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微小RNA-221/222海绵体载体的构建及验证
被引量:
1
1
作者
周李杰
赵玮
+3 位作者
江方方
刘子锋
欧阳颖
余东升
《中华口腔医学研究杂志(电子版)》
CAS
2015年第2期13-17,共5页
目的构建微小RNA(mi R)-221/222海绵体载体并初步探讨其在口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中的作用。方法利用mi RNA海绵体技术设计合成含3个has-mi R-221和3个hasmi R-222反义序列的DNA片段,经酶切连入p DC316-m CMV-EGFP质粒载体,合成mi R-2...
目的构建微小RNA(mi R)-221/222海绵体载体并初步探讨其在口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中的作用。方法利用mi RNA海绵体技术设计合成含3个has-mi R-221和3个hasmi R-222反义序列的DNA片段,经酶切连入p DC316-m CMV-EGFP质粒载体,合成mi R-221/222海绵体载体。将mi R-221/222海绵体载体转染入OSCC细胞系UM1,检测转染效率,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测mi R-221和mi R-222表达水平,Western blot检测转染后PTEN蛋白表达水平,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果成功构建mi R-221/222海绵体载体,测序验证与设计序列完全一致;UM1各组细胞转染效率均在70%以上;实时荧光定量PCR显示,mi R-221/222海绵体载体组mi R-221和mi R-222表达水平较p DC316质粒组和UM1细胞组明显降低(t1=111.69,P1=0.001;t2=6.98,P2=0.002;t3=236.55,P3=0.001;t4=22.06,P4=0.001);Western blot显示,海绵体转染组较对照组PTEN蛋白水平表达明显升高;Transwell实验显示,海绵体转染组细胞侵袭能力较对照组减弱。结论实验成功构建了mi R-221/222海绵体载体,并初步验证其对OSCC细胞侵袭性的抑制作用,为后续mi R-221/222的功能研究奠定基础。
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关键词
微小RNA
海绵体载体
第10号染色
体
缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因
癌
鳞状细胞
原文传递
hsa-miR-26b沉默载体的构建及验证
2
作者
史春梅
徐广峰
+6 位作者
宋桂仙
季晨博
陈玲
杨蕾
庞玲霞
赵亚萍
郭锡熔
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期503-506,共4页
目的构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果。方法用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共...
目的构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果。方法用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24 h后收集细胞RNA,用real-time PCR检测hsa-miR-26b表达水平,同时用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用。结果成功构建了有效的hsa-miR-26b沉默载体,经测序验证与设计序列一致;real-time PCR验证hsa-miR-26b表达水平降低了75%;双荧光素报告系统验证其对靶基因无抑制作用(P>0.05)。结论成功构建hsa-miR-26b沉默载体,并验证其对靶基因PTEN无抑制作用。
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关键词
hsa-miR-26b
海绵体载体
双荧光素报告系统
人脂肪细胞
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职称材料
题名
微小RNA-221/222海绵体载体的构建及验证
被引量:
1
1
作者
周李杰
赵玮
江方方
刘子锋
欧阳颖
余东升
机构
中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院
出处
《中华口腔医学研究杂志(电子版)》
CAS
2015年第2期13-17,共5页
基金
国家自然科学基金(81272554
81472526)
+3 种基金
广东省自然科学基金(9151008901000187
S2011020003247)
广东省科技计划国际合作项目(2011B050400030
2012B031800387)
文摘
目的构建微小RNA(mi R)-221/222海绵体载体并初步探讨其在口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中的作用。方法利用mi RNA海绵体技术设计合成含3个has-mi R-221和3个hasmi R-222反义序列的DNA片段,经酶切连入p DC316-m CMV-EGFP质粒载体,合成mi R-221/222海绵体载体。将mi R-221/222海绵体载体转染入OSCC细胞系UM1,检测转染效率,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测mi R-221和mi R-222表达水平,Western blot检测转染后PTEN蛋白表达水平,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果成功构建mi R-221/222海绵体载体,测序验证与设计序列完全一致;UM1各组细胞转染效率均在70%以上;实时荧光定量PCR显示,mi R-221/222海绵体载体组mi R-221和mi R-222表达水平较p DC316质粒组和UM1细胞组明显降低(t1=111.69,P1=0.001;t2=6.98,P2=0.002;t3=236.55,P3=0.001;t4=22.06,P4=0.001);Western blot显示,海绵体转染组较对照组PTEN蛋白水平表达明显升高;Transwell实验显示,海绵体转染组细胞侵袭能力较对照组减弱。结论实验成功构建了mi R-221/222海绵体载体,并初步验证其对OSCC细胞侵袭性的抑制作用,为后续mi R-221/222的功能研究奠定基础。
关键词
微小RNA
海绵体载体
第10号染色
体
缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因
癌
鳞状细胞
Keywords
MicroRNA
Sponge vector
Phosphatase and tension homolog deleted onchromosome 10
Carcinoma, squamous cell
分类号
R739.8 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
hsa-miR-26b沉默载体的构建及验证
2
作者
史春梅
徐广峰
宋桂仙
季晨博
陈玲
杨蕾
庞玲霞
赵亚萍
郭锡熔
机构
南京医科大学附属南京妇幼保健院儿童保健科
南京医科大学儿科研究所
中国人民解放军第
南京医科大学第一附属医院心脏病科
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期503-506,共4页
基金
国家重点基础研究发展计划(2013CB530604)
国家自然科学基金(81170797)
+5 种基金
江苏省自然科学基金(BK2011107)
江苏省医学创新团队项目(LJ201108)
南京市科技发展计划(201104013)
江苏省研究生培养创新工程(CXLX12_0559)
蚌埠医学院科研课题项目(Byky1262NF)
南京军区医学科技创新课题项目(12MA025)
文摘
目的构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果。方法用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24 h后收集细胞RNA,用real-time PCR检测hsa-miR-26b表达水平,同时用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用。结果成功构建了有效的hsa-miR-26b沉默载体,经测序验证与设计序列一致;real-time PCR验证hsa-miR-26b表达水平降低了75%;双荧光素报告系统验证其对靶基因无抑制作用(P>0.05)。结论成功构建hsa-miR-26b沉默载体,并验证其对靶基因PTEN无抑制作用。
关键词
hsa-miR-26b
海绵体载体
双荧光素报告系统
人脂肪细胞
Keywords
has-miR-26b
sponge vector
dual-Luciferase reporter assay system
human adipocyte
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
微小RNA-221/222海绵体载体的构建及验证
周李杰
赵玮
江方方
刘子锋
欧阳颖
余东升
《中华口腔医学研究杂志(电子版)》
CAS
2015
1
原文传递
2
hsa-miR-26b沉默载体的构建及验证
史春梅
徐广峰
宋桂仙
季晨博
陈玲
杨蕾
庞玲霞
赵亚萍
郭锡熔
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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