芍药苷对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对醋酸铅诱导海马神经元凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法分离培养胎鼠海马神经元细胞,细胞免疫荧光染色鉴定纯度。MTT测定海马神经元细胞活力以确定醋酸铅最适造模浓度及时间,同时筛选合适剂量PF干预海马神经元凋亡。依据MTT测定结果,分为空白组、模型组和20,40,80μmol·L^(-1) PF组干预海马神经元细胞,作用24 h后,加醋酸铅染毒,检测细胞色素C(cytochromeC,Cyt-C)含量、线粒体膜电位及细胞内Ca^(2+)浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blotting测定海马神经元细胞中caspase-3、cleaved-caspase-3、caspase-8、cleaved-caspase-8、caspase-9、cleaved-caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果细胞免疫荧光染色鉴定结果显示分离培养的细胞为海马神经元细胞,且纯度较高。MTT测定结果显示醋酸铅最适造模浓度及时间为25μmol·L^(-1)染毒24 h;PF剂量为20,40,80μmol·L^(-1)可显著改善海马神经元细胞活性,呈剂量依赖性。与空白组相比,模型组Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca^(2+)浓度显著升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01)。与模型组相比,40μmol·L^(-1) PF组和80μmol·L^(-1) PF组可降低Cyt-C含量、凋亡率、细胞内Ca^(2+)浓度(P<0.05或P<0.01),升高线粒体膜电位(P<0.01),20μmol·L^(-1)PF组可显著升高线粒体膜电位(P<0.05)。此外,一定剂量的PF可下调cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-8、cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论PF可抑制醋酸铅诱导的海马神经元凋亡,可通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达发挥神经保护作用。