海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞修复兔佐剂性关节炎膝关节软骨缺损的实验研究

目的探讨海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞对兔佐剂性关节炎膝关节软骨缺损修复的影响。方法将新西兰白兔分为正常对照组、佐剂性模型组和海藻酸盐支架治疗组。模型组和治疗组兔膝关节内注入弗氏佐剂建立佐剂性关节炎模型。抽取治疗组兔左后健侧肢体的骨髓,用Percoll法分离出自体骨髓间充质干细胞(ABMSC),体外培养传代至P3代并诱导分化为软骨细胞。将软骨细胞与海藻酸钠支架混合注入治疗组的病变膝关节。对照组和模型组关节注射等量的生理盐水。海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞治疗1个月后处死兔,应用Ⅱ型胶原免疫组织化学法染色和HE染色,观察各组兔的膝关节关节软骨缺损的修复情况。结果诱导成功软骨细胞且生长良好,呈现明显的纺锤体形,细胞成活率达98.5%。软骨细胞与海藻酸钠复合后体外培养显示细胞生长旺盛,增殖成株状或岛状,株状细胞团周围有类似的软骨陷窝形成,细胞排列密集,核圆形。组织形态学结果显示,治疗组与模型组比较,治疗组关节炎症反应明显减轻,关节Ⅱ型胶原阳性软骨细胞显著增高,软骨缺损得到明显修复。结论海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞对兔佐剂性关节炎膝关节软骨缺损有一定的修复作用。

海藻酸钠支架复合工程化软骨对佐剂性关节炎兔的抗炎作用机制

目的 探讨海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞对佐剂性关节炎(AA)兔的抗炎作用机制。方法 40只新西兰兔随机分成正常组、模型组、支架组、软骨细胞组、支架复合软骨细胞组各8只。对后4组注射完全弗氏佐剂(FCA)制作成关节炎模型,正常组注射等量生理盐水,用兔骨髓间充质干细胞培养诱导成为软骨细胞并复合海藻酸钠支架,分别回注到相应治疗组兔关节腔内,治疗1个月,观察各组兔膝关节滑膜组织苏木素-伊红及免疫组化染色结果。结果 与模型组相比,各治疗组膝关节软骨缺损及炎性反应均有所改善;关节滑膜白细胞介素(IL)-10表达均显著增加(P<0.05,P<0.01),IL-22和转化生长因子(TGF)-β1表达均显著减少(P<0.05,P<0.01)。结论 海藻酸钠支架复合软骨细胞对AA有良好的抗炎作用,促进AA兔关节滑膜组织IL-10表达并抑制IL-22和TGF-β1表达可能是海藻酸钠支架复合软骨细胞的抗炎作用机制之一。

注射海藻酸钠复合支架修复RA膝关节软骨缺损的初步观察

目的探讨海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞对RA患者膝关节软骨缺损修复的影响。方法将8名RA患者随机分为对照组4例和海藻酸盐支架治疗组4例。RA治疗组患者膝关节内注入1 mL海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞,对照组患者膝关节注射等量的生理盐水。海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞治疗一个月后提取对照组和治疗组关节活检组织,应用Ⅱ型胶原免疫组织化学法染色和HE染色,通过计数Ⅱ型胶原免疫阳性细胞数和光镜观察关节组织结构变化,检测各组RA患者的膝关节软骨缺损的修复情况。结果组织形态学结果显示,治疗组与对照组比较,治疗组关节浸润炎症细胞数量减少,炎症反应明显减轻,关节Ⅱ型胶原阳性软骨细胞明显增高,软骨细胞有所增多。结论海藻酸钠支架复合组织工程化软骨细胞对RA患者膝关节软骨缺损有一定的修复作用。

海藻酸钠复合工程化软骨细胞对兔佐剂性关节炎关节滑膜转录因子RORγt mRNA、 Foxp3 mRNA表达的影响

目的探讨组织工程学方法对兔佐剂性关节炎关节滑膜转录因子(ROR)γt mRNA、叉头蛋白(Fox)p3 mRNA的影响。方法将新西兰兔分为:对照组(A组),模型组(B组),3个治疗组〔分别为支架治疗组(C组)、细胞治疗组(D组)、支架复合细胞组(E组)〕,每组8只。B、C、D、E组的关节炎模型用完全弗氏佐剂(FCA)诱导,治疗组用海藻酸钠支架、工程化软骨细胞及海藻酸钠复合工程化软骨细胞注入兔关节腔内治疗1个月,对照组给予等量生理盐水同法处理,观察各治疗组血清酶联免疫吸附试验(ELISA)和滑膜苏木素-伊红(HE)、RT-PCR结果。结果E组Foxp3 mRNA表达量明显高于B组(P<0.05);E组RORγt mRNA表达量明显低于B组(P<0.05);各治疗组与B组相比,滑膜炎症反应均有所改善;E组外周血中转化生长因子(TGF)-β明显高于B组(P<0.05)。结论海藻酸钠复合软骨细胞可提高Foxp3 mRNA的表达、降低RORγt mRNA的表达,这可能是其抗炎作用机制之一。