脾虚衰老大鼠红细胞膜ATP酶活性及海马神经元PKC活性的变化

细胞是生物体的结构和功能的基本单位,细胞膜在维持细胞的功能和结构的完整性,以及传递细胞内外信息方面具有重要作用.

电针联合柴胡疏肝散对抑郁大鼠海马神经元活性、MAO水平及CaMK信号蛋白水平的影响

目的 探究电针联合柴胡疏肝散对抑郁大鼠海马神经元活性、单胺氧化酶(MAO)水平及钙调蛋白激酶(CaMK)信号蛋白水平的影响。方法 将15只雄性SD大鼠根据不同治疗方法分为抑郁组、健康组、电针组、柴胡疏肝散组、联合组各3只。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测海马神经元细胞中CaMKⅡmRNA表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中MAO表达水平,Hoechst 33258荧光染色法检测海马神经元细胞的凋亡情况,水迷宫行为检测大鼠空间学习记忆能力,Western印迹法检测细胞中CaMKⅡ蛋白含量。结果 与抑郁组相比较,电针组、柴胡疏肝散组、联合组空间学习记忆能力显著更优(均P<0.05),联合组空间学习记忆能力显著优于电针组、柴胡疏肝散组(均P<0.05)。电针组、柴胡疏肝散组、联合组海马神经元细胞的凋亡率、MAO表达显著低于抑郁组(均P<0.05),与电针组、柴胡疏肝散组相比较,联合组细胞凋亡细胞率、MAO表达显著下降(均P<0.05)。电针组、柴胡疏肝散组、联合组海马神经元细胞CaMKⅡ蛋白表达、CaMKⅡmRNA表达量显著高于抑郁组(均P<0.05)。结论 电针与柴胡疏肝散对抑郁大鼠均有改善作用,两者联合治疗效果更佳,电针与柴胡疏肝散对抑郁大鼠的作用机制可能与提高CaMK信号蛋白水平有关。

铅对大鼠海马神经元培养细胞ERK活性的影响

目的 观察不同浓度和不同时间染铅对大鼠海马神经元培养细胞细胞质ERK活性的影响。方法 出生 4～ 8dWistar大鼠海马神经元原代细胞培养 ,抑制剂PD0 980 5 9预处理培养细胞 ,不同浓度及不同时间染铅 ,应用改良的Takai法测定ERK活性的变化。结果 0 1、0 5、1 0、5 0 μmol染铅 ,ERK活性依浓度依赖方式被激活 ,比活性倍数分别为 2 36、3 16、7 0 0、3 19(P <0 0 5 ) ;PD0 980 5 9抑制铅激活ERK活性 ,1 0 μmol染铅 30min时ERK活性最高 ,为 2 6 6 (P <0 0 5 ) ,12 0min时降至正常 ,为 1 72 (P >0 0 5 )。结论 低浓度染铅可短暂激活大鼠海马神经元原代培养细胞ERK。

牛膝活性提取物对大鼠海马神经元生长的促进作用

目的：研究牛膝活性提取物（ABPPk）对体外培养的大鼠海马神经元生长的促进作用.方法：以体外原代培养的胎鼠海马神经元为模型,通过微管蛋白（β-tubulinⅢ）免疫荧光染色,采用Leica Qwin软件测量不同浓度ABPPk处理24 h对海马神经元突起延伸和突起分支的影响;通过突触结合蛋白（SYN）和突触后致密蛋白（PSD95）双标免疫荧光染色,采用LeicaQwin软件测量ABPPk（250 ng/ml）处理7d对海马神经元突触形成的影响;通过免疫印迹定量分析不同浓度ABPPk作用24 h对海马神经元生长相关蛋白（GAP-43）表达水平的影响,作用7d对PSD-95表达水平的影响,以及ABPPk（250 ng/ml）作用不同时间对磷酸化胞外信号调节激酶（ERK1/2）水平的调节.分析ABPPk对海马神经元的作用与ERK通路的关系.结果：ABPPk可有效促进海马神经元的突起延伸和突触形成,免疫印迹结果显示,ABPPk能显著增加海马神经元GAP-43和PSD-95蛋白表达,作用5 min即能显著上调ERK磷酸化水平,作用15 min ERK磷酸化水平达到峰值,PD98059可抑制该过程.结论：ABPPk能促进体外培养的海马神经元突起生长和突触形成,上调GAP-43和PSD-95蛋白水平,其作用可能与ERK通路的激活有关.

胎脑提取液对衰老小鼠海马神经元酶活性影响的实验研究

目的 观察胎脑提取液对衰老小鼠海马神经元酸性磷酸酶 (ACP)和琥珀酸脱氢酶 (SDH)活性的影响 ,探讨胎脑提取液的抗衰老作用。方法 选用健康昆明种小白鼠 30只 ,随机分为 3组 ;采用D -半乳糖制备亚急性衰老模型 ;酶组织化学方法结合显微图像分析 ,观察各组小鼠海马神经元ACP和SDH的活性。结果 衰老模型组与正常对照组相比 ,小鼠海马神经元ACP活性明显升高 ,SDH活性明显降低 ;给药组与衰老模型组相比 ,小鼠海马神经元ACP活性明显降低 ,SDH活性明显升高。结论 胎脑提取液可以延缓海马神经元的衰老进程 ,具有一定的抗衰老作用。

银杏内酯B对胆固醇和载脂蛋白E4损伤海马神经元活性和生长的影响

目的探讨高胆固醇和载脂蛋白E4(apoE4)对海马神经元生长和活性的影响及银杏内酯B的保护作用。方法采用无血清培养基体外培养初生大鼠海马神经元,采用神经元特异性烯醇化酶免疫荧光进行鉴定。用160μg/ml的银杏内酯B处理海马神经元16h,40μg/ml25-OH-胆固醇和30μg/mlapoE4继续处理24h。MTT比色实验观察海马神经元生长活力的改变;Image-Proplus分析系统观察神经元最长突起长度和胞体长短经的改变。结果25-OH-胆固醇和apoE4降低海马神经元活性,抑制海马神经元突起的生长,与单纯apoE4和单纯胆固醇相比有显著性差异;银杏内酯B对神经元活性有提高趋势,但与模型组无显著差异(P>0.05),银杏内酯B可以有效促进损伤神经元突起生长,与模型组相比有显著差异(P<0.05)。结论高胆固醇在apoE4环境下损伤海马神经元,促进老年性痴呆的发生,银杏内酯B对损伤神经元在一定程度上有保护作用。

氯化钴增强培养海马神经元葡萄糖转运活性参与抗缺氧的作用

本文用培养新生大鼠海马神经元观察了氯化钴对葡萄糖转运活性的影响及其在神经元抗缺氧中的作用。结果表明 ,用CoCl2 处理的培养海马神经元 ,2 4h后其 2 脱氧 D [1 3H]葡萄糖摄取率和葡萄糖转运体GLUT1和GLUT3mRNA表达明显高于对照组 ,并且其在缺氧 6或 8h后的损伤也明显减轻。氯化钴对神经元缺氧损伤的保护作用被葡萄糖转运体抑制剂细胞松弛素B大部分消除。结果提示 ,氯化钴能够增强神经元GLUT1和GLUT3mRNA的表达和葡萄糖转运活性。CoCl2

白香丹胶囊及白芍提取物对过表达5-HTR2C诱导的海马神经元中PKC的影响

目的:根据前期对愤怒模型大鼠基因芯片研究,构建大鼠5-HTR2C过表达海马神经元,研究白香丹胶囊及君药白芍提取物对5-HTR2C及PKCα/β2的影响,为阐明白香丹胶囊调整愤怒情绪的作用机制提供科学依据。方法:采用基因工程技术,构建5-HTR2C真核表达载体,应用电转染技术,使5-HTR2C在大鼠原代神经元中过量表达,建立5-HTR2C体外高表达的细胞模型,结合中药血清药理学,制备白香丹胶囊和白芍提取物的含药血清,以氟西汀为阳性对照药,干预转染后的神经元,提取各组蛋白后,Western-blot技术检测5-HTR2C及PKCα/β2中相应基因的蛋白表达。结果:与正常组相比,5-HTR2C转染组中5-HTR2C的蛋白表达显著升高(P <0. 001),PKCα的蛋白表达显著下降(P <0. 001),P-PKCα的蛋白表达显著升高(P <0. 001),PKCβ2的蛋白表达显著下降(P <0. 001),P-PKCβ2的蛋白表达显著升高(P <0. 001);与5-HTR2C过表达组相比,白香丹、白芍提取物及氟西汀干预组中5-HTR2C的蛋白表达均显著下调(P <0. 01,P <0. 01,P <0. 05),PKCα的蛋白表达均显著上调(P <0. 05,P <0. 01,P <0. 01),P-PKCα的蛋白表达显著下降(P <0. 001,P <0. 01,P <0. 05),PKCβ2的蛋白表达均显著上调(P <0. 001,P <0. 01,P <0. 05),PPKCβ2的蛋白表达显著下降(P <0. 001,P <0. 001,P <0. 01)。结论:白香丹胶囊能够调整5-HTR2C高表达引起的PKCα/β2及其磷酸化水平的异常变化,且作用比氟西汀稍强,充分显示了整体调节的优势。但是,作为其中主要组分的白芍提取物无显著的调节作用,推测白香丹胶囊其他组分-香附酮及丹皮酚在愤怒致病治疗中也有一定的作用,需进一步研究。

硫氧还蛋白对缺氧/复氧大鼠海马神经元caspase-3活性的影响

目的 探讨硫氧还蛋白 (Trx)和caspase - 3在鼠海马神经元缺氧 /复氧损伤中的作用。 方法 原代培养10d的新生鼠海马神经元缺氧 3h复氧 12h、2 4h和 48h ,分为正常对照组、缺氧 /复氧组和Trx组 ,用MTT比色法测定各时点的神经元存活率 ;底物裂解法检测caspase - 3活性。 结果 缺氧 /复氧组海马神经元复氧 12～ 48h ,海马神经元caspase - 3样蛋白酶活性明显增高 ,以复氧 2 4h为最高 ,而存活率进行性下降 ;Trx组caspase - 3样蛋白酶活性曲线与缺氧 /复氧组相似 ,但明显下降 ,细胞存活率较缺氧 /复氧组明显提高。结论 海马神经元缺氧 /复氧后 ,caspase- 3样蛋白酶被激活 ,参与神经元损伤过程 ;

CNTF对NMDA引起大鼠海马神经元NOS活性改变的影响

为探讨CNTF对NMDA引起大鼠海马神经元一氧化氮合酶(nNOS)表达的作用,以不同浓度的NMDA处理海马神经元,倒置显微镜下观察其形态,并以nNOS免疫细胞化学结合图象分析方法测定nNOS神经元胞体的灰度,揭示NMDA对NOS活性的影响以及在此过程中CNTF发挥的作用。发现(1)NMDA可引起海马神经元的毒性反应,且呈剂量依赖性和时间依赖性;(2)100μmmol/L NMDA 10min组nNOS神经元胞体的灰度值大于对照组(P<0.01);(3)在NMDA处理前给予CNTF,nNOS神经元的胞体及阳性突起的表现与对照组相似。提示CNTF可能通过抑制nNOS的活性及NO的渗出而减弱NMDA对神经元的毒性作用。

腺苷对海马神经元高电压激活性钙通道电流的作用研究

目的:在细胞水平研究腺苷(Ade)对海马神经元高电压激活性钙通道电流(IHVA)的影响。方法:条件培养基纯化法原代培养SD大鼠乳鼠的海马神经元,选取生长7～9d的细胞,应用全细胞膜片钳技术,以细胞外给予Ade的方法,比较Ade干预前后IHVA值及I-V曲线的变化,并观察硝苯地平预处理后,Ade对IHVA值影响的改变。结果:原代培养的SD大鼠乳鼠的海马神经元在7～9d发育基本成熟,采用膜片钳技术在预设的刺激程序下可以记录到IHVA,以细胞外干预的方式加入Ade后,观察到Ade可抑制IHVA的幅度,并呈浓度依赖性,可使I-V曲线上移,但对最大激活电位及峰值电位无明显影响;硝苯地平可部分减弱Ade对IHVA的影响。结论:Ade在一定浓度时可显著抑制体外培养海马神经元的IHVA,硝苯地平可部分减弱这种影响。

大白鼠海马神经元NOS与AChE活性的研究

目的:观察大白鼠海马不同亚区一氧化氮合酶(NOS)与乙酰胆碱酯酶(AChE)阳性神经元的活性。方法:分别采用还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)和乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学方法对大白鼠海马不同亚区NOS和AChE阳性神经元的分布以及活性进行研究。结果:海马不同亚区均含有NOS和AChE阳性神经元,其中CA2区NOS呈强阳性反应,CA3区AChE呈强阳性反应。结论:实验表明,NOS和AChE阳性神经元广泛分布于大白鼠海马不同亚区,为进一步探讨海马的学习记忆功能机制提供了形态学佐证。

川芎嗪与外源性β-神经生长因子对缺氧大鼠海马神经元活性影响的研究

目的:探讨川芎嗪和外源性β-神经生长因子(NGF)对缺氧大鼠海马神经元活性的影响。方法:选取24 h内出生SD乳鼠,进行体外原代培养大鼠海马神经元14 d后分为6组进行相应处理,每组设16个复孔。空白对照组为无细胞生长,每孔加磷酸盐缓冲液(PBS)100μl;模型对照组每孔加无血清基础培养液100μl;川芎嗪高、中、低剂量组每孔分别加盐酸川芎嗪注射液4、1和0.25μl(终浓度分别为800、200和50 m g/L);-βNGF组每孔加含-βNGF终浓度为25μg/L基础培养液至100μl。继续培养后在终止培养前2.5 h模拟缺氧环境,以四甲基偶氮唑盐(M TT)微量酶反应比色法检测各组缺氧2.5 h后海马神经元活性,测量波长595 nm处的吸光度(A)值。光镜下观察各组海马神经元形态。结果:与模型对照组相比,川芎嗪高剂量组A值显著降低(P<0.05),川芎嗪中剂量组和-βNGF组显著升高(P均<0.05),而川芎嗪低剂量组无明显变化(P>0.05)。川芎嗪中剂量组与-βNGF组相比差异无显著性(P>0.05)。光镜下观察,随缺氧时间的延长,川芎嗪中剂量组与β-NGF组海马神经元可见不同程度胞体肿大、晕光减弱,以轴突水肿断裂为主,而其他组海马神经元以胞核内容物浓缩甚至胞核破裂、胞质进行性浓缩改变为主。结论:外源性-βNGF与一定剂量范围的川芎嗪具有保持缺氧海马神经元活性的效果,而且川芎嗪的剂量与神经元活性之间存在一定的量-效关系。

大鼠海马神经元缺氧/复氧后caspase-3活性的变化

细胞凋亡过程是受基因调控的级联反应过程 ,其中caspase -3在此过程中起关键作用 ,它可促进脑部发育过程中的神经元死亡 ,在缺血性脑损伤中也起重要作用。本研究应用培养的海马神经元 ,观察在缺氧或缺氧再复氧后不同时间caspase -3活性的动态变化及caspase -3抑制剂预处理对其影响 ,研究caspase -3在体外培养的海马神经元缺氧 /复氧损伤中的作用及其抑制剂的干预效果 ,为缺血性脑损伤的在体针对性治疗提供一定的实验研究资料。取当天出生 (P1)的SD大鼠 ,分离海马神经元进行体外培养。诱导体外培养 10d的大鼠海马神经元缺氧 3h ,再复氧 12～ 48h ,并在缺氧前 1h用不同剂量的caspase -3抑制剂Ac -DEVD -CMK进行干预处理 ,同时用溶剂DMSO处理进行对照 ,应用MTT比色法测定细胞存活率 ,底物裂解法检测caspase -3样蛋白酶活性。用方差分析 (ANOVA)进行统计学分析处理。结果发现 ,缺氧 /复氧后大鼠海马神经元存活率逐渐降低 ,caspase -3活性明显增强 ,复氧2 4h达高峰 ;溶剂DMSO处理后神经元存活率及caspase -3活性与缺氧 /复氧神经元相比无显著性差异 ;用Ac -DEVD -CMK预处理的海马神经元caspase -3活性降低 ,细胞存活率增高 ,并呈剂量依赖性 ,但抑制caspase -3样蛋白酶的活性并不能完全逆转神经元的死亡。

炎性痛诱导海马神经元形态学变化及PKC的表达上调(英文)

目的 观察福尔马林诱导炎性痛过程中海马蛋白激酶C的表达和神经元形态学变化,并进一步明确海马与疼痛的关系。方法 SD大鼠被随机分为对照组和实验组,实验组又按照注射福尔马林后炎性痛发生时间分为1h, 3h, 12h, 1d, 3d和7d组。应用组织化学和免疫细胞化学方法观察炎性痛过程中海马神经元形态学变化和PKC活性的改变。结果 注射福尔马林1d后海马PKC免疫反应明显上调,PKC被激活并由细胞核转移到膜结构;而“黑神经元”于注射福尔马林后3d最明显,于第7天有所恢复。PKC的活性与神经元的形态学变化均以海马CA3区明显。结论 实验结果表明海马参与了对伤害性信息的调节,而且PKC与炎性痛过程中神经元的损伤有密切关系。

七氟醚对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元ATP酶活性的影响及其机制分析

目的探讨七氟醚对脑缺血再灌注损伤(IRI)大鼠海马神经元三磷酸腺苷(ATP)酶活性的影响,并分析其机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为3组:正常组,模型组(建立局灶性脑IRI大鼠模型)和七氟醚组(脑IRI模型+七氟醚吸入治疗),每组各10只。电镜观察各组大鼠海马组织的超微结构,免疫荧光检测海马神经元含量,免疫组化检测海马环磷酸腺苷(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)蛋白表达,试剂盒法检测海马ATP酶活性,荧光定量-聚合酶链锁反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测海马cAMP、PKA、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA和蛋白表达。结果正常组海马神经元细胞膜结构完整,模型组海马神经元胞体萎缩,染色质浓缩并聚集在细胞核边缘,七氟醚组海马神经元形态明显改善。与对照组相比,模型组大鼠海马组织微管相关蛋白-2(MAP-2)阳性细胞占比显著降低(P<0.05),七氟醚组显著高于模型组(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠海马组织cAMP和PKA阳性表达、Na^(+)-K^(+)-ATP酶和Ca^(2+)-ATP酶活性显著降低(P<0.05),七氟醚组显著高于模型组(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠海马组织cAMP、PKA、CREB、BDNF mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),七氟醚组显著高于模型组(P<0.05)。结论七氟醚可通过激活cAMP-PKA-CREB-BDNF信号通路来促进脑IRI大鼠海马神经元的ATP酶活性,进一步改善脑IRI。

α7-nAChR正向变构调节剂对原代海马神经元活性影响

目的探讨α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)的正向变构调节剂(PAM)NS1738(Ⅰ型PAM)和PNU120596(Ⅱ型PAM)对原代培养的海马神经元活性的影响。方法原代培养的海马神经元用胆碱(choline)、choline+NS1738、choline+PNU120596处理7 d后,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测Bax、Bcl-2蛋白表达情况,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH的分泌情况,流式细胞仪检测线粒体膜电位(△Ψm)的变化。结果与对照组(不做任何处理)相比,choline+NS1738组和choline+PNU120596组原代海马神经元Bax/Bcl-2蛋白表达比值显著降低(F=12.15,q=7.742、6.982,P<0.05),LDH分泌明显减少(F=11.72,q=6.551、7.807,P<0.05),△Ψm明显升高(F=21.73,q=7.835、4.331,P<0.05)。与choline组相比较,choline+NS1738组和choline+PNU120596组原代海马神经元Bax/Bcl-2蛋白表达比值和LDH分泌差异无显著性(P>0.05);而△Ψm明显升高,差异具有统计学意义(F=21.73,q=10.550、7.045,P<0.05)。结论α7-nAChR PAM能够减少原代培养海马神经元的凋亡数量,升高细胞活性。

缺氧对大鼠海马神经元生物学功能的影响

为进一步探讨缺氧缺血如何诱导海马神经元损伤直至凋亡,明确缺氧对海马神经元生物学功能的影响及其相关机制,从而为缺血缺氧性脑病的防治提供实验依据,本研究以19d的SD胎鼠脑作为取材对象,经过条件培养基纯化建立海马神经元原代培养体系,通过MTT法、TUNEL法、免疫荧光、化学发光等方法检测海马神经元生长增殖活力、凋亡、Caspase-3活性等指标。结果显示缺氧可抑制SD大鼠海马神经元的生长增殖活力,并伴随着神经元凋亡和Caspase-3活性增高,且随着缺氧时间的增长程度加重。以上结果说明,缺氧通过诱导细胞凋亡导致SD大鼠海马神经元的损害,Caspase-3活性的激活可能是其重要的通路之一。

莲房原花青素对极低频电磁场致海马神经元损伤的预防作用

研究极低频电磁场(ELF-EMF)对原代培养的大鼠海马神经元的损伤作用及莲房原花青素(LSPC)的预防作用。采用原代培养建立海马神经元极低频电磁场损伤模型及LSPC预处理模型细胞,检测神经细胞生存率、细胞形态、海马神经元细胞内活性氧(ROS)含量。结果表明:2.5、5、10μg/mL LSPC预处理组的细胞生存率分别为81.23%、90.18%和93.45%,明显高于模型组(66.88%,P<0.05);ELF-EMF引起神经元细胞内ROS含量上升(荧光强度(228.19±16.28)),经2.5、5、10μg/mL LSPC预处理后细胞内ROS荧光强度显著下降(P<0.05)。由此提示LSPC对ELF-EMF导致的大鼠海马神经元损伤有明显的预防作用。

抗氧化剂SS-31肽对脓毒症小鼠海马神经元凋亡与炎症反应的影响

目的:观察抗氧化剂SS-31肽对脓毒症小鼠海马神经元凋亡与炎症反应的影响。方法:成年雄性C57BL/6小鼠65只随机分为3组:假手术组(Sham组,15只)、脓毒症组(CLP组,25只)和脓毒症+SS-31肽组(SS-31肽组,25只)。CLP组和SS-31肽组建立盲肠结扎穿孔模型。术毕SS-31肽组腹腔注射SS-31肽(5 mg·kg-1),Sham组和CLP组注射等容生理盐水,连续单次注射6天。记录术后7天内死亡率;随后处死小鼠取海马组织,检测线粒体活性氧自由基(ROS)水平,Western bloting检测总细胞色素C(Cyt C)、细胞质Cyt C、caspase 3和Nlrp 3含量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素1β(IL-1β)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平。结果:与CLP组相比,SS-31肽组7天死亡率明显降低(52%vs 24%),线粒体ROS水平、细胞质Cyt C、caspase 3和Nlrp 3含量以及IL-1β、NSE水平均减少(P<0.05)。结论:抗氧化剂SS-31肽可降低脓毒症小鼠脑海马组织中线粒体ROS水平,抑制凋亡和炎症反应,改善损伤,降低死亡率。