激动或阻断N-甲基-D天冬氨酸受体对大鼠脑海马兴奋性氨基酸释放的影响

目的:应用清醒大鼠脑微透析技术,观察N-甲基-D-天冬氨酸受体激动剂和阻断剂对大鼠海马兴奋性氨基酸释放的影响,探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体对大鼠海马兴奋性氨基酸释放的自身调节作用。方法:实验于2003-12在锦州医学院药理教研室完成。45只雄性SD大鼠,横跨海马背部植入一自制的透析探头,待大鼠清醒后24h用人造脑脊液,N-甲基-D-天冬氨酸250,500μmol/L,N-甲基-D-天冬氨酸500μmol/L+MK-801100μmol/L,MK-801100μmol/L,甘氨酸500μmol/L,7-氯犬尿烯酸200μmol/L灌流,灌流速度为5μL/min,每20min收集一次透析液,采用邻苯二甲醛-β-巯基乙醇衍生化反相梯度洗脱荧光检测透析液中谷氨酸和天冬氨酸的水平。结果:45只大鼠均进入结果分析。海马内局部灌流N-甲基-D-天冬氨酸250,500μmol/L可明显增加细胞外基础状态下谷氨酸和天冬氨酸的水平。非竞争性N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK-801(100μmol/L)可拮抗N-甲基-D-天冬氨酸(500μmol/L)引起的谷氨酸释放增加作用。单独应用MK-801(100μmol/L)对基础状态下谷氨酸的水平没有影响。局部灌流N-甲基-D-天冬氨酸受体协同激动剂甘氨酸500μmol/L也可明显增加细胞外基础状态下谷氨酸的水平。局部灌流N-甲基-D-天冬氨酸上甘氨酸部位的选择性阻断剂7-氯犬尿烯酸200μmol/L可以拮抗甘氨酸引起的谷氨酸释放增加作用。结论:兴奋性氨基酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体的激活增加海马内兴奋性神经递质的释放,这种N-甲基-D-天冬氨酸受体可能存在于突触前膜(兴奋性神经末梢膜上),即自身调节受体正反馈调节兴奋性氨基酸的释放。

灯盏花素对缺血再灌注沙土鼠海马ATP含量变化和兴奋性氨基酸释放的影响

目的研究灯盏花素对缺血再灌注沙土鼠海马ATP含量、ATP酶活性和兴奋性氨基酸释放的影响。方法脑缺血10 min建立沙土鼠缺血再灌注模型。90只沙土鼠分为假手术组、脑缺血组和灯盏花素组。测定脑缺血后和再灌注1、12和24 h海马ATP含量、ATP酶活性和兴奋性氨基酸含量。结果脑缺血组,ATP、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶含量明显下降(P<0.01),谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)含量明显增加(P<0.01),谷氨酰胺(Gln)含量在缺血时降低,再灌注后增加(P<0.01)。灯盏花素组,ATP、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶含量高于脑缺血组(P<0.01)。Glu、Asp、GABA含量明显低于脑缺血组(P<0.01),Gln含量高于脑缺血组(P<0.01)。结论灯盏花素明显增加脑缺血及再灌注后ATP含量和ATP酶活性,降低兴奋性氨基酸释放,可减轻脑缺血再灌注损伤。

兴奋性氨基酸及其受体阻滞剂在脑缺血性大鼠海马损伤中的作用

目的 通过制作大鼠脑缺血模型和运用兴奋性氨基酸NMDA型受体阻滞剂MK 80 1,观察海马兴奋性氨基酸 (EAA)的变化及其所致细胞结构改变。方法 采用Pulsinelli氏改良方法 ,分别测定大鼠海马在脑缺血不同时期EAA的改变及MK 80 1对EAA所致结构变化的影响。结果 提示脑缺血时EAA明显升高 ,且缺血时间越长释放越多 ,经过MK 80 1治疗细胞损伤明显减少。结论 大鼠脑缺血后EAA明显升高 ;MK 80 1能阻止EAA对脑的损伤 。

黄芩素甙对脑缺血后大鼠海马组织兴奋性氨基酸含量的影响

目的观察黄芩素甙对脑缺血后大鼠海马组织兴奋性氨基酸含量的影响，探讨黄芩素甙脑保护作用的机制。方法42只雄性SD大鼠，体质量220～300g，随机分成3组：假手术组（Sham组，n=6）、对照组（Con组）和黄芩素甙组（Bre组）；后2组又分为再灌注6h、再灌注2d和再灌注4d3个亚组，每组6只。采用四血管阻断法制作大鼠脑缺血模型，脑缺血时间10min。光镜下观察海马CA1区神经元的存活情况，应用反相高效液相法测定海马组织中谷氨酸（Glu）和天冬氨酸（Asp）的含量。结果再灌注4d时，Sham组海马CA1区仅有少量神经元死亡，Con组海马CA1区大量神经元死亡，Bre组可见部分神经元死亡；再灌注6h时，Con组和Bre组的Glu和Asp含量明显高于Sham组（P〈0．01），Bre组的Glu和Asp含量明显低于Con组（P〈0．05），再灌注2d时，Con组和Bre组的Asp含量亦明显高于Sham组（P〈0．05或P〈0．01）。结论黄芩素甙可能通过抑制脑缺血后兴奋性氨基酸含量的增加而发挥其脑保护作用。

急性应激大鼠的海马DG区兴奋性氨基酸在空间学习记忆中的变化

目的观察海马齿状回(DG)区两种兴奋性氨基酸在急性应激模型大鼠空间学习记忆中的变化,初步探讨应激影响空间学习记忆的部分神经化学机制。方法本实验采用束缚大鼠2h的方法制备急性应激模型,观察大鼠空间学习记忆能力和海马DG区的谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)的含量变化,分别利用Morris水迷宫和脑部微量透析法和高效液相色谱法。结果 1)在Morris水迷宫的定位航行实验中,急性应激组的平均逃避潜伏期明显长于对照组(P<0.05);而在空间探索实验中,穿越原站台区次数两组间无显著性差异(P>0.05)。2)在MWM训练第二天,海马DG区Asp含量在对照组有增加趋势,而在急性应激组有下降趋势,两组间比较有统计学意义(P<0.05);两组大鼠海马DG区Glu的含量均未出现明显的变化。结论急性应激降低大鼠的空间学习能力,这可能与海马DG区Asp的降低相关。

实验性癫痫时大鼠海马内兴奋性氨基酸受体对内阿片肽含量的影响

应用免疫组织化学方法观察了青霉素致痫及海马内微量注射NMDA受体拮抗剂MK801（5－methy1－10，11－dihydro－5H－dibenzo[a，d]cycloheptan－5，10－iminemaleate)和非NMDA受体拮抗剂DNQX（6，7－dinitroquinoxaline－2，3－dione）后，大鼠海马内强啡肽A1~17和亮啡肽的含量变化。结果发现：在青霉素致痫4h后，海马苔样纤维和门区强啡肽A1~17的含量明显减少，海马CA1区．苔样纤维和门区的亮啡肽含量明显增加。在青霉素致痫前分别在海马内微量注射MK801（6μg）和DNQX（4μg），则在癫痫发作减弱同时，海马内强啡肽A1~17含量较单纯青霉素致痫组增加，亮啡肽含量下降。结果提示：青霉素致痫引起大鼠脑内强啡肽A1~17和亮啡肽含量变化，可能和NMDA受体和非NMDA受体的参与有关。

P物质和兴奋性氨基酸在初级感觉神经末梢递质释放中的协同作用

Ｐ物质和兴奋性氨基酸在初级感觉神经末梢递质释放中的协同作用司军强综述李之望审阅（新疆石河子医学院生理研究室石河子８３２００２同济医科大学实验医学研究中心生物工程电生理室武汉４３００３０）初级感觉传入神经中较细的Ｃ类和Ａδ类纤维被认为与伤害性信息的传递...

大鼠脑缺血再灌注后海马组织兴奋性氨基酸含量的动态观察

目的:观察大鼠脑缺血再灌注后海马组织兴奋性氨基酸(Excitatory amino acids,EAA)含量的动态变化。方法:阻断大鼠双侧颈总动脉进行缺血再灌注,于术后第1、7、15天用氨基酸自动分析仪测海马组织EAA含量。结果:第1天模型大鼠Glu、Asp含量分别是:8.26±2.13、2.10±0.93μmol·g^(-1),第7天二者含量分别是:7.27±2.20、1.87±2.01μmol·g^(-1),均较正常对照组显著降低(P<0.05—0.01);第15天二者含量分别是:9.36±2.24、1.42±1.21μmol·g^(-1),明显低于正常组。结论:脑缺血再灌注可使海马组织EAA异常释放,高浓度的EAA在脑的缺血再灌注损伤中起重要作用。

兴奋性氨基酸在短暂性脑缺血后海马DND发生机制中的作用

本实验首先通过结扎沙土鼠双侧颈总动脉10分钟再灌流7天,造成海马DND模型,以计数海马CA_1区神经元密度作为指标,观察谷氨酸钠和氯胺酮对海马DND的影响;用氨基酸自动分析技术测定脑缺血10分钟时背侧海马氨基酸含量。结果示谷氨酸钠加重海马DND损伤;氯胺酮对海马DND有明显保护作用;短暂性脑缺血10分钟时兴奋性氨基酸含量升高。此结果均直接或间接说明兴奋性氨基酸在海马DND发生机制中起着重要作用。

酒精戒断对清醒大鼠海马DG区部分兴奋性氨基酸的影响

目的探讨在清醒状态下大鼠长期饮酒停饮后出现戒断症状时海马DG(dentate gyrus)区部分兴奋性氨基酸含量变化。方法成年Wistar大鼠(300g^350g)40只随机分成对照组(n=10)和酒精组(n=30)。酒精组用50%酒精按10ml/kg/d灌胃1周(n=10)、2周(n=10)、4周(n=10),对照组给予同等剂量的生理盐水灌胃4周。用微透析法和高效液相色谱法分别测定末次饮酒6h、30h、48h、72h海马DG区谷氨酸及天冬氨酸含量,同时观察大鼠撤除酒精后不同时间戒断症状。结果2周酒精组及4周酒精组在末次饮酒30h、48h时,清醒大鼠海马DG区天冬氨酸及谷氨酸水平较末次饮酒6h显著上升(P<0.05),末次饮酒72h与末次饮酒6h无明显变化;兴奋性氨基酸含量升高时间与戒断症状明显出现时间基本一致;1周酒精组、对照组在上述各时段天冬氨酸及谷氨酸水平无显著变化。结论(1)酒精戒断症状与饮酒时间长短呈正相关;(2)酒精戒断综合征与海马DG区细胞外液兴奋性氨基酸神经递质含量增加有关。

腺相关病毒介导shRNA敲减小鼠海马兴奋性氨基酸转运体3动物模型的构建

目的构建敲减小鼠海马神经元兴奋性氨基酸转运体3(excitatory amino acid transporter 3,EAAT3)重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体,建立一种小鼠海马EAAT3敲减动物模型。方法基于SLC1A1(solute carrierfamily 1 member 1)基因mRNA 序列设计4条shRNA(short hairpin RNA),将其模板DNA与酶切后的AAV-GP-1(pAAV-U6-EGFP)载体质粒连接、转化并测序鉴定得到重组质粒,将重组质粒、pHelper包装质粒和pAAV-DJ辅助质粒共同转染至AAV-293细胞包装得到rAAV;用所得rAAV侵染HT-22细胞,72h后RT-qPCR检测SLC1A1mRNA表达水平;36只成年C57小鼠随机分为6组,每组6只,予海马注射rAAV-shRNA-SLC1A1-2-EGFP病毒液1μL/侧,分别于注射后即刻、24h、7d、14d、21d、28d取双侧海马组织,Westernblot检测EAAT3表达水平。结果经测序重组质粒核苷酸序列正确,包装所得病毒浓缩滴度为1×1013TU/ml;rAAV感染HT-22细胞72h后SLC1A1表达量明显降低且显著低于阴性对照(P<0.01,n=3);小鼠海马注射rAAV-shRNA-SLC1A1-2-EGFP7d后EAAT3相对表达量下降(P<0.01),注射后21d、28d表达进一步降低(P<0.01)。结论成功构建介导shRNA表达的重组腺相关病毒系统,建立了一种有效的小鼠海马EAAT3敲减动物模型。

兴奋性氨基酸在缺血性海马神经元损害中的作用的研究

采用大鼠全脑缺血模型,研究脑缺血再灌流海马氨基酸含量的动态变化及相应病理改变,观察NMDA(N-甲基-D-门冬氮酸)受体拮抗剂MK-801的疗效,提示兴奋性氨基酸(Glu,Asp)可能参与海马神经元损害,MK-801能有效防止海马CA_1区迟发性神经元坏死。兴奋性氨基酸受体拮抗剂的研究,将为临床缺血性中风治疗提供新的途径。

慢性束缚应激对老龄大鼠空间学习和记忆能力及海马齿状回区兴奋性氨基酸水平的影响

目的:探讨慢性束缚应激(CRS)对老龄大鼠学习和记忆能力及海马齿状回(DG)区兴奋性氨基酸水平的影响,初步阐明CRS影响空间学习和记忆能力的部分神经化学机制。方法:16只18月龄SD雄性大鼠随机分为对照组和CRS组(每组8只),CRS组大鼠每天给予2h的CRS,连续30d。利用Morris水迷宫(MWM)实验检测CRS大鼠空间学习记忆能力,采用脑部微量透析法和高效液相色谱法检测在MWM实验过程中大鼠海马DG区兴奋性氨基酸[谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)]水平,采用酶联免疫法测定大鼠血清中皮质酮(CORT)和肾上腺素(EPI)水平。结果:MWM实验,与对照组比较,CRS组第2~4天大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.05),且第5天在目标象限游泳的时间明显减少(P<0.05)。与训练前比较,对照组大鼠海马DG区Asp水平在MWM实验第2天明显增加(P<0.05);与对照组比较,CRS组大鼠DG区Asp水平在MWM实验第3天明显下降(P<0.05);与训练前比较,在MWM实验过程中2组大鼠海马DG区Glu水平均明显增加(P<0.05),但2组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,CRS组大鼠血清中CORT和EPI水平明显升高(P<0.05)。结论:CRS降低老年大鼠的空间学习和记忆能力,这可能与大鼠海马DG区Asp水平降低有关。

兴奋性氨基酸毒性与缺血性脑损伤

氨基酸作为重要的神经递质 ,对正常大脑的生理活动有调节作用。脑缺血时 ,神经元释放的谷氨酸是引起神经元死亡的重要原因。研究表明 ,除谷氨酸具有损伤效应外 ,甘氨酸 (Gly)也有协同作用 ,其释放增加能扩大脑缺血损害。γ 氨基丁酸 (GABA)能抑制兴奋性氨基酸释放或对抗氨基酸毒性。因为对神经元的作用各有侧重 ,所以综合分析它们的浓度变化和相互关系对缺血性脑损伤神经元死亡的本质将会有更进一步的认识 ,并为脑保护治疗的开辟新思路。

抗痫增智颗粒对大脑兴奋性氨基酸的影响

目的:探求抗痫增智颗粒对戊四唑(Pentylenetetrazole,PTZ)致点燃模型大鼠脑内NMDA受体活性及在水迷宫中学习、记忆能力的影响。方法:用亚惊厥剂量的PTZ(32mg/kg)诱发大鼠点燃发作,进行以下观察:①学习记忆能力的测试;②大脑皮层、海马NMDA受体结合量的测试。结果:抗痫增智颗粒能提高点燃模型鼠的学习记忆功能;抑制大脑皮层、海马NMDA受体的活性。结论:该方抗痫、提高学习记忆机制可能与调节NMDA受体活性有关。

ZD7288及cAMP对培养海马神经元氨基酸释放及谷氨酸引起的钙内流的影响

目的：研究HCN通道对体外培养海马神经元氨基酸释放的影响。方法：体外培养新生大鼠海马神经元，并以HCN通道特异阻滞剂ZD7288及激动剂cAMP干预；HPLC测定培养海马神经元细胞外液中谷氨酸、天冬氨酸、甘氨酸及γ-氨基丁酸含量．结果：①正常细胞对照组、cAMP 5μM、cAMP 50μM组、ZD7288 5μM及50μM组细胞外液谷氨酸含量依次为99．2±17．7、136．1±25．7、188．1±47．7、

HCN通道阻断剂对培养海马神经元氨基酸释放及谷氨酸引起的细胞钙内流的影响

超极化激活及环化核苷酸门控阳离子通道（hyperpolarization-activated，cyclic nucleotide-gatedcation chartnel，HCN），广泛参与机体的多种生理功能如心跳，呼吸，睡眠与觉醒，神经递质的分泌与释放，突触传递的整合等，并参与多种神经系统疾病如癫痫、神经损伤性疼痛、脑缺血及心律失常等疾病的病理生理过程的调节，本研究应用HCN通道阻断剂ZD7288，观察其对原代培养大鼠海马神经元兴奋性氨基酸的释放及由谷氨酸引起细胞钙内流的影响，

慢性应激大鼠齿状回的兴奋性氨基酸在空间学习中的变化

目的:观察慢性应激(chronic stress,CS)大鼠海马齿状回区(dentate gyrus,DG)的兴奋性氨基酸(ex⁃citatory amino acids,EAAs)及突触传递效应在空间学习记忆过程中的变化,探讨CS影响大鼠空间学习和记忆功能的神经化学机制。方法:16只SD雄性大鼠随机分为对照组和CS组(每组8只),CS组大鼠每天随机给予一种应激刺激,持续30 d,而对照组大鼠不予应激干预。用Morris水迷宫观察大鼠的空间学习和记忆能力,同时用脑部微量透析法和高效液相色谱法测定海马DG区EEAs[(谷氨酸(glutamate,Glu)和天冬氨酸(aspartate,Asp)]含量,并用在体生物电记录法记录同区域的场兴奋性突触后电位(field excitatory postsynaptic potential,fEPSP)幅值。结果:在水迷宫训练过程中,与对照组相比,CS组大鼠在训练第1~4天的逃避潜伏期均显著延长(P<0.05),且第5天观察的目标象限游泳路程百分比显著减少(P<0.05)。在水迷宫训练过程中,对照组大鼠海马DG区的fEPSP幅值及Glu和Asp的水平较训练前逐渐增加后回降(P<0.05),而CS组大鼠DG区的这些指标在整个水迷宫训练过程中均较训练前无显著性变化(P>0.05);与对照组相比,CS组大鼠DG区的fEPSP幅值和Asp水平在水迷宫训练的第3天显著降低,而Glu水平在训练的第2到第4天均显著降低(P<0.05)。结论:慢性应激可通过抑制空间学习过程中的大鼠海马DG区EAAs的增加以及降低突触传递效应,损害大鼠的空间学习与记忆功能。

兴奋性氨基酸受体与细胞内Ca^(++)的调节

近年来,科学研究者正以惊人的速度搞清了兴奋性氨基酸的实体。仅在10年前,对谷氨酸是否是兴奋性传导物质还持有怀疑,不相信这一进展。打开这个突破口的是发现了NMDA(N-甲基D-天门冬酰胺酸)受体,发现了对被活化的NMDA受体具有选择性拮抗作用的氨基亚磷羧基戊酸甘油脂酸等药物。谷氨酸受体分为“NMDA”受体和完全不受NMDA受体的拮抗药影响型的“非NMDA受体”。NMDA受体与镁离子结合,通过除极将其除掉。