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木薯海藻糖-6-磷酸酯酶MeTPP6基因克隆及其表达分析 被引量:4
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作者 丁泽红 吴春来 +2 位作者 颜彦 付莉莉 胡伟 《江苏农业科学》 2019年第6期31-35,共5页
海藻糖-6-磷酸酯酶(TPP)负责海藻糖生物合成催化反应的最后一步,是植物海藻糖生物合成途径的关键酶。采用RT-PCR的方法从木薯叶片中克隆了1个TPP基因,命名为MeTPP6,该基因含有1个1 122 bp的开放阅读框,编码373个氨基酸,具有TPP家族保守... 海藻糖-6-磷酸酯酶(TPP)负责海藻糖生物合成催化反应的最后一步,是植物海藻糖生物合成途径的关键酶。采用RT-PCR的方法从木薯叶片中克隆了1个TPP基因,命名为MeTPP6,该基因含有1个1 122 bp的开放阅读框,编码373个氨基酸,具有TPP家族保守结构域。系统进化树分析表明,MeTPP6与杞柳和杨树中同源基因的亲缘关系较近,序列相似性高达89.7%和89.0%。启动子分析表明,MeTPP6含有干旱、低温、热胁迫、激素(如ABA)和光响应等相关元件。荧光定量PCR分析表明,MeTPP6在叶片和叶柄中表达量最低;在须根和储藏根中表达量最高,分别为叶片表达量的4.2倍和4.5倍。而且,MeTPP6基因的表达能被干旱、低温和ABA处理显著诱导。这些结果表明,MeTPP6通过依赖于ABA的信号通路在转录水平参与木薯干旱和低温胁迫,可作为重要候选基因进一步研究其在木薯非生物逆境中的功能。 展开更多
关键词 海藻糖-6-磷酸酯酶 MeTPP6基因 干旱 低温 表达分析
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杨树桑黄6-磷酸海藻糖合成酶基因克隆鉴定与表达分析
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作者 徐丛涛 李子豪 +5 位作者 潘晋龙 李海康 胡清秀 邹亚杰 陈晓华 弥春霞 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2024年第1期45-52,共8页
对杨树桑黄(Sanghuangporus vaninii)6-磷酸海藻糖合成酶基因(SvTPS)进行克隆和生物信息学分析,并进行原核表达;采用荧光定量PCR方法研究SvTPS在杨树桑黄菌丝体和不同年份子实体中的表达情况,测定菌丝体和不同年份子实体中SvTPS活性。... 对杨树桑黄(Sanghuangporus vaninii)6-磷酸海藻糖合成酶基因(SvTPS)进行克隆和生物信息学分析,并进行原核表达;采用荧光定量PCR方法研究SvTPS在杨树桑黄菌丝体和不同年份子实体中的表达情况,测定菌丝体和不同年份子实体中SvTPS活性。结果表明:SvTPS DNA序列长度为1894 bp,编码576个氨基酸。SvTPS相对分子质量为65130,等电点为6.21,脂肪系数为88.14,平均亲水系数为-0.281,不稳定系数为42.41。SvTPS氨基酸序列与暴马桑黄(S.baumii)的相似性最高,仅有一个TPS单结构域;SvTPS二级结构中α-螺旋、β-折叠、延伸链、无规卷曲占比分别为48.61%、5.56%、15.62%、30.21%。三年生子实体SvTPS的表达量最高,菌丝体的表达量最低。菌丝体的SvTPS活性最低;随着栽培时间增加,SvTPS活性增加,三年生子实体的最高。研究结果为进一步探讨SvTPS在杨树桑黄生长发育过程中的功能提供参考。 展开更多
关键词 杨树桑黄 6-磷酸海藻合成酶 基因克隆 蛋白表达
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二色补血草海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶基因的克隆及分析 被引量:2
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作者 马辉 刘桂丰 +2 位作者 徐晨曦 王玉成 杨传平 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1-3,7,共4页
以二色补血草叶片组织为材料构建了cDNA文库,文库的初始滴度为2.0×106pfu,重组率为95%,平均插入片段为0.8 kb,扩增后文库的滴度为4.0×109pfu.mL-1。通过随机测序从文库中获得的海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶(trehalose-6-phosphate p... 以二色补血草叶片组织为材料构建了cDNA文库,文库的初始滴度为2.0×106pfu,重组率为95%,平均插入片段为0.8 kb,扩增后文库的滴度为4.0×109pfu.mL-1。通过随机测序从文库中获得的海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶(trehalose-6-phosphate phosphatase,TPP)基因的全长cDNA序列,该序列长1 986 bp,其中5’非翻译区163 bp,3’非翻译区680 bp,开放读码框长1 143 bp,编码380个氨基酸,蛋白分子质量为42KD,理论等电点为6.68。海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶在海藻糖合成过程中起关键作用,该基因的克隆为研究海藻糖在二色补血草中的合成奠定了基础。 展开更多
关键词 二色补血草 CDNA文库 海藻-6-磷酸磷酸酯酶
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circLRP6调节miR-31-5p/HMGA1轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响
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作者 许峥嵘 任卫东 +3 位作者 谷君 张志英 邓文娟 左丽娟 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期246-251,共6页
目的分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-ci... 目的分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组,对照组置于含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,其余各组置于含25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,并通过Lipofectamine 2000将相应质粒转染至HK-2细胞内,实时定量PCR测定细胞circLRP6、miR-31-5p、HMGA1 mRNA水平,试剂盒测定细胞上清液白细胞介素-6(IL-6)水平、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪观察细胞凋亡;Western blotting测定细胞HMGA1、Bax、Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验分析miR-31-5p与circLRP6、HMGA1的靶向关系。结果与对照组相比,高糖组HK-2细胞circLRP6水平升高,细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+si-circLRP6组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05)。miR-31-5p与circLRP6、HMGA1均具有靶向关系。结论沉默circLRP6可能通过上调miR-31-5p,抑制HMGA1表达,对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。 展开更多
关键词 肾小管 circLRP6 miR-31-5p 高迁移率族蛋白A1
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植物海藻糖-6-磷酸合成酶基因研究进展 被引量:1
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作者 杜姣林 蔺新兰 +3 位作者 马豫皖 陈己任 陈海霞 李玉帆 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期411-420,共10页
海藻糖-6-磷酸代谢通路是植物响应非生物胁迫生理调控网络中的重要组成部分,海藻糖-6-磷酸合成酶基因TPS(Trehalose-6-phosphate synthase)是植物合成海藻糖的关键基因。为了更加充分地理解TPS基因在植物应答非生物胁迫、调节开花时间... 海藻糖-6-磷酸代谢通路是植物响应非生物胁迫生理调控网络中的重要组成部分,海藻糖-6-磷酸合成酶基因TPS(Trehalose-6-phosphate synthase)是植物合成海藻糖的关键基因。为了更加充分地理解TPS基因在植物应答非生物胁迫、调节开花时间等方面的作用,本文首先对植物TPS基因家族成员的系统进化关系及序列结构信息进行了研究,重点论述了TPS基因在植物响应干旱、盐害、高温、低温胁迫中的调控功能及分子作用机制,最后对TPS基因参与植物开花调控的研究进展进行了综述。本文深入总结了目前植物TPS基因响应非生物胁迫及开花调控的研究进展,并对今后TPS同源基因的研究方向和应用价值进行了展望。 展开更多
关键词 海藻-6-磷酸合成酶基因 非生物胁迫 开花调控
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辣椒海藻糖-6-磷酸合酶基因CaTPS9的克隆及表达分析 被引量:1
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作者 黄立娟 魏敏 +3 位作者 苟秉调 段盼盼 郭娜纳 魏兵强 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期800-808,共9页
【目的】明确辣椒中海藻糖-6-磷酸合酶(TPS)基因CaTPS9的表达特性和生物学功能,进一步了解TPS对辣椒生长中调控非生物胁迫的作用。【方法】以辣椒品种强丰101为试验材料,克隆CaTPS9基因,并对辣椒CaTPS9的理化性质、蛋白结构、顺式作用... 【目的】明确辣椒中海藻糖-6-磷酸合酶(TPS)基因CaTPS9的表达特性和生物学功能,进一步了解TPS对辣椒生长中调控非生物胁迫的作用。【方法】以辣椒品种强丰101为试验材料,克隆CaTPS9基因,并对辣椒CaTPS9的理化性质、蛋白结构、顺式作用元件、系统进化树等进行分析;通过qRT-PCR分析CaTPS9基因在不同组织(商品果果肉、幼果果肉、成熟果果肉、商品果胎座、幼果胎座、成熟果胎座、叶、根、茎、花)和胁迫处理(低温和植物生长调节剂处理)中的表达模式。【结果】CaTPS9基因CDS序列全长2604 bp,编码867个氨基酸。CaTPS9蛋白包含Glyco_transf_20和Trehalose_PPase两个保守结构域,分子质量为97.60 kDa,不稳定指数为44.27,理论等电点为5.63,亚细胞定位预测CaTPS9蛋白位于细胞质中。生物信息学分析表明,CaTPS9蛋白属于亲水性蛋白,且不存在跨膜结构和信号肽序列,蛋白结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成。系统进化关系分析表明,CaTPS9与烟草(Nicotiana tabacum L.)、番茄(Solanum lycopersicum L.)和马铃薯(Solanum tuberosum L.)中的同源基因亲缘关系较近。启动子顺式作用元件分析表明,CaTPS9启动子区域含有与激素、胁迫及植物生长发育相关的顺式作用元件。此外,CaTPS9在叶片中表达量最高,在商品果胎座中表达量最低。在水杨酸(Salicylic acid,SA)处理12 h后CaTPS9基因的表达量被显著提升,而低温、吲哚乙酸(3-indoleacetic acid,IAA)、脱落酸(Abscisic acid,ABA)、赤霉素(Gibberellinacid,GA3)和茉莉酸甲酯(Methyljasmonate,MeJA)处理能够显著抑制CaTPS9基因表达量。【结论】CaTPS9基因可能通过海藻糖生物合成途径响应逆境胁迫。 展开更多
关键词 辣椒 海藻-6-磷酸合酶 生物信息学 非生物胁迫 表达分析
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穿心莲海藻糖-6-磷酸合酶1(ApTPS1)生物信息学与表达分析
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作者 黄雪静 简少芬 +3 位作者 刘爱佳 雷明 钟楚 缪剑华 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期960-970,共11页
以穿心莲(Andrographis paniculata)为材料,基于全长转录组数据,筛选和克隆穿心莲海藻糖-6-磷酸合酶1基因(命名为ApTPS1)。生物信息学分析显示,ApTPS1基因的开放阅读框长度为2787 bp,编码928个氨基酸,分子质量为105178.82 u,理论等电点... 以穿心莲(Andrographis paniculata)为材料,基于全长转录组数据,筛选和克隆穿心莲海藻糖-6-磷酸合酶1基因(命名为ApTPS1)。生物信息学分析显示,ApTPS1基因的开放阅读框长度为2787 bp,编码928个氨基酸,分子质量为105178.82 u,理论等电点为6.67,为亲水蛋白,无信号肽。多重序列比对显示,ApTPS1较为保守,系统进化树分析表明该蛋白与凤梨亲缘关系最近,与拟南芥和烟草亲缘关系相对较远。利用实时荧光定量PCR分析穿心莲不同生态型、不同器官以及不同光周期条件下ApTPS1基因的表达特性,结果表明,早花生态型穿心莲的ApTPS1表达水平高于晚花生态型,且这种关系不受光周期的影响;ApTPS1在穿心莲的不同器官中的表达水平依次为花>果实>花蕾≈新叶≈老叶。以上结果说明,ApTPS1可能与穿心莲开花时间及生殖器官发育有密切关系。ApTPS1基因的克隆及差异表达分析为穿心莲开花期调控及优良品种的选育提供了理论基础。 展开更多
关键词 穿心莲 海藻-6-磷酸合酶 基因克隆 生物信息学分析 表达分析
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糖熏色素5-(葡萄糖基-α-1-6-葡萄糖)-羟甲基糠醛形成机理的量子化学计算
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作者 叶国庆 牛玉敏 +2 位作者 范朝侠 杨慧 刘登勇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第10期62-71,共10页
为探究糖熏色素5-(葡萄糖基-α-1-6-葡萄糖)-羟甲基糠醛(5-(α-D-glucopyranosyl-(1-6)-α-D-glucopyranosyloxymenthyl)-2-furancarboxaldehyde,5-GGMF)的形成途径,采用量子化学计算对蔗糖的热分解反应位点、葡萄糖与5-羟甲基糠醛(5-hy... 为探究糖熏色素5-(葡萄糖基-α-1-6-葡萄糖)-羟甲基糠醛(5-(α-D-glucopyranosyl-(1-6)-α-D-glucopyranosyloxymenthyl)-2-furancarboxaldehyde,5-GGMF)的形成途径,采用量子化学计算对蔗糖的热分解反应位点、葡萄糖与5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF)及两分子葡萄糖间的脱水反应方式、5-HMF和5-GGMF的形成路径进行分析。结果表明:蔗糖热分解的初始位置为果糖基-氧键的裂解;葡萄糖与5-HMF或两分子葡萄糖间发生相互作用时,均是范德华力在复合物中起主导作用,且都会因为强氢键作用促进分子间脱水反应的发生;蔗糖形成5-HMF时,其热解后形成的葡萄糖部分比果糖部分生成5-HMF需要更大的活化能且反应速率更低,因此果糖部分更容易形成5-HMF,而在果糖部分形成5-HMF的两条路径中,路径5比路径4更容易发生,因为路径5在能量上和反应动力学上都表现出明显的优势;在蔗糖形成5-GGMF的途径中,转糖基化路径能垒总体较低,相较于二糖脱水路径和三糖脱水路径都更加有利,其中路径C2,即蔗糖热解生成果糖和葡萄糖,然后葡萄糖与5-HMF反应先生成5-葡萄糖氧甲基糠醛,后者再与一分子游离的葡萄糖生成5-GGMF,此路径最有利于5-GGMF的生成,无论是从能垒角度,还是动力学上的可行性。本研究结果可为今后控制和干预糖熏产品的色泽提供理论依据和参考。 展开更多
关键词 熏色素 5-(葡萄-α-1-6-葡萄)-羟甲基糠醛 量子化学 密度泛函理论
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“天龙竭”论治方案对晚期特发性肺间质纤维化患者肺功能及血清涎液化糖链抗原-6、趋化因子18的影响
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作者 陈冰 杨春艳 付义 《中国医药导报》 CAS 2024年第4期86-90,共5页
目的 探讨“天龙竭”论治方案对特发性肺间质纤维化(IPF)晚期患者肺功能及血清涎液化糖链抗原-6(KL-6)、血清趋化因子18(CCL18)的影响。方法 采用随机双盲双模拟对照临床研究方法,将2020年1月至2021年1月云南中医药大学第三附属医院呼... 目的 探讨“天龙竭”论治方案对特发性肺间质纤维化(IPF)晚期患者肺功能及血清涎液化糖链抗原-6(KL-6)、血清趋化因子18(CCL18)的影响。方法 采用随机双盲双模拟对照临床研究方法,将2020年1月至2021年1月云南中医药大学第三附属医院呼吸病学危重症医学专科36例晚期IPF患者,采用随机数字表法分为试验组和对照组,各18例。试验组采用“天龙竭”分期治疗方案,对照组采用吡非尼酮,疗程为3个月。观察治疗前后肺功能参数肺总量(TLC)、潮气量(TV)、单次呼吸法一氧化碳弥散(DLCO)及血清KL-6、CCL18水平,进行高分辨率CT(HRCT)治疗前后评分,并观察安全性指标。结果 治疗后,两组TLC、TV与治疗前比较及组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),两组DLCO较治疗前升高,且试验组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组HRCT评分与治疗前比较及组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组治疗血清KL-6、CCL18水平较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前后血清KL-6、CCL18水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在治疗过程中,两组均未出现明显不良反应。结论 运用“天龙竭”方案可一定程度改善晚期IPF患者肺功能,并通过调控炎症反应稳定病情,临床应用安全有效。 展开更多
关键词 特发性肺间质纤维化 天龙竭 肺功能 涎液化链抗原-6 趋势因子18
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葱蝇海藻糖-6-磷酸合成酶基因的克隆、序列分析及滞育相关表达 被引量:11
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作者 李源 郝友进 +2 位作者 张玉娟 司风玲 陈斌 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期329-338,共10页
海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)是昆虫海藻糖合成途径中的关键酶之一。本研究通过对葱蝇Delia antiqua海藻糖-6-磷酸合成酶基因的克隆、序列分析及滞育相关表达的分析,旨在证明该基因在能源合成以及抵御高温... 海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)是昆虫海藻糖合成途径中的关键酶之一。本研究通过对葱蝇Delia antiqua海藻糖-6-磷酸合成酶基因的克隆、序列分析及滞育相关表达的分析,旨在证明该基因在能源合成以及抵御高温和低温环境方面6发挥重要作用,为进一步弄清葱蝇滞育分子机制提供理论依据。根据葱蝇抑制消减杂交文库中的EST序列信息,设计特异性引物,并通过RACE技术克隆了葱蝇海藻糖-6-磷酸合成酶基因全长cDNA,命名为DaTPS1(GenBank登录号:JX681124),其全长为2904bp,开放阅读框2448bp,编码815个氨基酸,推测其相对分子质量为91.2kD,等电点为5.96。生物信息学分析表明,该基因编码的氨基酸序列具有两个保守结构域,与其他物种TPS具有较高的同源性,其中和黑腹果蝇Drosophila melanogaster亲缘关系最近,氨基酸序列一致性为92.1%;其蛋白质三维结构有15条大的α螺旋和11股反向平行的β链折叠。RT-PCR分析表明,DaTPS1在葱蝇非滞育、夏滞育和冬滞育期蛹中都有表达,但是非滞育期各时期表达量基本没有变化,而在夏滞育和冬滞育蛹的滞育前期表达量较高,滞育保持期表达量较低,滞育期后期表达量又有所升高。推断在葱蝇蛹夏滞育和冬滞育期前期,TPS1开始催化合成较多的海藻糖以提高滞育期抵御不良环境的能力,滞育保持期蛹的新陈代谢降低,所需能量较少,所以TPS1处于低水平表达状态,而滞育期结束后,蛹生长发育逐渐恢复,所需能量有所增加,TPS1的表达量再次升高。本研究对揭示昆虫TPS在能量代谢通路中的作用及昆虫滞育的分子机理具有一定的科学意义。 展开更多
关键词 葱蝇 滞育 海藻-6-磷酸合成酶 克隆 序列分析 半定量RT-PCR
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海藻糖-6-磷酸合成酶转基因烟草提高耐盐性的研究 被引量:21
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作者 郭蓓 胡磊 +2 位作者 何欣 陈雪梅 蒋湘宁 《植物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期41-49,共9页
海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-pho sphate synthase,TPS)是海藻糖合成途径中的一个关键酶,近些年来受到广泛关注,以往的研究多数集中于细菌和真菌等,而对植物体内TPS基因的研究较少。为此,我们首先通过RT-PCR(reverse tran-scriptio... 海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-pho sphate synthase,TPS)是海藻糖合成途径中的一个关键酶,近些年来受到广泛关注,以往的研究多数集中于细菌和真菌等,而对植物体内TPS基因的研究较少。为此,我们首先通过RT-PCR(reverse tran-scription PCR)克隆得到了拟南芥的TPS基因,进而将其构建到原核高效表达载体pET30a(+)上并在大肠杆菌BL21中进行高效诱导表达。在确认该基因能够在体外正常表达之后,将其构建到植物表达载体上并转入烟草体内,通过实时荧光定量PCR检测,证明在转基因个体中目的基因已经在受体基因组上完成整合,并且在其中的2个个体中实现了正常转录。在对目标个体进行海藻糖含量的测定以及抗逆性实验后发现,S5个体具有良好的表现,其体内海藻糖的含量明显高于其它个体,并具有较强的耐受盐胁迫的能力。 展开更多
关键词 基因克隆与异源表达 实时荧光定量PCR 胁迫耐受 转基因植物 海藻-6-磷酸合成酶
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酿酒酵母海藻糖-6-磷酸合成酶基因克隆及植物表达载体的构建 被引量:7
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作者 陈红漫 祝令香 董志扬 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期54-58,共5页
从耐热性极强的酿酒酵母菌株AS2 1 41 6中分离纯化出总RNA和mRNA ,以AMV逆转录酶合成cDNA ,采用保守引物 ,从该cDNA中扩增克隆出tps1基因 ,对该基因的全序列分析表明 ,该基因含有 1 50 7个核苷酸 ,与国外报道相关基因的同源性达 99 6%... 从耐热性极强的酿酒酵母菌株AS2 1 41 6中分离纯化出总RNA和mRNA ,以AMV逆转录酶合成cDNA ,采用保守引物 ,从该cDNA中扩增克隆出tps1基因 ,对该基因的全序列分析表明 ,该基因含有 1 50 7个核苷酸 ,与国外报道相关基因的同源性达 99 6%。利用BamHⅠ和SacⅠ切点将tps1基因插入植物表达载体 pBin438多克隆位点上 ,得到tps1基因植物表达载体重组质粒。 展开更多
关键词 海藻-6-磷酸合成酶 基因克隆 表达载体 植物表达载体 酿酒酵母
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碱茅6-磷酸海藻糖合成酶基因的克隆及其耐逆性分析 被引量:8
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作者 李莹 柳参奎 《草业学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期99-106,共8页
从碱茅酵母cDNA文库中经过NaCl、NaHCO。筛选,均得到长为1153bp碱茅6一磷酸海藻糖合成酶基因(PutTPS)片段。通过3’End cDNA amplification方法获得基因缺失的3’序列,该基因全长3358 bp,编码882个氨基酸。氨基酸序列比较结果表明... 从碱茅酵母cDNA文库中经过NaCl、NaHCO。筛选,均得到长为1153bp碱茅6一磷酸海藻糖合成酶基因(PutTPS)片段。通过3’End cDNA amplification方法获得基因缺失的3’序列,该基因全长3358 bp,编码882个氨基酸。氨基酸序列比较结果表明,PutTPS氨基酸序列与水稻、拟南芥、玉米等多种高等植物的TPS蛋白的同源性高达60%~90%。利用Northern blot技术,研究该基因的组织表达模式及NaCl、NaHCO3胁迫处理下基因的表达模式变化;同时对转pYES2-PutTPS基因酵母菌株进行盐、碱、氧化胁迫、渗透胁迫处理,观察其在逆境下的生存表现。结果表明,PutTPS具有组织表达特异性,其中在根和花中表达量最大;NaCl、NaHCO3会诱导PutTPS基因在根和叶中的上调表达;同时重组酵母菌株对盐碱、氧化、渗透胁迫及干旱等逆境的适应能力显著增强。以上研究结果表明,碱茅PutTPS基因与逆境之间具有一定的应答关系,并在植物适应环境逆境过程中起着重要的作用。 展开更多
关键词 碱茅 6-磷酸海藻合成酶 基因表达 酵母
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香蕉海藻糖-6-磷酸合成酶基因MaTPS2克隆及表达特性分析 被引量:1
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作者 王安邦 吴琼 +6 位作者 舒海燕 许桂莺 苗红霞 柯建浩 贾彩虹 邢文婷 许奕 《中国南方果树》 北大核心 2016年第6期19-24,共6页
在获得MaTPS2基因全长序列的基础上,采用同源序列比对、聚类分析、实时定量PCR等技术初步探讨香蕉MaTPS2基因的功能。从香蕉A基因组中获得一条3 277bp MaTPS2全长序列,包含一个完整的开放阅读框1 344bp,编码蛋白含447个氨基酸。其氨基... 在获得MaTPS2基因全长序列的基础上,采用同源序列比对、聚类分析、实时定量PCR等技术初步探讨香蕉MaTPS2基因的功能。从香蕉A基因组中获得一条3 277bp MaTPS2全长序列,包含一个完整的开放阅读框1 344bp,编码蛋白含447个氨基酸。其氨基酸理化性质分析表明,MaTPS2蛋白属于不稳定疏水性蛋白,具有一个结构域GT1-TPS。通过与已知植物的TPS氨基酸同源序列比对,同源性达77.95%。系统发育树进化关系分析表明,MaTPS2编码的氨基酸序列与银杏TPS氨基酸序列(AAX16014.1)邻近,说明二者的亲缘关系较近。器官特异性分析表明,MaTPS2在香蕉植株的根、球茎、假茎、叶、花各器官中均有表达,其中在球茎、假茎和叶中表达量较多,在果实中表达量较低。在ABA、干旱、盐害和枯萎病菌胁迫处理下,MaTPS2表达量升高,在ACC胁迫处理下,MaTPS2表达量显著下降,而低温胁迫条件下,MaTPS2表达不响应。由此推导,MaTPS2可能参与调控香蕉抗旱、抗病机制。植物生长调节剂ACC和ABA胁迫处理说明MaTPS2的表达可能受激素蛋白间接调控。 展开更多
关键词 香蕉 海藻-6-磷酸合成酶基因(TPS2) 生物信息学 qPCR 表达分析 胁迫
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UPLC-MS/MS法检测禾谷镰刀菌中6-磷酸海藻糖和海藻糖的色谱柱选择
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作者 吴琴燕 梁红芳 +4 位作者 张文文 温小林 朱建飞 徐超 庄义庆 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第5期1299-1304,共6页
选择6-磷酸海藻糖(T6P)和海藻糖(Tre)在超高效液相色谱UPLC分离中的最佳色谱柱。对T6P和Tre在C_(18)柱、Kinetex Hilic柱、T3柱、Luna■NH2柱、Cogent diamond Hydride柱和BEH Amide柱6种色谱柱中的色谱行为进行对比研究。结果表明,T6P... 选择6-磷酸海藻糖(T6P)和海藻糖(Tre)在超高效液相色谱UPLC分离中的最佳色谱柱。对T6P和Tre在C_(18)柱、Kinetex Hilic柱、T3柱、Luna■NH2柱、Cogent diamond Hydride柱和BEH Amide柱6种色谱柱中的色谱行为进行对比研究。结果表明,T6P和Tre在Luna■NH2柱和T3柱中分离效果较好,分别建立Luna■NH2柱和T3柱的UPLC-MS/MS检测方法,其检出限分别为1.25~5.10μg/L和12.75~15.62μg/L,定量限分别为3.75~15.60μg/L和38.25~52.03μg/L,回收率分别为71.5%~85.7%和82.8%~95.6%,相对标准差分别为3.8%~8.5%和2.7%~3.3%,Luna■NH2柱的灵敏度高,T3色谱柱的回收率高、稳定性好。2种色谱柱均满足禾谷镰刀菌中T6P和Tre同时检测的要求。 展开更多
关键词 超高效液相色谱-串联质谱 禾谷镰刀菌 6-磷酸海藻 海藻 色谱柱
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海藻糖-6-磷酸合成酶基因的序列优化与表达研究(英文)
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作者 何道文 刘小红 +1 位作者 赵欢 张咏祀 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期28-35,共8页
为了获得一个优良的玉米抗旱育种基因资源,借助于生物信息学手段和分子生物学实验操作技术,从木棉植物中获得了一个编码海藻糖-6-磷酸合成酶的抗旱基因序列。根据玉米对密码子使用的偏爱性,合成了1个可用于玉米转化并提高其耐旱性的新... 为了获得一个优良的玉米抗旱育种基因资源,借助于生物信息学手段和分子生物学实验操作技术,从木棉植物中获得了一个编码海藻糖-6-磷酸合成酶的抗旱基因序列。根据玉米对密码子使用的偏爱性,合成了1个可用于玉米转化并提高其耐旱性的新的海藻糖-6-磷酸合成酶基因,进一步通过DNA分子的酶切和连接等操作将该基因构建成表达质粒,再导入大肠杆菌和酵母细胞以鉴定其是否能在原核和真核细胞中表达。最后该基因被构建到植物表达载体上,并转入农杆菌细胞。结果表明,新合成基因全长为2 586 bp,包含完整的开放阅读框,编码861个氨基酸;构建出的原核和真核表达质粒与预期的结果相符,该基因可用于细胞转化试验;该新合成基因能在大肠杆菌和酵母细胞中有效表达出海藻糖-6-磷酸合成酶;该基因被成功构建到植物表达载体p CAMBIA-2300上,并转入了农杆菌细胞LBA4404工程菌株。综合上述结果认为,获得了1个新的海藻糖-6-磷酸合成酶基因,该基因能在原核和真核细胞中有效表达出海藻糖-6-磷酸合成酶,构建的植物基因表达质粒可以直接用于玉米抗旱转基因育种。 展开更多
关键词 玉米 海藻-6-磷酸合成酶 基因 抗旱
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6-磷酸-海藻糖对普通菜豆籽粒产量和镰孢菌枯萎病抗性的影响
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作者 薛仁风 黄宇宁 +3 位作者 姜珊 赵阳 陈剑 葛维德 《河南农业科学》 北大核心 2022年第11期91-97,共7页
6-磷酸-海藻糖是调控植物生长发育和响应胁迫的重要信号分子。为研究6-磷酸-海藻糖调控普通菜豆生长发育和抗病反应的功能,采用外源6-磷酸-海藻糖溶液喷施方法,揭示其对普通菜豆籽粒产量和镰孢菌枯萎病抗性的影响。结果表明,龙饭豆1号... 6-磷酸-海藻糖是调控植物生长发育和响应胁迫的重要信号分子。为研究6-磷酸-海藻糖调控普通菜豆生长发育和抗病反应的功能,采用外源6-磷酸-海藻糖溶液喷施方法,揭示其对普通菜豆籽粒产量和镰孢菌枯萎病抗性的影响。结果表明,龙饭豆1号和红芸豆的百粒质量分别达到42.7 g和43.2 g,分别比对照(蒸馏水)提高18.6%和20.7%,产量可达2250.5 kg/hm^(2)和2549.6 kg/hm^(2),分别提高14.5%和19.2%。6-磷酸-海藻糖处理后,普通菜豆叶片可溶性糖类含量显著提升,红芸豆海藻糖、葡萄糖、蔗糖和淀粉水平最高,分别达37.4 nmol/g、4.3μmol/g、5.5μmol/g、3.6μmol/g;龙饭豆1号果糖含量最高,达到8.4μmol/g。龙饭豆1号叶片净光合速率、胞间CO_(2)浓度和蒸腾速率最高,分别达到18.6、249.6、6.5μmol/(m^(2)·s),红芸豆气孔导度最大,达0.57μmol/(m^(2)·s)。外源6-磷酸-海藻糖的喷施促进了植株生长发育和碳水化合物的合成,同时显著提高叶片光合效率,促进营养物质向籽粒转运。此外,接菌48 h后,6-磷酸-海藻糖处理的菜豆根中防御因子活性或含量达到最高,过氧化物酶活性、超氧化物歧化酶活性和苯丙氨酸解氨酶活性分别达到78.3、32.9、0.054 nk at/mg,H_(2)O_(2)含量达到0.33 ng/mg。PR1、PR2、PR5基因的相对表达量达到最高,分别为接种0 h基因表达量的8.3、13.2、9.4倍。接菌28 d后植株发病级别显著低于对照,仅为4.2。综上,6-磷酸-海藻糖可能通过调节可溶性糖含量、叶片光合效率促进产量提升,通过诱导植物防御因子的表达激活寄主抗病性。 展开更多
关键词 普通菜豆 6-磷酸-海藻 籽粒产量 镰孢菌枯萎病抗性 生理分析 防御基因表达
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啤酒酵母中海藻糖合成酶和海藻糖-6-磷酸合成酶的功能及结构分析
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作者 郭永豪 孙连海 +1 位作者 余华顺 马向东 《酿酒科技》 北大核心 2005年第6期40-43,共4页
啤酒酵母的海藻糖合成酶复合物由4个亚基(TPS1,TPS2,TPS3和TSL1)组成,这4个亚基具有协同作用。其中海藻糖-6-磷酸合成酶是海藻糖合成酶的功能中心;TPS1除了具有合成海藻糖的功能之外,还具有调节糖代谢和促进酵母孢子形成的功能;tps1大... 啤酒酵母的海藻糖合成酶复合物由4个亚基(TPS1,TPS2,TPS3和TSL1)组成,这4个亚基具有协同作用。其中海藻糖-6-磷酸合成酶是海藻糖合成酶的功能中心;TPS1除了具有合成海藻糖的功能之外,还具有调节糖代谢和促进酵母孢子形成的功能;tps1大量表达时,有助于细胞增加对高温、高渗和酒精等的耐受性。 展开更多
关键词 啤酒酵母 海藻合成酶 海藻-6-磷酸合成酶 结构 功能
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涎液化糖链抗原-6与Standford A型主动脉夹层患者发生急性肺损伤的关系 被引量:1
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作者 原野 刘涛 刘华 《检验医学》 CAS 2023年第6期543-547,共5页
目的探讨血清涎液化糖链抗原-6(KL-6)与Standford A型主动脉夹层患者发生急性肺损伤的关系。方法选取2019年5月―2021年5月十堰市太和医院确诊的Standford A型主动脉夹层患者78例,根据静态吸氧时氧合指数将患者分为肺损伤组(30例)和非... 目的探讨血清涎液化糖链抗原-6(KL-6)与Standford A型主动脉夹层患者发生急性肺损伤的关系。方法选取2019年5月―2021年5月十堰市太和医院确诊的Standford A型主动脉夹层患者78例,根据静态吸氧时氧合指数将患者分为肺损伤组(30例)和非肺损伤组(48例)。收集所有患者的临床资料和相关检查结果。检测所有患者术前12 h(T1)、麻醉诱导后(T2)、手术结束(T3)、术后12 h(T4)的血清KL-6水平。采用逐步Logistic回归分析评估Standford A型主动脉夹层患者发生急性肺损伤的危险因素。采用Pearson相关分析评估各项指标之间的相关性。结果肺损伤组各时间点血清KL-6水平均显著高于非肺损伤组(P<0.001)。肺损伤组和非肺损伤组T3、T4时间点血清KL-6水平均高于T1、T2时间点(P<0.05)。肺损伤组与非肺损伤组之间夹层分期(急性期)例数、累及肠系膜上动脉例数和白细胞(WBC)计数、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、KL-6水平差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,hs-CRP和KL-6是Standford A型主动脉夹层患者发生急性肺损伤的独立危险因素[比值比(OR)分别为2.063、2.555,95%可信区间(CI)分别为1.104~3.854、1.272~5.133]。Pearson相关分析结果显示,KL-6、hs-CRP与氧合指数均呈负相关(r值分别为-0.561、-0.368,P<0.01)。结论血清KL-6水平与Standford A型主动脉夹层患者发生急性肺损伤密切相关。 展开更多
关键词 涎液化链抗原-6 Standford A型主动脉夹层 急性肺损伤
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类风湿关节炎合并肺间质病变与类风湿因子、抗环瓜氨酸肽抗体、涎液化糖链抗原-6相关性 被引量:1
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作者 赵颖 张向东 王贯虹 《安徽医药》 CAS 2023年第10期1995-1999,共5页
目的探讨类风湿因子(RF),抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,涎液化糖链抗原-6(KL-6)在类风湿关节炎(RA)合并肺间质病变(ILD)病人中的表达及与疾病的相关性。方法回顾性研究2018年5月至2021年5月大同市第五人民医院收治的125例RA病人,根据病人病情... 目的探讨类风湿因子(RF),抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,涎液化糖链抗原-6(KL-6)在类风湿关节炎(RA)合并肺间质病变(ILD)病人中的表达及与疾病的相关性。方法回顾性研究2018年5月至2021年5月大同市第五人民医院收治的125例RA病人,根据病人病情分为单纯RA组及RA合并ILD组,按照年龄、性别随机分层选择60例健康体检者为对照组。收集一般资料,比较三组研究对象的年龄、性别、C-反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、疾病活动性评分(DAS28)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼吸末容积(FEV_(1))、第一秒用力呼吸末容积与用力肺活量比值(FEV_(1)/FVC)等指标;采用酶联免疫吸附法检测血清中RF、抗CCp、KL6表达水平,Pearson法分析RF、抗CCp、KL6与相关指标表达的相关性,采用多重线性回归分析RA合并ILD病人RF、抗CCp、KL6表达水平的影响因素。利用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清RF、抗CCp、KL6水平对RA合并ILD病人的诊断价值。结果RA合并ILD组与单纯RA组病人血清中RF[(572.25±118.54)、(312.66±58.23)IU/mL)]、抗CCp[(255.44±74.56)、(152.36±50.28)IU/mL]、KL6[(619.12±205.68)、(363.70±51.87)U/mL]表达水平均高于健康对照组[(85.51±9.49)IU/mL,(63.83±11.85)IU/mL,(317.25±48.87)U/mL],且RA合并ILD组高于单纯RA组(P<0.05);RA合并ILD病人血清中RF、抗CCp表达呈正相关(r=0.45,P<0.05),RF与KL6表达呈正相关(r=0.44,P<0.05),抗CCp、KL6表达呈正相关(r=0.42,P<0.05);RA合并ILD病人血清中RF、抗CCp、KL6表达与CRP、ESR、DAS28、CRP、ESR、DAS28表达均呈正相关,与FVC、FEV_(1)表达均呈负相关(P<0.05)。三者联合检测RA合并ILD病人的AUC 95%CI为0.99(0.96,1.00),灵敏度和特异度分别为97.96%、96.05%。结论在RA合并ILD病人血清中RF、抗CCp、KL6表达水平明显升高,且联合检测三者对诊断RA合并ILD病人具有重要意义。 展开更多
关键词 关节炎 类风湿 肺间质病变 类风湿因子 抗环瓜氨酸肽 涎液化链抗原-6
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