洛伐他汀壳聚糖海藻酸盐缓释微球治疗兔股骨头坏死的研究

目的研究洛伐他汀壳聚糖海藻酸盐缓释微球联合洛伐他汀全身用药对股骨头坏死的治疗效果。方法将造模后经X线筛选确诊为股骨头坏死的40只新西兰大白兔中的36只采用数字表法随机分为股骨头坏死模型(A)组、单独给予洛伐他汀全身用药(B)组、洛伐他汀壳聚糖海藻酸盐缓释微球联合洛伐他汀全身用药(C)组、髓内钻孔减压治疗(D)组,另外再取6只新西兰正常大白兔作为正常对照(E)组;检测五组的血脂水平及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、骨形态发生蛋白质2(BMP-2)的mRNA水平。结果 A组和D组的三酰甘油(TG)、胆固醇、低密度脂蛋白(LDL)、PPAR-γ水平高于E组,高密度脂蛋白(HDL)、BMP-2水平低于E组(P<0.05);B组和C组的TG、胆固醇、LDL、PPAR-γ水平低于A组和D组,HDL、BMP-2水平高于A组和D组(P<0.05);C组的TG、胆固醇、LDL、PPAR-γ水平低于B组,HDL、BMP-2水平高于B组(P<0.05)。结论洛伐他汀壳聚糖海藻酸盐缓释微球联合洛伐他汀全身用药能够更为有效的改善实验兔血脂代谢和股骨头局部状况,具有积极的临床价值。

三维共培养兔髓核细胞诱导骨髓间充质干细胞分化(英文)

背景:在椎间盘组织工程研究领域,种子细胞主要有髓核细胞与骨髓间充质干细胞。髓核细胞来源有限,取材不便,增殖能力差,体外培养困难。目的:利用海藻酸盐微球模拟的三维环境下,将兔髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养,观察骨髓间充质干细胞的分化情况。设计、时间及地点:细胞观察实验,于2007-12/2008-10在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室进行。材料:4月龄健康新西兰大耳白兔6只,购自华中科技大学同济医学院动物实验中心。方法:应用密度梯度离心法及贴壁法分离纯化兔骨髓间充质干细胞,应用Ⅱ型胶原酶消化法及贴壁法分离培养兔椎间盘髓核细胞。取传至第3代骨髓间充质干细胞,用脂质体介导法将绿色荧光蛋白质粒转入,经G418筛选后,分为2组:单独培养组将转染后的骨髓间充质干细胞单独培养,共培养组将其与髓核细胞按1:1比例于海藻酸盐凝胶微球中进行共培养。共培养14d后,溶解海藻酸盐凝胶珠,通过流式分选收集骨髓间充质干细胞。主要观察指标:利用RT-PCR法和Western blot技术检测骨髓间充质干细胞中Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖的表达。结果:共培养14d后,共培养组有Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA及蛋白的表达,而单独培养组均呈阴性表达。结论:通过三维共培养,兔椎间盘髓核细胞能够在体外诱导骨髓间充质干细胞向髓核样细胞方向分化。

基于原代肺癌细胞3D培养模型的建立及其药物敏感性研究

目的构建基于原代肺癌细胞的3D水凝胶培养模型并研究其在抗肿瘤药物敏感性测试中的应用。方法采用条件性重编程技术培养患者来源的肺癌细胞;利用海藻酸钠与钙离子凝胶反应原理构建海藻酸钠-透明质酸3D微球培养原代肺癌细胞;应用扫描电子显微镜观察3D微球的结构;流式细胞术检测细胞周期分布;Transwell实验考察细胞的迁移和侵袭能力;MTS法检测原代肺癌细胞经顺铂、卡铂、紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨、扁塑藤素等药物处理后的细胞活力;Caspase-3活力检测试剂盒检测细胞内Caspase-3含量;Western blot实验检测细胞蛋白表达水平的变化。结果海藻酸钠-透明质酸微球内部呈均匀多孔结构,3D培养的原代肺癌细胞以细胞团形式生长。与2D培养方式相比,3D微球培养的原代肺癌细胞G0/G1期细胞阻滞增多,增殖速率变低,迁移和侵袭能力增强,肿瘤干细胞标志物表达显著提升,对抗肿瘤药物敏感性下降,且细胞抗凋亡能力增强;此外,与2D培养的细胞相比,3D微球培养的原代肺癌细胞Akt/GSK3β通路激活水平显著升高。结论3D水凝胶细胞培养能够更好地模拟体内肺癌肿瘤组织的生长特点和微环境,客观反映体内肺癌肿瘤组织对药物的反应过程,有利于更准确地体外评估抗肿瘤药物的敏感性。