吡咯喹啉醌对培养的鼠海马神经元的促生长作用

目的:探讨吡咯喹啉醌(PQQ)对培养海马神经元的促生长作用。方法:原代培养新生大鼠海马神经元,观察PQQ对海马神经元胞体、突起生长和存活率的影响,测定MTT代谢率和脂褐素。结果:PQQ处理后,海马神经元突起的长度和胞体的长径显著大于对照组,细胞的存活率增加、存活的时间延长,尼氏小体的光密度值和MTT代谢率显著高于对照组,脂褐素的含量降低。结论:PQQ能促进海马神经元的生长,增加其存活率、延长存活时间。

抗抑郁药的神经保护作用及其机制

应激和抑郁引起以海马为主的中枢神经系统萎缩、海马容量降低。抗抑郁药的慢性治疗通过促进海马细胞增殖和神经元数目增加 ,抵抗或克服应激诱导的海马神经元萎缩和丢失 ,实现其神经保护作用。其机制在于抗抑郁药可能作用于调节神经元的生成和存活的特殊的转录因子和靶基因。深入地理解应激和抗抑郁药治疗的细胞和分子机制 ,对于指导临床用药具有重要的意义。

海马CA1区微量注射去甲肾上腺素对慢波睡眠的影响

目的探讨海马CA1区给予去甲肾上腺素(NA)对大鼠睡眠的影响。方法运用立体定位技术进行海马微量注射,通过多导睡眠描记(PSG)观察大鼠睡眠的变化。结果NA引起慢波睡眠(SWS)和总睡眠时间(TST)增加,NA的β型受体阻断剂普奈洛尔减少SWS和TST,并可阻断NA的促睡眠效应;NA的α型受体阻断剂酚妥拉明对睡眠无影响,亦不能阻断NA的促睡眠效应。结论海马CA1区参与睡眠-觉醒的调节,海马中的NA通过β受体发挥其促进慢波睡眠的作用。

逍遥散对慢性心理应激大鼠海马突触体内Ca^(2+)浓度的影响

[目的]观察逍遥散对慢性心理应激大鼠海马突触体内Ca2+的影响,进一步研究逍遥散对心理应激损伤学习记忆保护作用的机制。[方法]Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型Ⅰ组、逍遥散Ⅰ组、模型Ⅱ组、逍遥散Ⅱ组共5组,除空白对照组外,其他组动物均复制慢性多相性应激模型,同时,逍遥散Ⅰ组和逍遥散Ⅱ组分别灌服逍遥散水煎液(1.06g/只)21 d和42 d。空白对照组及模型Ⅰ、Ⅱ组灌胃等容积生理盐水,给药结束后断头取海马匀浆,以Fura-2负载及荧光分光光度计检测大鼠海马突触体内Ca2+浓度。[结果]模型组大鼠海马突触体内Ca2+浓度明显升高,与空白对照组比较,具有显著性差异(P<0.01);逍遥散Ⅰ组Ca2+浓度水平低于模型组Ⅰ组(P<0.01);逍遥散Ⅱ组则低于逍遥散Ⅰ组(P<0.05);与模型Ⅰ组相比,模型Ⅱ组大鼠海马突触体内Ca2+浓度降低(P<0.05)。[结论]应激可使大鼠海马突触体内Ca2+浓度升高,但应激原去除后,其Ca2+浓度又有所回落,表明应激所致的大鼠海马突触体内Ca2+浓度升高是可逆或部分可逆的;逍遥散具有对抗应激所致大鼠海马突触体内Ca2+浓度升高的作用,且这种作用与用药时间呈正相关。

体外氰戊菊酯暴露抑制小鼠海马神经元突起形成

目的探讨氰戊菊酯对小鼠海马神经元突起的影响。方法取孕18d的ICR小鼠胚胎海马细胞体外培养,建立小鼠海马神经元和星形胶质细胞混合培养体外模型。以1、5、10、50mg/L的氰戊菊酯对培养8d后的细胞进行染毒,乳酸脱氢酶(LDH)比色法测定染毒48h后的细胞毒性;采用荧光免疫细胞化学的方法研究小鼠海马神经元和星形胶质细胞的相对含量及海马神经元突起状况。结果在对海马神经细胞不产生明显细胞毒性的前提下,氰戊菊酯可以引起神经元缺失,而且随着剂量的增加,神经元突起的数目及长度均随之明显下降。结论氰戊菊酯可能特异损害和(或)

艾芬地尔对戊四氮致痫大鼠海马nNOS表达的影响

目的:观察艾芬地尔对戊四氮(PTZ)急性致痫大鼠海马一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响,探讨癫痫发生的机制及艾芬地尔的药理作用。方法:将60只大鼠随机分为空白对照组(A组)、PTZ致痫组(B组)、艾芬地尔干预组(C组),通过腹腔注射PTZ建立急性癫痫动物模型,并采用免疫组化技术观察海马nNOS的表达变化情况。结果:模型组各时间点nNOS水平较正常组各相应时间点明显升高(P<0.05);模型组nNOS在24h免疫反应阳性神经元AOD值达到最高;艾芬地尔干预组与模型组相比表达下降,各时间点AOD值均存在显著性差异(P<0.05)。结论:PTZ点燃癫痫大鼠海马组织nNOS表达明显增加,提示nNOS可能参与了戊四氮点燃癫痫的形成过程;艾芬地尔明显减少了nNOS阳性细胞的表达,有利于保护癫痫损伤后神经细胞的功能。

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠学习记忆及海马胶质纤维酸性蛋白表达的影响(英文)

背景:研究表明,银杏叶提取物具有促进脑损伤后功能修复、改善老年人学习与记忆功能障碍以及促进中枢神经系统可塑性的作用,但其对2型糖尿病大鼠学习记忆功能的影响又如何呢?目的:观察银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠学习记忆功能障碍的改善作用和对海马内星形胶质细胞特异性蛋白胶质纤维酸性蛋白表达的影响。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:广西医科大学药学院药理学教研室。材料:选用84只雄性清洁级Wistar大鼠,8周龄,体质量180～220g。银杏叶提取物粉,广西桂林思特新技术公司提供,含黄酮24.8%,萜内酯6.2%,生产批号:200405。方法:实验于2003-06/2005-03在广西医科大学中心实验室(省重点实验室)药理室完成。①随机抽取70只大鼠,禁食24h,按55mg/kg腹腔注射链脲佐菌素(pH4.4柠檬酸缓冲液配制),注射后第4天,空腹血糖>15mmol/L的56只为2型糖尿病大鼠。②将56只糖尿病大鼠按随机数字表法分为4组:模型组,胰岛素治疗组,银杏叶提取物高、低剂量组,每组14只。4组糖尿病大鼠的空腹血糖差异不明显(P>0.05)。另取未注射链脲佐菌素的大鼠14只作正常对照组。胰岛素治疗组:皮下注射10U/(kg·d);银杏叶提取物高、低剂量治疗组:灌胃银杏叶提取物混悬液100和500mg/(kg·d);正常对照组和模型组:每天灌胃等量生理盐水,连续6个月。③Morris水迷宫实验观察记忆能力改变:圆形水池直径为100cm,高60cm,平台高40cm,水深42cm。大鼠每天上、下午各训练2次,连续4d。第5和8天上午测定每只大鼠学习能力[90s内找到平台的时间(逃避潜伏期);搜寻平台的策略直线式,记分4分;趋向式,记分3分;随机式,记分2分;圆圈式,记分1分)]。④测试结束后,各组取大鼠分别进行反转录聚合酶链反应(n=8)及免疫组织化学(n=6)实验,观察大鼠海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白的表达,分别以目的基因胶质纤维酸性蛋白区带的灰度值与内参β-actin区带的灰度值之比和胶质纤维酸性蛋白反应阳性细胞的体密度比表示。⑤组间差异显著性比较采用方差分析和q检验。主要观察指标:银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠Morris水迷宫实验结果及海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达的影响。结果:造模失败脱失14只,其余70只大鼠进入结果分析。①Morris水迷宫实验结果:模型组大鼠第5,8天的逃避潜伏期明显长于正常对照组,搜寻平台策略得分明显低于正常对照组(P<0.01)。胰岛素治疗组及银杏叶提取物高、低剂量组的第5,8天逃避潜伏期均明显短于模型组,搜寻平台策略得分明显高于模型组(P<0.05～0.01)。胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组Morris水迷宫实验结果差异不明显(P>0.05)。②海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达:模型组大鼠海马的胶质纤维酸性蛋白mRNA表达水平明显高于其他3组(P<0.01)。免疫组化结果显示,与正常对照组比较,模型组大鼠海马星形胶质细胞胞体明显增大、数量增加、突起明显增粗,胶质纤维酸性蛋白阳性表达细胞的体密度比明显增高(P<0.01)。与模型组比较,胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组海马星形胶质细胞胞体缩小、数量减少、突起明显变短,胶质纤维酸性蛋白表达的体密度比明显下降(P<0.01)。胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组胶质纤维酸性蛋白mRNA表达水平和胶质纤维酸性蛋白表达的体密度比比较,差异不明显(P>0.05)。结论:2型糖尿病大鼠存在学习记忆能力障碍,反应性星形胶质细胞可能参与了该障碍发生过程,银杏叶提取物可能通过抑制星形胶质细胞反应性增生对糖尿病大鼠学习记忆损伤起到保护作用。

丙泊酚对大鼠海马长时程增强诱发的影响

目的:长时程增强与学习记忆密切相关,分析丙泊酚对长时程增强的作用有助于了解丙泊酚是如何对认知功能产生影响的。方法:实验于2004-11/2005-03在徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室完成。选取SD雄性大白鼠38只,随机分为6组:对照组8只、丙泊酚低浓度组6只、丙泊酚中浓度组6只、丙泊酚高浓度组6只、印防己毒素组6只、印防己毒素加丙泊酚组6只。①给药:对照组不给予任何药物,丙泊酚低、中、高浓度组分别给予丙泊酚10,20,50μmol/L,印防己毒素组给予印防己毒素25μmol/L,印防己毒素加丙泊酚组给予印防己毒素25μmol/L+丙泊酚20μmol/L。各药物加入人工脑脊液配成终浓度,用含有药物的人工脑脊液灌流脑片,给药10min时给予强直刺激,20min后去除药物,恢复正常人工脑脊液灌流。②海马脑片制备:动物麻醉后断头取脑,垂直于海马长轴切取三四片海马脑片,厚度400μm。将海马脑片置于人工脑脊液中孵育2.0～3.0h,然后再全部浸于(32.0±0.5)°C恒温灌流槽内,液面高出脑片表面2mm,不断通入经体积分数为0.95的O2和0.05的CO2混合气体饱和的人工脑脊液,气体流量为200mL/min,人工脑脊液的灌流速度为1.5～2.0mL/min。③群峰电位的记录和长时程增强的诱发:双极电刺激大鼠海马脑片CA3区锥体细胞的谢弗侧支,玻璃微电极置于CA1区锥体细胞层,记录CA1区群峰电位,然后施以100Hz,400串的强直刺激,诱发长时程增强产生。给予强直刺激后群峰电位幅度增加20%、并持续30min以上,即判定为长时程增强发生。整个实验过程中每5min观察记录一次,至少观察60min以上。结果:实验共纳入大鼠38只,全部进入结果分析。①对照组海马脑片长时程增强情况:以强直刺激前脑片的群峰电位幅度为100%计算,对照组脑片强直刺激后其群峰电位幅度显著增高,在60min时为刺激前的(135.35±3.9)%,形成了长时程增强。②丙泊酚各浓度组海马脑片长时程增强情况:预试验显示作为溶剂的脂肪乳剂对长时程增强产生无影响。在强直刺激后60min时,丙泊酚低、中、高浓度组群峰电位幅度分别为刺激前的(124.72±3.9)%,(116.77±2.2)%,(109.39±0.9)%,与对照组相比均有显著性差异(t=2.25,P<0.05;t=4.54,P<0.01;t=6.88,P<0.01)。③印防己毒素组、印防己毒素加丙泊酚组海马脑片长时程增强情况:印防己毒素组在强直刺激后60min时群峰电位幅度为刺激前的(137.57±3.4)%,对长时程增强产生无影响。而印防己毒素加丙泊酚组在强直刺激后60min时,群峰电位幅度为刺激前的(129.32±3.5)%,与丙泊酚中浓度组比较具有明显差异(t=3.02,P<0.05)。④丙泊酚对大鼠海马脑片突触基础传递的影响:丙泊酚低、中浓度组在测试刺激条件下加药20min后,脑片的群峰电位幅度分别为用药前的(98.86±1.5)%和(98.65±1.8)%,与用药前基本相近(t=0.75,P>0.05;t=0.73,P>0.05)。丙泊酚高浓度组脑片的群峰电位幅度明显减小,加药20min时为用药前的(82.37±2.9)%,与用药前相比具有明显差异(t=6.08,P<0.01),撤药后脑片的群峰电位幅度可恢复正常。⑤印防己毒素对大鼠海马脑片突触基础传递的影响:印防己毒素组在测试刺激条件下加入25μmol/L的印防己毒素20min后,脑片的突触基础传递兴奋性有所增高,表现为出现多个群峰电位波,但第一个群峰电位幅度为用药前的(102.35±2.4)%,与用药前相比基本相近(t=0.97,P>0.05)。结论:丙泊酚低、中、高浓度组在给药过程中给予强直刺激后,群峰电位幅度均明显降低,长时程增强的形成受到抑制,且呈明显的剂量相关性,而印防己毒素对长时程增强产生无影响。提示丙泊酚对长时程增强的诱发有阻断作用,可能与激活γ-氨基丁酸(GABA)受体有关。

七氟醚预处理中谷氨酸转运体的激活触发对脑缺血的保护作用

目的:观察谷氨酸转运体是否参与七氟醚预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用。方法:实验于2006-01/06在徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室电生理研究室进行。清洁级SD幼年大鼠若干只,低温分离海马,沿矢状面切成300～400μm厚脑片。脑片分为8组,即缺氧无糖组、苏-羟天冬氨酸250,500,1000μmol/L苏-羟天冬氨酸组、40mL/L七氟醚预处理组、苏-羟天冬氨酸250,500,1000μmol/L分别+40mL/L七氟醚预处理组,每组8张脑片。将海马脑片放于34℃的正常的人工脑脊液中孵2h之后,平衡灌注,双脉冲方波刺激电极置于海马CA3区的Schaffer侧支,记录电极置于海马CA1区锥体细胞层。各组药物预处理30min,进行冲洗15min后,观察缺氧无糖14min、复氧供糖1h各组海马脑片顺向群峰电位的变化。实验结束后各组取海马脑片四五片用TTC染色,酶标仪测定A490值,分析脑片活性。结果:①40mL/L七氟醚预处理组较缺氧无糖组缺氧所致的诱发顺向群峰电位的消失时间明显延迟,顺向群峰电位恢复程度和顺向群峰电位恢复率显著改善,差异有统计学意义[(5.4±0.7),(2.5±0.6)min;65.6±18.4,8.4±18.2;0,75%;P<0.01]。苏-羟天冬氨酸250,500,1000μmol/L组顺向群峰电位消失时间和恢复率与缺氧无糖组差异无显著性意义(P>0.05)。②250μmol/L苏-羟天冬氨酸+七氟醚预处理组缺氧所致的诱发顺向群峰电位的消失时间明显延迟,顺向群峰电位恢复程度显著改善(P<0.01),恢复率与40mL/L七氟醚预处理组差异无显著性意义。而500μmol/L苏-羟天冬氨酸+七氟醚预处理组,1000μmol/L苏-羟天冬氨酸+七氟醚预处理组七氟醚预处理顺向群峰电位的消失时间明显加速,顺向群峰电位的恢复程度减弱(P<0.05,0.01),恢复率差异有显著性意义(P<0.05,0.01)。③海马脑片A490正常值是1.04±0.04。复氧供糖1h,缺氧无糖损伤会明显降低海马脑片TTC染色A490值(0.36±0.07),组织损伤率严重。40mL/L七氟醚预处理组、250μmol/L苏-羟天冬氨酸+七氟醚预处理组细胞损伤率低于缺氧无糖组(P<0.01,0.05);500μmol/L苏-羟天冬氨酸+七氟醚预处理组,1000μmol/L苏-羟天冬氨酸+七氟醚预处理组组织损伤百分率较40mL/L七氟醚预处理组严重(P<0.05,0.01)。结论:七氟醚预处理对海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用有可能谷氨酸转运体参与,并与抑制剂成剂量依赖性。

氧化应激在间歇低氧诱导大鼠海马损伤中作用的研究

目的 探讨氧化应激在间歇低氧（IH）诱导大鼠海马损伤中的作用.方法 30只成年雄性Sprague-Dawley 大鼠随机分成对照组（CON组）、间歇低氧组（IH组）、Melatonin组（MEL组）,每组10只.采用化学比色法测定大鼠海马组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平,并采取RT-PCR方法检测海马组织中Cu/Zn SOD、GPx、CAT的mRNA水平.结果 （1）在IH组中,MDA的水平为（1.68±0.23）μmol/g protein,均高于对照组和MEL组的（1.25±0.14）μmol/g protein和（1.35±0.18）μmol/g protein（P＜0.05或P＜0.01）;（2）在IH组中,SOD的活性、Cu/ZnSOD、GPx、CAT的mRNA表达水平分别为（43.01±4.96）103NU/g protein、0.25±0.02、0.34±0.09、0.38±0.03,均低于对照组和MEL组的（61.12±5.68）103NU/g protein和（55.98±4.65）103NU/g protein、0.48±0.06和0.43±0.08、0.55±0.07和0.54±0.05、0.57±0.04和0.53±0.07（P＜0.05,P＜0.01）.结论 间歇低氧可通过氧化应激导致大鼠海马损伤,MEL能抑制间歇缺氧导致的氧化应激,从而对间歇低氧大鼠海马损伤具有保护作用.

淫羊藿甙上调P8系快速老化小鼠海马组织脑源性神经营养因子的表达

目的 探讨淫羊藿的有效成分淫羊藿甙对P8系快速老化小鼠（SAMP8）海马组织中脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响.方法 6月龄雄性SAMP8 20只,按随机数字表法分为中药治疗组和模型对照组,每组10只;6月龄雄性抗快速老化的R系小鼠（SAM-R） 10只设为正常对照组.中药治疗组以淫羊藿甙灌胃,模型对照组及正常对照组以等剂量双蒸水灌胃.灌胃8周后,各组进行Morris水迷宫行为检测,并取海马组织采用免疫组织化学染色及Western blot检测BNDF的表达变化,并进行统计学分析.结果 Morris水迷宫行为检测发现,与模型对照组比较中药治疗组逃避潜伏期均缩短（P＜0.05）,跨平台象限游泳次数增加（P＜0.05）.免疫组织化学染色及Western blot检测结果发现,中药治疗组海马组织中脑源性神经营养因子的表达明显多于模型对照组（P＜0.05）.结论 中药淫羊藿的有效成分淫羊藿甙可上调SAMP8海马组织脑源性神经营养因子的表达,改善其学习记忆功能.

血塞通对全脑缺血／再灌注后大鼠海马回中核因子-κappaB的影响

目的探讨血塞通（XST）干预治疗sD大鼠全脑缺血／再灌注（I／R）后大脑海马回核因子一KappaBp65（NF—κBp65）的表达，阐明其在全脑I／R损伤后的保护作用。方法72只健康SD大鼠，随机分为假手术组（SO）24只，全脑I／R组24只，XST治疗组24只。采用简化的Pulsinelli等的四血管阻塞法建立急性全脑I／R损伤及XST对其作用的模型；用HE染色检测海马CA1区存活锥体细胞数目；用TUNEL原位末端标记法检测锥体细胞凋亡率；用免疫组织化学SABC法检测海马CA1区锥体细胞中NF—KBt,65的表达。结果XST组在再灌注后存活锥体细胞数持续增加，且在用药后3、12、24、48h均明显多于I／R组[（99．23±4．22）个／mmvs（75．83±7．17）个／mm，（80．93±5．36）个／mmvs（51．50±8．26）个／mm，（103．24±5．48）个／mnlvs（35．67±13．17）个／mm，（126．22±7．54）个／mmVS（9．83±4．71）个／mm]，差异均有统计学意义（P〈0．01）；XST组各时间点锥体细胞凋亡率与I／R组比较均明显降低[（8．82±2．71）％VS（22．58±4．68）％，（19．15±6．23）％vs（42．68±3．04）％，（11．82±2．87）％VS（55．51±6．81）％，（8．44±3．23）％vs（71．69±7．71）％]，差异均有统计学意义（P〈0．01）；XST组各时间点NF—κBp65表达阳性的细胞数均明显少于I／R组[（13．204-2．50）VS（18．00±1．87），（8．20±5．31）VS（41．60±3．65），（6．70±3．36）vs（55．30±5．10），（7．10±3．57）VS（72．80±4．71）]，差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。结论在全脑I／R损伤后，XST可抑制NF—KBp65的表达，抗细胞凋亡，增加存活神经元的数目而起到脑保护作用，从而为XST在脑复苏应用中提供有力的理论依据。