甘蔗根癌农杆菌介导转化海藻糖合酶基因获得抗渗透胁迫能力增强植株

由双拷贝CaMV35S启动子驱动担子菌灰树花 (Grifolafrondosa)的海藻糖合酶基因 (TSase)构建植物表达载体 pBBBT ,通过三亲交配法将 pBBBT导入根癌农杆菌EHA10 5菌株 ,经根癌农杆菌介导转化甘蔗 (Saccha rumhybrid)栽培品种 ,以增强甘蔗的抗旱能力。结果表明 ,甘蔗胚性愈伤组织对EHA10 5菌株敏感 ,甘蔗外植体开始大量形成胚性愈伤组织时是感染的适宜时期 ,用膦丝菌素 (PPT)筛选 ,抗性植株发生频率平均为 4 .5 %。经PCR及dot Southern检测证明 ,TSase已经整合到甘蔗基因组中。部分转化植株根叶畸形、株型异常、生长缓慢。移栽到含PEG80 0 0 17.4 % (w/v)的MS培养基后 。

海藻糖合酶基因转化黑麦草及耐旱性研究

以多年生黑麦草(Lolium perenne L.)种子成熟胚为外植体,在MS附加5mg/L2,4-D、500mg/L的L-脯氨酸、130mg/L天门冬酰氨、10mg/LAgNO3的诱导培养基(MSJ)上诱导胚性愈伤组织。用基因枪法将ubiqutin启动子驱动的海藻糖合酶基因(TPS基因)转入多年生黑麦草的胚性愈伤。在含有5mg/LBialaphos的选择培养基上经过2个月的抗性筛选,抗性愈伤组织在分化培养基上生成了898株再生植株,其中的220株检测为阳性株,检测的阳性率占供检株数的24.5%。PCR分析及PCR-Southern杂交鉴定表明,TPS基因已整合到黑麦草的基因组中。抗旱性鉴定表明,转基因黑麦草在干旱胁迫条件下的保水能力增强,电解质渗出率明显低于对照,耐旱性提高。

转海藻糖合酶基因玉米株系的获得及其抗旱性研究

采用农杆菌介导玉米萌发种子转化方法,将海藻糖合酶基因(TPS)导入玉米自交系昌7-2中。PCR和Southern blot检测结果表明,目的基因已导入转化植株并整合到受体基因组上。田间抗旱性鉴定和生理生化指标结果显示,转基因植株(株系)的抗旱性明显高于对照。说明海藻糖合酶基因具有抗旱功能,利用植物基因工程技术对其进行玉米抗旱育种是切实可行的。

萌发期和苗期玉米转海藻糖合酶基因的抗旱性研究

在PEG溶液模拟干旱条件下,研究了不同玉米品种(2个转基因品系和各自受体对照)发芽率、伤害率、芽根比、叶片含水量、叶片SOD活性、POD活性和MDA含量,并对其在种子盒、花盆和田间的耐旱性进行了比较。结果表明,萌发期与苗期抗旱性表现基本一致,2个转基因品系(T09100-3和H5T37)分别比各自受体(综31和178)耐旱性高。

麦芽寡糖基海藻糖合酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

应用PCR方法,从芝田硫化叶菌B12中扩增了麦芽寡糖基海藻糖合酶基因(TreY),扩增产物大小为2.2kb,将扩增片段与pUCm-T连接,得到重组质粒pUCm-T-TreY,CaCl2法转化DH5α,并筛选阳性克隆。用BamHI/NdeI分别双酶切pUCm-T-TreY和表达载体pET21a,连接后得重组pET21a-TreY,转化大肠杆菌DE3并进行了表达。表达产物经SDS-PAGE分析,得到一条分子量约为74kDa的特异条带,同核苷酸序列所推导的值相符。

海藻糖合酶基因的克隆及转化甘蔗的研究

中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室从担子菌灰树花的菌丝体中提取总RNA，并纯化出mRNA，经RT-PCR扩增得到一长约2．2kb的片段，经测序，其全长2199bp，包括起始密码和终止密码；随后将该片段插入植物表达载体pBll21的35S启动子和NOS终止子之间，构建了一植物表达载体（pBT），又将此片段加上ubi-L启动子和NOS终止子构建了另一植物表达载体（pUBT），然后通过基因枪法分别用植物表达载体pBT和pUBT转化甘蔗，再生植株的点杂交和PCR-Southern杂交证明海藻糖合酶基因已整合进甘蔗的基因组中。

海藻糖的应用及其合酶基因TPS在植物转基因中的研究进展

海藻糖是一种非还原性双糖,具有很高的稳定性和很强的吸水性等性质,能够提高生物体对各种非生物胁迫的抵抗能力。目前有很多研究表明通过转化海藻糖合酶基因增加体内海藻糖含量可能成为选育作物抗逆品种的新方法。该文对海藻糖的理化性质、生物学特性及其应用情况作了简要的概述,并介绍了编码酵母海藻糖合酶复合体基因的组成以及各个组成基因的功能,着重阐述了海藻糖合酶基因在植物转基因方面(尤其在提高植物抗逆性)的研究进展。

大肠杆菌海藻糖磷酸合酶基因的克隆

根据报道的大肠杆菌 (Escherichia coli)海藻糖 6磷酸合酶基因 (ots A) ,设计引物 ,通过 PCR技术从大肠杆菌 XLI菌株的总 DNA中扩增到一个 1 .4kb的片段。经克隆、测序分析 ,该片段长 1 42 5 bp并含一完整的开放读框 (ORF)。在核苷酸水平上 ,该 ORF与已报道的 ots A基因具有 99.86%的同源性。在氨基酸水平上 ,其推断性的编码产物蛋白与 Ots A具有 1 0 0

海藻糖合成酶基因(TPS)的研究进展

概述海藻糖合酶基因和海藻糖的理化性质、海藻糖的生物学功能、发展前景和海藻糖合酶基因在转基因中的应用。通过讨论几个转化此基因的实例,探讨转基因植物体内海藻糖的积累和植株形态改变之间的关系以及抗逆性状的改良,展望海藻糖合酶基因的研究趋势。

用花粉管通道法将抗旱耐盐基因导入玉米自交系的研究

采用改进的花粉管通道法,将海藻糖合酶基因(TPS)导入玉米自交系郑58中。3～5叶期时喷雾Basta(0.7%)溶液筛选,进行PCR检测,结果表明,目的基因已导入转化植株并整合到植株染色体上。田间初步抗旱性检测显示,转化植株(株系)的抗旱性高于对照植株。应用改进的花粉管通道法导入抗旱目的基因,可以得到玉米抗旱新资源,是一种切实有效的抗旱育种新方法。

基因枪介导甘蔗遗传转化研究初报

将从灰树花（Ｇｒｉｆｏｌａ ｆｒｏｎｄｏｓａ）中分离克隆到的海藻糖合酶ｃＤＮＡ以正向插入植物表达载体ｐＢＩ１２１／ＢａｍＨＩ＋Ｓｓｔ１位点，获得一植物表达载体ｐＢＴ：又用Ｕｂｉ－Ｌ启动子插入植物表达载体ｐＢＩ１２１／ＨｉｎｄⅢ＋Ｘｂａｌ位点，获得重组质粒ｐＵＢ，再把海藻糖合酶ｃＤＮＡ正向插入ｐＵＢ／ＢａｍＨＩ＋ＳｓｔＩ位点，获得另一植物表达载体ｐＵＢＴ。然后通过基因枪法分别用植物表达载体ｐＢＴ和ｐＵＢＴ转化甘蔗。再生植株的点杂交和ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明海藻糖合酶基因已整合进甘蔗的基因组中。

农杆菌介导佛手遗传转化主要影响因素的研究

采用根癌农杆菌介导的佛手叶盘转化法,在建立转海藻糖合酶基因(TPS)佛手体系过程中,对影响农杆菌转化频率的各种因素进行了研究。结果表明,佛手叶盘需在黑暗条件下MT培养基上预培养2-3d,与农杆菌共培养3d较合适;农杆菌菌液浓度OD600约为0.6-0.8,感染时间20min;抑制农杆菌生长的抗生素浓度以头孢霉素(Cef)250mgL-1和羧苄青霉素(Cb)250mgL-1且延迟筛选时间4d最好;共培养基中添加100μmol/L乙酰丁香酮(AS)和400mgL-1半胱氨酸(L-Cys)对佛手遗传转化有明显的促进作用。经GUS报告基因和PCR技术检测,初步证实TPS基因已整合到佛手基因组中,且GUS报告基因瞬时表达率为5.9%。

生命科学之星 北京大学 生命科学学院 林忠平实验室(AgMoBiol)研究成果

提高植物对逆境胁迫的抗性 培育抗旱、抗寒的草坪草（Improvement of turfgrass resistance to drought and cold）从厚叶旋蒴苣苔、沙蒿等几种极端环境下生长的植物中分离耐旱、耐寒相关的基因。包括上游的transcriptional factorgene和下游的基因（in protectional system），在研究其功能的基础上，构建了适于在单子叶中表达的载体。通过农杆菌的介导或以基因枪法将其导入草坪草，并表现出良好的抗旱性。 有的基因是依据文献资料克隆的（专利即将过期），如海藻糖合酶基因（tps）和异戊烯基转移酶基因（ipt）效果也很好。