EGb761对NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的 探讨银杏叶提取物 (EGb761 )对 NO供体硝普钠 (SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 采用 MTT比色分析测细胞存活率、 Hoechst 332 58荧光染色及 DNA琼脂糖凝胶电泳分析等方法检测凋亡。结果 不同剂量 EGb 761预处理海马神经元 6 h可剂量依赖地对抗 SNP引起的神经元凋亡 ,提高神经元的存活率 ;减少 SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象 ;DNA凝胶电泳图谱未见典型的“梯子状”改变。结论 EGb 761对 NO供体

穴位埋线对大鼠癫痫持续状态后海马神经元凋亡及相关基因表达的影响

[目的]观察穴位埋线对大鼠癫痫持续状态(SE)后海马神经元凋亡及凋亡相关基因的影响。[方法]将40只SD大鼠随机分成正常组、造模组、埋线组、针刺组、西药组。用贝美格注射液腹腔注射法诱导大鼠癫痫持续状态。造模成功后48h,采用Tunel法和免疫组化法检测各组神经元凋亡及凋亡相关基因P53和B淋巴细胞-2(Bcl-2)的表达。[结果]与模型组相比,埋线组、针刺组、西药组的细胞凋亡指数及P53降低、Bcl-2增高。[结论]穴位埋线可能通过抑制P53蛋白,提高Bcl-2蛋白的表达,阻止海马神经元细胞凋亡的发生发展,减轻SE发生后对大脑的损害。

大鼠海马认知障碍对糖脂代谢的影响及其与海马神经元凋亡的关系

目的探讨大鼠海马认知障碍对糖脂代谢的影响及其与海马神经元凋亡的关系。方法采用Aβ1~42海马注射构建认知障碍大鼠模型,利用全自动生化分析仪检测大鼠血糖血脂水平,TUNEL法检测大鼠海马神经元凋亡。结果 1实验组大鼠FPG为(7.83±0.31)mmol/L、TG为(2.30±0.14)mmol/L、TC为(4.55±0.15)mmol/L、LDL为(2.39±0.08)mmol/L,均明显高于假手术组和对照组(P<0.05)。2实验组大鼠海马神经元凋亡指数为71.37%±3.15%,假手术组和对照组分别为18.66%±3.20%、15.36%±4.25%,组间比较有显著性差异(P<0.05)。结论海马认知障碍可引起血糖血脂水平升高,其机制可能与海马神经元凋亡有关。

JNK信号转导通路在Aβ_(25-35)诱导大鼠原代海马神经元凋亡中作用机制的研究

目的 研究Aβ2 5 35诱导海马神经元凋亡的机制以及JNK抑制剂SP6 0 0 12 5的保护作用 ,探讨在Aβ2 5 35细胞毒性中JNK c Jun信号转导通路的可能作用机制。方法 将体外海马原代神经元培养至第 7天 ,用 β淀粉样蛋白2 5 35片段 (Aβ2 5 35)和JNK抑制剂 (SP6 0 0 12 5 )对细胞进行处理。用光镜进行海马原代神经元形态学观察 ,MTT检测不同时间点的细胞活性 ,以及用免疫印迹法检测不同时间点的JNK及c Jun蛋白活性。结果 大鼠原代海马神经元经过Aβ2 5 35处理后 ,发生凋亡 ,细胞生存率呈时间依赖性下降 ,经过免疫学方法检测发现细胞在Aβ2 5 35处理早期出现磷酸化JNK和磷酸化c Jun的表达增高 ,且这一过程可被SP6 0 0 12 5抑制。MTT检测发现在使用SP6 0 0 12 5后 ,细胞生存率上升 ,具有显著性差异。 结论 体外原代海马神经元培养实验表明Aβ2 5 35在诱导原代海马神经元凋亡过程中 ,c Jun氨基端激酶 (JNK)及其底物转录因子c Jun被激活。使用JNK抑制剂SP6 0 0 12 5后 ,JNK和c Jun均被抑制 ,且海马原代神经元的生存率明显提高 ,生存状态明显改善。研究表明JNK信号转导通路可能促成Aβ的细胞毒性作用。

红藻氨酸诱导大鼠癫痫发作时海马神经元凋亡变化的动态观察

目的:探讨大鼠癫痫发作时海马神经元凋亡变化。方法:采用红藻酸氨(KA)诱导大鼠癫痫发作模型,观察行为学及脑电图变化;用神经元尼氏体亚甲蓝特殊染色法观察大鼠癫痫发作时海马CA1区神经元损害情况;用原位细胞凋亡检测法观察癫痫发作时海马CA1区神经元凋亡情况及苯巴比妥干预后神经元凋亡的变化。结果:KA注射后大鼠出现严重边缘性惊厥,脑电图表现为持续性癫痫样放电。海马细胞在KA注射后8h开始出现凋亡阳性细胞,48h达高峰,主要表现在CA1区锥体细胞,经苯巴比妥干预后凋亡细胞明显减少。结论:癫痫发作后的迟发性神经元死亡很可能经由凋亡途径,早期终止癫痫发作可抑制海马神经元凋亡。

BDNF/TrkB通路对硫化氢减轻同型半胱氨酸诱导大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨BDNF受体酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)通路对硫化氢(H2S)减轻同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠海马神经元凋亡的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为六组,分别为对照组、损伤组(Hcy,0.6μmol)、损伤+保护组[Hcy(0.6μmol)+NaHS(100μmol/kg)]、对照+保护组[正常+NaHS(100μmol/kg)]及抑制保护组[Hcy(0.6μmol)+NaHS(100μmol/kg)+BDNF/TrkB的特异性抑制剂K252a(1μg/d)]、对照+抑制组(正常+K252a 1μg/d),每组8只;Tunel染色法分析大鼠海马CA1区神经元的凋亡情况,蛋白质印迹法(Western blot)分析Caspase-3、Bcl-2在海马中的表达。结果与损伤组比较,损伤+保护组大鼠海马CA1区神经元着色细胞数减少,着色变浅,凋亡百分率明显降低(P<0.01),并且Caspase-3蛋白相对表达量明显降低,而Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.01);与损伤+保护组比较,抑制保护组大鼠海马CA1区神经细胞凋亡率明显增高(P<0.01),Caspase-3蛋白相对表达水平升高,而Bcl-2蛋白相对表达水平降低(P<0.01)。结论BDNF/TrkB通路参与硫化氢减轻同型半胱氨酸诱导的大鼠海马神经元凋亡。

红景天苷对缺氧诱导乳鼠海马神经元凋亡的抑制作用及机制

目的探讨红景天苷对缺氧诱导乳鼠海马神经元凋亡的抑制作用及其可能的机制。方法分离培养乳鼠元代海马神经元,用免疫荧光法证实其纯度,并将其随机分为5组,正常对照组用常规培养液培养;缺氧组构建缺氧凋亡模型;红景天苷预处理组先用不同剂量(10、50、100μg/m L)红景天苷预处理24 h后构建缺氧凋亡模型。用MTT法检测海马神经元凋亡情况(细胞存活率);用相应试剂盒检测神经元培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性;用Western blotting法检测神经元中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达。结果培养第5~7天,神经元纯度> 95%。与正常对照组比较,缺氧组海马神经元存活率低(P <0. 05),LDH、CK活性高(P均<0. 05);与缺氧组比较,50、100μg/m L红景天苷预处理组海马神经元存活率高(P均<0. 05),LDH、CK活性低(P均<0. 05),且呈剂量依赖性;正常对照组与100μg/m L红景天苷预处理组比较差异无统计学意义(P均> 0. 05)。与正常对照组比较,缺氧组HIF-1α蛋白相对表达量高(P <0. 05);与缺氧组比较,10、50、100μg/m L红景天苷预处理组HIF-1α蛋白相对表达量高(P均<0. 05),且呈剂量依赖性。结论红景天苷可抑制缺氧诱导的乳鼠神经元凋亡,且呈剂量依赖性;其作用机制可能与上调HIF-1α蛋白表达有关。

迷迭香酸抑制NLRP3炎性小体的活化对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织损伤和海马区神经元凋亡的影响

目的探究迷迭香酸对NLRP3炎性小体活化的影响,从而进一步探究其对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织损伤和海马神经元凋亡的影响。方法采用控制性皮层撞击损伤(CCI)模型法建立大鼠创伤性颅脑损伤模型,将小鼠随机分成5组,加药组分别腹腔注射5、10、20 mg/kg迷迭香酸,然后评估大鼠的神经功能缺陷评分;计算各组大鼠脑含水率及脑指数;苏木精-伊红染色观察各组大鼠脑组织海马区神经元病理学变化;TUNEL检测神经元凋亡情况;尼氏小体染色观察神经元损伤情况;蛋白印迹法检测各组大鼠脑前额叶脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、Caspase-3的蛋白表达水平;试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species,ROS),超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD),乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的含量。结果与健康对照组比较,脑损伤模型组神经功能缺陷评分、脑含水率以及脑指数均显著升高(P<0.05),神经元凋亡率,BDNF、NGF、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ROS和LDH的含量均显著升高(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05)。与脑损伤模型组比较,迷迭香酸中、高剂量组神经功能缺陷评分、脑含水率以及脑指数均显著降低(P<0.05),海马区神经元病变范围及程度减轻,海马区神经元损伤程度减轻。与脑损伤模型组比较,迷迭香酸中、高剂量组神经元凋亡率,BDNF、NGF、NLRP3、ASC、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ROS和LDH的含量均显著降低(P<0.05);SOD含量显著升高(P<0.05)。结论迷迭香酸可抑制NLRP3炎性小体的活化和海马区神经元凋亡并减轻创伤性颅脑损伤大鼠脑组织损伤。

芍药苷对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法分离培养胎鼠海马神经元细胞,细胞免疫荧光染色鉴定纯度。MTT测定海马神经元细胞活力以确定醋酸铅最适造模浓度及时间,同时筛选合适剂量PF干预海马神经元凋亡。依据MTT测定结果,分为空白组、模型组和20,40,80μmol·L^(-1) PF组干预海马神经元细胞,作用24 h后,加醋酸铅染毒,检测细胞色素C(cytochromeC,Cyt-C)含量、线粒体膜电位及细胞内Ca^(2+)浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting测定海马神经元细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-9、cleaved-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果细胞免疫荧光染色鉴定结果显示分离培养的细胞为海马神经元细胞,且纯度较高。MTT测定结果显示醋酸铅最适造模浓度及时间为25μmol·L^(-1)染毒24 h;PF剂量为20,40,80μmol·L^(-1)可显著改善海马神经元细胞活性,呈剂量依赖性。与空白组相比,模型组Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca^(2+)浓度显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。与模型组相比,40μmol·L^(-1) PF组和80μmol·L^(-1) PF组可降低Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca^(2+)浓度(P<0.05或P<0.01),升高线粒体膜电位(P<0.01),20μmol·L^(-1)PF组可显著升高线粒体膜电位(P<0.05)。此外,一定剂量的PF可下调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论PF可抑制醋酸铅诱导的海马神经元凋亡,可通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达发挥神经保护作用。

细胞内钙离子在高温诱导海马神经元凋亡中的作用机制

目的探讨Ca2+在高温诱导海马神经元凋亡中的作用,为丹曲林钠在热致脑损伤疾病中的应用提供实验依据。方法通过体外建立高温诱导原代培养的海马神经元凋亡模型,应用Ca2+特异性阻断剂丹曲林钠,观察其对神经元凋亡率、细胞内Ca2+荧光强度及其动态变化的影响。结果丹曲林钠能够明显降低高温处理后海马神经元的凋亡率;42℃处理并加入丹曲林钠组的扫描结果显示,Ca2+荧光强度为107.35±6.0,较正常培养的细胞内Ca2+荧光强度(159.12±33.8)明显降低,加入丹曲林钠20～25s后Ca2+浓度即开始下降,约50s后下降至最低值,然后稳定于低于原来基线的水平。结论丹曲林钠在高温诱导的海马神经细胞凋亡中具有重要的保护作用,在预防热致脑损伤疾病中具有一定的应用价值。

TGF-β1抑制大鼠创伤性颅脑损伤后海马神经元的凋亡

目的转化生长因子β1(TGF-β1)在星形胶质细胞增生和神经元的存活方面都发挥这重要作用,但是其在创伤性颅脑损伤(TBI)中的作用还未见报道。方法本课题组先前的研究利用大鼠模型发现在大鼠颅脑损伤后,TGF-β1的表达显著上调,表明TGF-β1参与到创伤性颅脑损伤修复的过程中。结果本研究聚焦在TGF-β1对TBI后海马神经元凋亡的影响,神经元的免疫荧光染色和Western blot结果显示:对TBI后的海马神经元给予适当浓度及时程的TGF-β1处理,海马神经元的的凋亡明显降低。结论这些结果的发现,将有助于更好的理解TGF-β1在大鼠创伤性颅脑损伤中的作用,也有望使得TGF-β1成为临床上救治创伤性颅脑损伤的靶点。

基于Shh-Gli1信号通路探讨电针对中风后抑郁大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的:基于Shh-Gli1信号通路探索电针对中风后抑郁(PSD)大鼠海马神经元凋亡的保护作用。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、电针+环巴胺组。采用MCAO术和CUMS法建立PSD模型。观察大鼠糖水实验及旷场实验行为,尼氏体染色法观察大鼠海马神经元病理学形态,免疫组化法检测大鼠海马Bcl-2、Bax的表达,免疫印迹法检测大鼠海马Shh、Gli1的蛋白表达,荧光定量PCR法检测大鼠海马Shh、Gli1的基因表达。结果:PSD大鼠较正常组的糖水偏爱比、旷场移动次数减少(P<0.01),海马神经元减少(P<0.01),Bax增高(P<0.01)、Bcl-2和Bcl-2/Bax降低(P<0.01),Shh、Gli1蛋白和Gli1基因降低(P<0.05,P<0.01);电针组大鼠较模型组的糖水偏爱比、旷场移动次数上升(P<0.01),海马神经元增加(P<0.01),Bax降低(P<0.05)、Bcl-2和Bcl-2/Bax升高(P<0.01),Shh、Gli1蛋白升高(P<0.01);电针+环巴胺组大鼠较电针组的糖水偏爱比、移动次数降低(P<0.01),海马神经元减少(P<0.01)。结论:电针对海马神经元凋亡有保护作用,进而改善PSD的抑郁症状,其与激活海马区Shh-Gli1信号通路,增加Bcl-2表达、减少Bax表达并增加Bcl-2/Bax比率有关。

小牛血清去蛋白注射液对血管性痴呆小鼠海马神经元凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响

血管性痴呆（vascular dementia，VD）是由各种脑血管病引起的脑功能障碍而产生的获得性智能损害综合征。许多VD动物模型实验表明，基因及其表达与脑细胞凋亡有着密切的关系。以往的实验证明，小牛血清去蛋白制剂对局灶性脑缺血模型脑缺血诱导神经细胞凋亡和脑部缺血性损害所引起的神经功能缺损有保护作用。我们旨在对小牛血清去蛋白注射液（DCSI）的VD脑保护作用机制做进一步探讨，为临床应用提供更深层次的理论依据。

加味不忘散对阿尔茨海默病模型大鼠海马神经元细胞凋亡及炎症反应的影响

目的:研究中药免煎剂加味不忘散对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元细胞凋亡及炎症反应的影响,初步探讨其发挥作用可能的机制。方法:SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、低剂量组及高剂量组,分别采用HE染色、TUNEL染色观察海马神经元细胞形态学改变及海马神经元细胞凋亡情况,使用ELISA法测定IL-1β、IL-6、TNF-α含量。结果:HE染色观察结果示,模型组海马神经元细胞形态异常,低、高剂量组海马神经元细胞较模型组均有不同程度的改善;TUNEL染色结果示,模型组较假手术组凋亡细胞数明显增加,低剂量组未见凋亡细胞数减少,而高剂量组凋亡细胞数减少;ELISA结果示,低剂量组海马组织中TNF-α水平较模型组降低,而IL-1β及IL-6水平并未降低,高剂量组海马组织中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低。结论:加味不忘散可抑制Aβ1-42所致的海马炎症因子释放以及神经元细胞凋亡,提示加味不忘散可能通过抑制炎症反应发挥其神经元保护作用。

长链非编码RNA核富含丰富的转录本1对癫痫模型海马神经元凋亡的影响和作用机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)核富含丰富的转录本1(NEAT1)对癫痫细胞模型海马神经元凋亡的影响及作用机制,以期为NEAT1成为癫痫治疗的新靶点提供依据。方法于2019年8月—2020年10月期间,体外培养大鼠海马神经元细胞,无镁诱导制备癫痫海马神经元模型,实验分为:对照组(正常细胞外液)、模型组(无镁细胞外液)、转染对照组(转染非特异性siRNA+无镁细胞外液)和转染组(转染NEAT1特异性siRNA+无镁细胞外液)。实时荧光定量PCR(qPCR)检测NEAT1和miR-29b-3p的表达变化,双荧光素酶报告基因实验检测NEAT1是否靶向调控miR-29b-3p,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测海马神经元细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)的表达水平。结果与对照组相比,模型组海马神经元凋亡率及NEAT1、Bax、TLR4和NF-κB的表达水平升高(F=50.980、73.668、65.635、13.203、10.292,P<0.05),IL-1、IL-6和TNF-α的含量增多(F=33.107、33.857、51.129,P<0.05),miR-29b-3p和Bcl-2的表达水平降低(F=145.023、67.655,P<0.05);而抑制NEAT1的表达能够降低神经元凋亡,抑制Bax、TLR4和NF-κB的表达,促进miR-29b-3p和Bcl-2的表达,减少IL-1、IL-6和TNF-α的分泌。双荧光素酶报告基因实验证实NEAT1和miR-29b-3p的靶向关系。结论lncRNA NEAT1靶向下调miR-29b-3p的表达阻断TLR4/NF-κB信号通路来抑制癫痫模型海马神经元的凋亡。

香萱益神方对血管性痴呆模型大鼠神经元凋亡机制研究

目的:探讨香萱益神方治疗血管性痴呆(VD)模型大鼠认知功能作用及其对神经元凋亡机制的研究。方法:两血管阻断法建立VD大鼠模型,给予中药方香萱益神方灌胃治疗6周,分别于造模后、中药喂养6周后进行Morris水迷宫行为学检测,测试大鼠认知行为能力改变,行为学测试结束后,检测VD模型大鼠海马中海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)表达水平的变化。结果:香萱益神方治疗6周后,血管性痴呆大鼠模型学习记忆能力得到改善,上调脑内海马组织神经营养因子水平,海马神经元凋亡率下降。结论:香萱益神方是治疗血管性痴呆的有效方剂,可以有效改善VD大鼠模型认知行为功能的障碍情况,起到减少海马神经元细胞凋亡,诱导海马神经元细胞修复的作用。香萱益神方可能是通过激活BDNF相关通路,起到保护海马神经元的作用。

吗啡预处理对脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡及bcl-2的影响

凋亡是脑缺血后神经元丢失的重要途径，抑制神经元凋亡是目前治疗脑缺血损伤的研究热点。本研究旨在观察吗啡对海马神经元凋亡的影响，探讨吗啡是否具有脑保护作用及可能的作用机制。