的工艺研究

胶原蛋白是一种具有丰富营养价值和生物功能的结构蛋白质,广泛应用于食品、药品行业。本研究以单因素试验为基础,以虹鳟鱼皮胶原蛋白提取率为指标,采用正交试验对细菌海洋酶用量、酶解温度、酶解pH、酶解时间进行了优化,探讨了酶法提取虹鳟鱼皮胶原蛋白的新工艺。结果表明:细菌海洋酶M的提取率优于细菌海洋酶L;当酶剂量为1.2%、酶解时间80 min、酶解温度55℃、酶解pH 9时,虹鳟鱼皮胶原蛋白提取率最佳,为26.1%。以废弃虹鳟鱼皮作试验材料,可减少环境污染,节约资源,并提高水产品废弃物的附加值。

细菌海洋酶提取胶原蛋白的工艺优化

胶原蛋白是一种营养丰富应用广泛的功能蛋白。以单因素试验为基础,以鱼皮胶原蛋白提取率为指标,采用正交试验对酶用量、酶解温度、酶解pH、酶解时间进行优化,探讨了酶法提取黑鲽鱼皮胶原蛋白的新工艺。结果表明:细菌海洋酶的提取率优于其他蛋白酶;当酶剂量为1.0%、酶解时间120min、酶解温度55℃、pH9.0时,鱼皮的胶原蛋白提取率最佳,为26.1%。

YS-80-122海洋低温碱性蛋白酶的性质

碱性蛋白酶是一种最重要的工业用酶 ,广泛应用于洗涤、食品、皮革和丝绸行业。海洋低温碱性蛋白酶是一种应用我国海洋嗜极微生物黄海黄杆菌 (YS - 80 - 12 2 )代谢产物并通过现代生物工程手段开发出的一类新型酶。通过 6 0 0 0转 /分离心 (4℃ ) ,收集 (30 % - 6 5 % )硫酸铵沉淀 ,透析后等电聚焦制备分离 (12W) ,并经凝胶S - 2 0 0过滤 ,获得纯品经SDS -PAGE聚丙烯酰胺凝胶和C8HPLC图谱已达到电泳纯。其分子量为 4 9,32 0Dal,等电点为 8.5。建立酶活—温度—pH方程与模型 (r2 >0 .9) ,可求出其最适温度为 30℃ ,最适 pH为 9.5 ,低温 (T≤30℃ )和低 pH(pH≤ 8)对保持其稳定性有利。经试验该酶与大多数金属离子和增稠剂及表面活性剂适应性良好。Pb2 +、Ag+、Cu2 +对其有抑制作用 ,EDTA对其有强烈抑制作用。该酶性质与以往发现碱性蛋白酶性质不同 ,属于一种新型海洋酶。

一种新型海洋纤溶酶体外抗凝与溶栓作用研究

目的对本实验室制备的一种相对低分子质量新型海洋纤溶酶的体外抗凝和溶栓作用进行初步评价,为进一步的动物实验研究打下基础。方法以pH7.4的生理盐水作阴性对照,以蚓激酶作阳性对照,在体外研究新型海洋纤溶酶对Wistar大鼠和家兔新鲜血液的抗凝集和血栓溶解作用。结果该新型海洋动物纤溶酶具有显著的血栓溶解作用,并具有一定的抗凝血效果,从血栓中释放的血细胞形态较使用蚓激酶优。结论该新型海洋纤溶酶具有潜在的应用价值。

海洋溶菌酶高产菌株发酵条件探讨及培养基优化

对海洋溶菌酶高产菌株R-J-101液体发酵的主要影响因子进行了单因素实验探讨,确定了最佳培养条件:初始pH为7.5,温度为30℃,转速为200r/min,接种量为6%。采用二次回归正交设计法优化发酵培养基各组分的配比,结果表明,最优培养基组合为:玉米粉0.200%、蛋白胨0.773%、牛肉膏0.132%、NaCl 0.320%、MgSO40.759×10-5mol/L。实验验证优化结果,所得发酵液酶活力为2965U/mg,比未优化前提高了64%。

适冷海洋细菌交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)MB-1内切葡聚糖酶基因的克隆和表达

从黄海深海海底淤泥中筛选出一株产纤维素酶的适冷革兰氏阴性杆菌MB 1,克隆和分析了MB 1的 16SrDNA序列 (GenBank接受号 :AY5 5 132 1) ,经鉴定为交替假单胞菌 (Pseudoalteromonas) ,命名为Pseudoalteromonassp .MB 1。克隆了该菌适冷内切葡聚糖酶基因celA(GenBank接受号 :AY5 5 132 2 ) ,并在大肠杆菌 (Escherichiacoli)BL2 1中进行了表达。重组E .coli菌体破碎后 ,获取上清液 ,其中融合蛋白GST CelA浓度约为 78 5mg L。分析了融合酶GST CelA的性质 ,其最适反应温度为 35℃ ,最适反应pH值为 7 2 ,为中性适冷酶。

海洋溶菌酶膜的制备及质量控制

目的:制备海洋溶菌酶膜,并建立其质量控制方法。方法:以海洋溶菌酶为主药、羟丙基甲基纤维素为成膜材料制成膜剂,采用Folin-酚测定法和平板扩散法分别测定海洋溶菌酶的蛋白浓度和酶活性,以紫外分光光度法测定海洋溶菌酶膜中海洋溶菌酶的含量。结果:海洋溶菌酶的蛋白浓度和酶活性符合抑菌要求;样品平均回收率为101·0%(RSD=0·67%);样品放置6mo内各项指标均无明显变化。结论:本制剂制备工艺简单、质量可控,可为临床治疗阴道炎提供一种新型制剂。

海洋低温溶菌酶的急性毒性试验

①目的 对海洋杆菌产低温溶菌酶进行安全性评价。②方法 应用小鼠急性毒性试验 ,观察海洋低温溶菌酶对小鼠一次灌胃后和尾静脉注射后所产生的急性毒性反应。③结果 小鼠一次灌胃的最大耐受量为10 4 0 0 .0 0mg/kg体质量 ;小鼠一次尾静脉注射的LD50 为 4 5 30 .5 4mg/kg体质量 ,LD50 的 95 %可信限为 4 193.19～4 86 7.89mg/kg体质量 ,LD50 的 99%可信限为 4 0 88.2 4～ 4 972 .84mg/kg体质量。

海洋低温溶菌酶的体外抗菌活性

采用微量稀释法测定了海洋低温溶菌酶对临床分离致病菌的最低抑菌浓度 ,稀释法测定了最低杀菌浓度 ,同时测定了该酶的时间 杀菌曲线。结果表明 :溶菌酶对大肠杆菌、肺炎克雷白杆菌、痢疾杆菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌及金葡菌的抗菌活性相一致 ,对上述菌的杀菌活性也较强。时间杀菌曲线显示 ,海洋低温溶菌酶对金葡球菌及大肠杆菌的杀菌速度较快。结果提示 :海洋低温溶菌酶对临床分离的致病菌具有很强的抑菌和杀菌活性 。

海洋微生物溶菌酶的发酵优化与中试生产

以海洋细菌S-12-86为试验菌株,采用摇瓶发酵优化的方式,研究培养基组分(碳源、氮源、碳源与氮源的比例、金属离子)与发酵条件(培养温度、接种体积分数、装液体积分数、起始pH值、产酶周期)对海洋微生物溶菌酶产量的影响,并进行中试放大试验。结果表明:该菌产酶最佳培养基组分为:葡萄糖10 g/L,蛋白胨5 g/L,MgSO45 g/L,CaCl22 g/L;最适发酵培养温度为30℃,接种体积分数为4.0%,装液体积分数为10.0%,起始pH值为8.0,发酵周期24 h。海洋细菌S-12-86发酵优化后的产酶量(25636.8 U/mL)较优化前的产酶量(14454.4 U/mL)提高了75.4%。海洋微生物溶菌酶中试发酵的产酶量达26697.87 U/mL。说明摇瓶发酵优化条件可以应用于海洋微生物溶菌酶中试生产上。

海洋微生物溶菌酶体外抗菌抗病毒活性研究

【目的】初步研究海洋微生物溶菌酶S-12-86(MMLS)体外抑菌与抗病毒活性。【方法】采用最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度法(MBC)测定MMLS对部分模式菌的抑菌和杀菌作用;通过细胞病变抑制实验法(CPE),研究MMLS在猪肾细胞(PK-15)中对伪狂犬病毒(PRV)的抑制作用。【结果】MMLS对革兰氏阳性菌,革兰氏阴性菌及真菌均有抑菌作用,抑菌作用的浓度范围在0.25～4.00mg·ml-1之间,杀菌作用的浓度范围一般在0.25～8.00mg·ml-1之间。在电镜下,可见MMLS能够使大部分白色念珠球菌的细胞壁出现严重变形,细胞质出现不均匀,细菌胞质中的空腔增多。MMLS的TC50为100.0μg·ml-1,抑制伪狂犬病毒的半数有效浓度(EC50)为0.46μg·ml-1,治疗指数(TI)为217;在病毒感染后的0、2、4、6和8h添加MMLS,均有抑制伪狂犬病毒的作用。【结论】MMLS具有广谱的抑菌作用和抗伪狂犬病毒作用。

海洋生物酶添加剂在鱼用饲料中应用效果的评定

鱼用饲料添加剂品种繁多,效果各异.将海洋生物酶添加剂在鱼用饲料中的应用进行生物学综合试验与评定,其评定结果如下.

海洋微生物溶菌酶的纯化与性质研究

海洋微生物溶菌酶发酵上清液经超滤、CM_SepharoseFF阳离子交换层析和SephadexG_10 0凝胶过滤层析纯化得到电泳纯的溶菌酶,纯化倍数为34 7,活力回收为2 4 1%。对纯化溶菌酶性质研究表明,该酶分子量约为39kD ,对溶壁微球菌的最适作用温度为35℃,最适作用pH为8 0 ,在5 0℃以下和pH 5 0～10 0之间都有较好的稳定性,与常见金属离子和化学试剂有良好的配伍性,广谱杀菌,对多种致病菌也有较强的溶菌作用。

表面活性剂对海洋微生物溶菌酶活性的影响

以海洋微生物溶茵酶(MBL)为研究对象,分别检验几种表面剂对MBL活性的影响,着重研究烷基多苷(APG)对其活性的影响。结果表明,APG与阳离子烷基多苷(cAPG)分别提高MBL相对酶活性为21%,15%,SDS降低该酶活性约为15%,Tween 20和Tween 80对MBL活性的影响不明显。MBL含量大于5.0mg/mL时,对大肠杆菌、金黄色葡萄、白色念珠球茵有抑茵作用。0.5%～1.5%的APG无明显抑菌作用。将5.0 mg/m MBL与1.0 mg/mL APG复配后(简称CEP),发现APG能明显增强MBL抑菌作用,CEP具有较好地杀菌作用;CEP在54℃培养箱中放置14d后,其杀菌率保持不变,说明CEP的杀菌性能的稳定性良好。

海洋溶菌酶复合保鲜剂抑菌效果的研究

采用抑菌圈法测定海洋溶菌酶、茶多酚及山梨酸钾对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等菌株的最小抑菌浓度(MIC)并对其抑菌能力进行比较。实验结果表明,海洋溶菌酶可有效抑制多数水产腐败菌的生长,作为复配剂山梨酸钾、茶多酚也有各自的抑菌范围,三者最小抑菌浓度均在允许添加范围内。所以,海洋溶菌酶可以作为保鲜剂用于水产品保鲜。

基于改进KH-ANFIS 的海洋溶菌酶发酵过程软测量

针对海洋溶菌酶发酵过程菌体浓度在线检测难以实现,离线测量不能反映发酵过程当前变化等问题,提出了一种基于改进磷虾群—自适应模糊神经网络软测量(HLKH-ANFIS)建模方法;首先利用自适应莱维飞行策略对传统KH进行改进,从而提升算法的全局搜索能力;同时利用跳变技术(HOT)对KH算法位置更新公式进行改进,提高算法的局部寻优能力,然后利用改进的KH算法对自适应模糊神经网络反馈进行优化,改善其过度修正和计算量大的问题;最后建立基于HLKH-ANFIS的海洋溶菌酶发酵过程菌体浓度软测量预测模型,仿真分析表明:相较于KH-ANFIS预测模型,HLKH-ANFIS模型的误差较小,具有更好的预测能力,能够满足ML发酵关键参量的在线预测需要。

海洋低温溶菌酶对人脐静脉内皮细胞超微结构的影响

目的:观察海洋低温溶菌酶对体外培养的人脐静脉内皮细胞超微结构的影响,探讨海洋低温溶菌酶抗肿瘤血管形成的机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度的海洋低温溶菌酶处理24h后,利用透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:海洋低温溶菌酶处理后人脐静脉内皮细胞出现超微结构变化,包括核内染色质浓缩及边集,胞质内细胞器肿胀和空泡化,呈现典型的细胞凋亡改变。这种改变呈剂量依赖性。结论:海洋低温溶菌酶可引起人脐静脉内皮细胞损伤,导致细胞凋亡,从而可能诱发其抗肿瘤血管生成的作用。

海洋溶菌酶膜对大鼠细菌性阴道炎作用的试验研究

目的通过大鼠阴道混合感染金葡菌和大肠埃希氏菌的动物模型,观察海洋溶菌酶膜对大鼠阴道分泌物的细菌转阴率和阴道粘膜炎症的治愈程度。方法采用大鼠阴道金葡菌、大肠埃希氏菌混合感染模型实验、家兔阴道刺激实验,观察药物的作用。结果及结论海洋溶菌酶膜对金葡菌和大肠埃希氏菌混合引起的细菌性阴道炎有明显的治疗作用,但有一定的量-效依赖性。

海洋溶菌酶酶学性质及其在化妆品中的抑菌效果

考察了海洋溶菌酶的物理和化学特性、防腐效果及其与常规护肤化妆品主要原料、表面活性剂的配伍性。结果表明:该酶对溶壁微球菌的最适作用温度为35℃,较适作用pH为8,在45℃以下、pH4～10内均具有良好的稳定性,同时对低温有突出的适应性。受日化产品中常见金属离子影响小,与护肤化妆品中常规成分配伍性良好,且广谱杀菌,对18株受试菌株均有抑制作用,防腐效果达到国内外化妆品防腐标准。