山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠海马区糖原合酶激酶-3β和磷酸化-tau蛋白的影响

目的观察山茱萸多糖(CFPs)对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区糖原合酶激酶(GSK)-3β和磷酸化tau(p-tau)蛋白的影响,探讨CFPs对AD大鼠神经元的保护机制。方法将Wistar大鼠100只随机分为青年组、假手术组、模型组、多奈哌齐组、CFPs组。采用D-半乳糖联合Aβ1~40制备AD模型,采用免疫组化(SABC)法检测海马CA1区GSK-3β和p-tau蛋白表达量,Western印迹法检测海马GSK-3β和p-tau蛋白表达量。结果与模型组比较,CFPs和多奈哌齐可显著降低AD大鼠海马区GSK-3β和p-tau蛋白表达量(P<0.05),CFPs组和多奈哌齐组GSK-3β和ptau蛋白表达量无显著差异(P>0.05)。结论 CFPs通过抑制大鼠海马区GSK-3β蛋白表达从而降低tau蛋白过度磷酸化,实现其对AD大鼠神经元的保护作用。

慢性高眼压模型鼠视网膜神经节细胞及视神经中9位丝氨酸磷酸化糖原合酶激酶3β的表达变化

目的观察慢性高眼压模型鼠视网膜神经节细胞(retina ganglion cells,RGCs)和视神经中9位丝氨酸磷酸化糖原合酶激酶3β[p-GSK3β(ser9)]的表达变化,探讨GSK3β是否在慢性高眼压RGCs及视神经退行性病变中发挥作用。方法取健康SD大鼠30只,随机分为3组:模型对照组、慢性高眼压模型2周组、慢性高眼压模型4周组,每组10只。取大鼠右眼,采用巩膜上静脉结扎并烧灼法建立大鼠慢性高眼压模型。分别于造模后2周和4周取5只大鼠眼球行冰冻切片,尼氏染色观察RGCs数目,免疫荧光染色观察RGCs和视神经中p-GSK3β(ser9)的变化;各组取另外5只大鼠眼视网膜,Western blot检测p-GSK3β(ser9)及总-GSK3β的表达。结果造模前3组大鼠右眼眼压差异无统计学意义(P=0.89);造模后3组间眼压差异有统计学意义(P<0.01),慢性高眼压模型2周组和4周组眼压与模型对照组比较明显升高,分别升高了59.13%和26.93%,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。视网膜尼氏染色RGCs计数发现模型对照组RGCs数为(149±12)个,慢性高眼压模型2周组和4周组RGCs数较模型对照组明显减少,分别为(120±10)个和(86±7)个,差异均有统计学意义(均为P<0.05);且4周组比2周组进一步减少(P<0.01)。慢性高眼压模型2周组和4周组视网膜中p-GSK3β(ser9)阳性着色,同模型对照组相比,其RGCs层及视神经中p-GSK3β(ser9)染色荧光减弱;4周组较模型对照组减弱更明显。与模型对照组相比,慢性高眼压模型2周组和4周组视网膜中总-GSK3β的表达差异无统计学意义(F=0.24,P=0.79);而3组间p-GSK3β(ser9)表达差异有统计学意义(P<0.01),与模型对照组相比,慢性高眼压模型2周组和4周组视网膜中p-GSK3β(ser9)分别减少了19.89%和36.46%(均为P<0.05)。慢性高眼压模型4周组比2周组视网膜中p-GSK3β(ser9)表达持续减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论慢性高眼压模型鼠RGCs数目减少,RGCs和视神经中p-GSK3β(ser9)表达减少,推测p-GSK3β(ser9)表达变化可能参与了慢性高眼压模型鼠RGCs及视神经退行性病变。

糖原合酶激酶3(GSK3)介导的胰岛素对糖原合酶2(GYS2)的抑制调节

本文基于Hill动力学与Michaelis-Menten方程,建立理论模型研究肝癌(HCC)进展过程的微环境中,糖原合酶激酶3(GSK3)介导的胰岛素对糖原代谢的抑制调节,以及P53蛋白恢复调节糖原代谢异常的作用.分析了胰岛素激活AKT激酶影响GYS2磷酸化/去磷酸化转变的昼夜节律性,以及P53通过抑制AKT,对GYS2磷酸化/去磷酸化转变的昼夜节律性异常的调节恢复特性.研究发现,胰岛素激活并提升AKT的表达水平,经过AKT的催化作用,GSK3的表达被抑制减弱,进而增强了GYS2的磷酸化和失活.在胰岛素浓度较低的情况下,GYS2去磷酸化激活的昼夜节律性会被改变,进而改变了GYS2昼夜节律的合成规律.在较高胰岛素浓度条件下,去磷酸化的GYS2(dGYS2)随时间演变的周期振荡性会被极大地改变,GYS2昼夜节律的合成规律被破坏.改变P53的表达水平,我们发现,P53对较低和较高胰岛素浓度条件下dGYS2异常的昼夜节律演化性,有明显的调节恢复作用.理论结果符合实验,并进一步分析了GSK3介导的胰岛素调节GYS2磷酸化/去磷酸化转变的昼夜节律性的调节机理,以及P53对GYS2磷酸化/去磷酸化转变异常的调节恢复特性,进而揭示了HCC发生发展的一种致癌、抑癌机理,可为设计阻断致癌转变的通路治疗方案提供理论依据.

糖原合成酶激酶-3在炎症反应中的研究

糖原合成酶激酶-3(GSK3)是一种丝/苏氨酸磷酸激酶,在原发性和继发性免疫系统均发挥重要作用,其增加促进炎症因子(IL-1β、IL-2、IL-6等)的产生,抑制GSK3活性后可减轻炎症反应同时保护机体免受免疫介导的病理损伤。GSK3活化与阿尔茨海默病、糖尿病、急性肾衰竭等疾病发生、发展有一定的相关性。本文就GSK3在不同免疫系统及其参与相关疾病的研究进展作一综述。

糖原合酶激酶-3导致阿尔茨海默病模型大鼠认知障碍的机制研究

目的探讨糖原合酶激酶-3（GSK-3）对老年阿尔茨海默病（AD）模型大鼠认知功能及海马乙酰胆碱（ACh）水平的影响，从而找寻AD记忆障碍的机制。方法30只Wistar大鼠随机分为3组，每组10只大鼠：侧脑室注射人工脑脊液（aCSF）组（Vehicle组）、侧脑室注射Wortmannin组（Wortmannin组）和侧脑室联合注射Wortmannin和LiCl组（Wortmannin＋LiCl组）。每组10只。利用Morris水迷宫检测大鼠空『白J记忆功能；侧脑室注射P13K抑制剂Wortmannin后，利用放射性同位素方法检测GSK-3活性，利用免疫印迹检测GSK-3及tau蛋白磷酸化水平；利用微量渗析及高压液相色谱方法检测ACh水平。结果侧脑室注射Wortmannin后大鼠海马GSK-3活性显著升高，GSK-3D在Ser9位点及tau蛋白在Ser396、Thr231位点磷酸化水平显著改变，说明激活的GSK-3B可以磷酸化tau蛋白并诱导AD样病理改变。侧脑室注射Wortmannin后大鼠表现出明显的空间记忆障碍，同时海马ACh水平显著降低。然而，如同时注射GSK-3抑制剂LiCI后，ACh则恢复到正常水平。结论侧脑室注射Wortmarmin可以激活海马GSK-3活性，激活的GSK-3可以通过下调ACh诱导老年AD大鼠空间记忆障碍。

下调糖原合酶激酶3β活性改善脑缺血再灌注大鼠学习记忆障碍的机制研究

目的探讨下调糖原合酶激酶3β(GSK-3β)活性对脑缺血再灌注大鼠学习记忆障碍改善作用的机制。方法 30只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、SB组,采用大脑中动脉线栓法(MACO)将模型组、SB组大鼠进行缺血再灌注造模,并予以SB组大鼠尾静脉注射SB216763(SB)后,对3组大鼠进行水迷宫测试、电跳台测试,进一步采用电生理检测海马CA3区海马长时程增强(LTP),检测皮质和海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、β?连环蛋白(β?catenin)水平和磷酸化及NR2A/B的蛋白水平,检测脑组织CREB、β?catenin及NR2A/B的分布,皮质和海马CREB、β?catenin和NR2A/B的mRNA水平。结果模型组水迷宫测试、电跳台测试均较空白对照组差(P<0.01),SB组水迷宫测试、电跳台测试均优于模型组(P<0.05或0.01);模型组与空白对照组比较,高频刺激后峰电位幅值和兴奋性突触后电位(EPSP)斜率均明显减小(P<0.01),SB组与模型组比,高频刺激后峰电位幅值和EPSP斜率均增大(P<0.01);SB组皮质和海马CREB、β?catenin及NR2A/B的蛋白水平均高于模型组(P<0.05或0.01);SB组皮质和海马CREB、β?catenin的磷酸化水平低于模型组(P<0.05);CREB、β?catenin及NR2A/B主要分布于大脑海马组织;SB组皮质和海马CREB、β?catenin和NR2A/B的mRNA水平均高于模型组(P<0.05或0.01)。结论下调糖原合酶激酶3β活性可通过增强LTP、增加脑组织CREB、β?catenin和NR2A/B的表达,从而对脑缺血再灌注大鼠的学习记忆障碍起到改善的作用。

糖原合酶激酶-3β与颅脑照射后认知障碍的相关性研究进展

近年来,随着医疗技术的不断进步,接受颅脑照射治疗的肿瘤患者的长期生存率大幅提升。因此,颅脑照射的远期并发症,如智力下降、记忆力减退、甚至是痴呆等问题愈来愈受到人们的重视。糖原合酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,广泛存在于真核生物的细胞质中,目前已发现有GSK-3α和GSK-3β两种亚型。GSK-3β在脑组织尤其是海马区域中高表达,广泛参与各种神经退行性疾病、神经精神类疾病和癌症等多种重大疾病的发病过程。研究显示GSK-3β参与细胞炎症反应、糖原代谢、神经系统功能等的调控,激活GSK-3β的活性会影响整个生命周期中的细胞增殖、衰老、凋亡及突触的可塑性,进而导致神经系统认知功能的障碍。目前,GSK-3β与颅脑照射后认知障碍的相关性研究较少,该文结合国内外近年来的研究成果对GSK-3β在颅脑照射后认知功能障碍中的作用展开综述。

山茱萸多糖对阿尔茨海默病模型大鼠GSK-3β和磷酸化GSK-3β的影响

目的研究山茱萸多糖对阿尔茨海默病(AD)大鼠GSK-3β和磷酸化GSK-3β的影响,探讨其对AD大鼠的保护作用机制。方法清洁级Wistar大鼠120只,随机分为青年组、假手术组、模型组、多奈哌嗪对照组、山茱萸多糖水提液组、山茱萸水煎剂组,每组20只。采用海马注射Aβ-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)制作AD大鼠模型,免疫组化(SABC)法和免疫蛋白印迹法检测GSK-3β蛋白和GSK-3β(Ser9)蛋白的表达水平。结果与青年组、假手术组比较,模型组大鼠海马组织GSK-3β蛋白表达增加(P<0.05),GSK-3β(Ser9)蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,多奈哌嗪对照组,山茱萸多糖水提液组,山茱萸水煎剂组大鼠的GSK-3β蛋白表达显著减少(P<0.05),GSK-3β(Ser9)蛋白表达增加(P<0.05)。结论山茱萸多糖通过抑制GSK-3β蛋白过度激活,促进GSK-3β(Ser9)蛋白表达途径防治AD的发生发展。

GSK-3在阿尔茨海默病样细胞骨架蛋白过度磷酸化中的作用(英文)

神经原纤维缠结是阿尔茨海默病 (Alzheimerdisease ,AD)的特征性病理改变 .蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶失衡可导致骨架蛋白的异常过度磷酸化 ,而异常过度磷酸化的tau和神经丝 (neurofilament,NF)是神经原纤维缠结的组成部分 .在众多激酶中 ,糖原合酶激酶 3(glycogensynthasekinase 3,GSK 3)可能是AD神经退行性变起重要作用 .为深入探讨GSK 3在AD样神经退行性变中的作用 ,以磷酯酰肌醇三磷酸激酶 (phosphatidylinositol 3 kinase ,PI3K)的特异性抑制剂渥曼青霉素 (wortmannin ,WT)处理野生型鼠成神经瘤细胞株 (wildtypemouseneuroblastomacelllines,N2awt) ,系统观察WT处理N2awt不同时间点 (1h、 3h、 6h)细胞代谢率、细胞形态、细胞骨架蛋白tau和NF的磷酸化状态改变以及细胞的命运 ,并分析了GSK 3活性与上述参数改变之间的相关性 .结果发现 :1μmol/LWT处理细胞 1h ,GSK 3活性与未经WT处理的对照组相比明显增高 ,并伴有Ser9磷酸化的GSK 3水平的降低 ;NF磷酸化程度增强 ,tau在Ser198/Ser199/Ser2 0 2位点的磷酸化增强 .1μmol/LWT处理细胞 3h ,GSK 3活性与对照组和处理 1h组相比明显下降 ,NF磷酸化程度较 1h降低 ,但仍高于正常水平 . 1μmol/LWT处理细胞 6h ,细胞形态、GSK 3活性、Ser9磷酸化形式的GSK

Anisomycin过度激活丝裂原活化蛋白激酶使tau发生过度磷酸化(英文)

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的病理特征之一是神经元内存在神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),后者是由过度磷酸化的微管相关蛋白tau形成的双股螺旋细丝(pairedhelical filaments,PHFs)构成。为了探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在微管相关蛋白tau磷酸化中的作用及机制,本实验用0.1μg/mL、0.2μg/mL和0.4μg/mL三种不同浓度的MAPK激动剂anisomycin处理小鼠成神经瘤细胞株(mouse neuroblastoma cells,N2a),检测MAPK活性的变化及其与tau蛋白多个AD相关位点过度磷酸化的关系,并检测糖原合酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的活性变化。结果显示,anisomycin以剂量依赖的方式激活MAPK活性,但免疫印迹结果显示tau蛋白的Ser-198/199/202位点和Ser-396/404位点的过度磷酸化只在anisomycin浓度为0.4μg/mL时出现,三种浓度的anisomycin均未引起tau蛋白Ser-214位点磷酸化的改变;同时,GSK-3活性在anisomycin为0.1μg/mL时没有明显变化,当anisomycin浓度升高到0.2μg/mL和0.4μg/mL时出现明显增高,而PKA的活性没有明显的改变。使用GSK-3的特异性抑制剂氯化锂(LiCl)则完全阻断MAPK被过度激活导致的tau蛋白磷酸化水平的增高,而同时MAPK活性不受影响。以上结果提示:过度激活MAPK可以导致tau蛋白Ser-198/199/202和Ser-396/404位点过度磷酸化,其机制可能涉及MAPK激活GSK-3的间接作用。

盐酸美金刚对癫痫大鼠海马GSK-3β表达的影响

目的探讨盐酸美金刚(memantine,MN)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃慢性癫痫大鼠学习记忆能力及海马中糖原激酶合酶-3β(glycogen synthase kinase-3,GSK-3β)表达的影响。方法动物分为正常对照组(NC)、癫痫组(PTZ)、盐酸美金刚干预组(MN),采用PTZ致痫模型,Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力,Western blot和RT-PCR方法检测大鼠海马GSK-3β、P-GSK-3β蛋白和GSK-3βmRNA表达。结果 PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马中P-GSK-3β蛋白表达明显减少(P<0.05),GSK-3β蛋白和mRNA表达无变化(P>0.05)。MN组大鼠学习记忆能力明显好转,其海马中P-GSK-3β蛋白表达明显升高(P<0.05),GSK-3β蛋白和mRNA表达无变化(P>0.05)。结论 PTZ点燃慢性癫痫大鼠学习记忆受损,其海马组织中P-GSK-3β蛋白表达明显降低,P-GSK-3β可能参与癫痫后认知功能障碍发病机制;盐酸美金刚可提高P-GSK-3β蛋白表达水平,从而改善癫痫大鼠学习记忆能力。

针刺介入时机对缺血性中风大鼠脑组织中PTEN、p-AKT和p-GSK3β的影响

目的观察不同针刺介入时间对局灶性脑缺血中风模型大鼠脑组织细胞中双特异性磷酸酶(PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和磷酸化糖原合酶激酶-3?(p-GSK3?)的影响。方法将200只成年雄性SD大鼠随机分为A组(假手术组)、B组(模型组)、C组(造模后2 h针刺组)、D组(造模后72 h针刺组)和E组(造模后168 h针刺组),每组40只。除A组外,其余各组均采用线栓法制备大鼠局灶性永久性脑缺血模型。各组术后1 d、3 d、7 d及14 d分别采用Garcia复合评分法评定神经功能,并采用Western Blot法和RT-PCR法检测脑组织中PTEN、p-AKT和p-GSK3?基因的转录和相应蛋白的表达情况。结果与B组比较,C组和E组在不同时间点(术后1 d、3 d、7 d和14 d)Garcia复合评分均显著提高(P<0.01)。D组术后7 d和14 d Garcia复合评分与C组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。E组术后3 d、7 d和14 d Garcia复合评分与C组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。B组在不同时间点(术后1 d、3 d、7 d和14 d)PTEN、p-AKT、p-GSK3?蛋白表达及PTEN mRNA、p-AKT mRNA、p-GSK3?mRNA表达与A组和C组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。D组和E组术后3 d、7 d和14 d PTEN、p-AKT、p-GSK3?蛋白表达与C组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。D组和E组在不同时间点(术后1 d、3 d、7 d和14 d)PTEN mRNA、p-AKT mRNA、p-GSK3?m RNA表达与C组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论针刺可显著降低缺血脑组织神经细胞中PTEN的表达,显著升高p-AKT和p-GSK3?的表达,从而抑制细胞凋亡,保护和修复受损神经元细胞,且越早进行针刺,效果越好。

Akt/GSK-3β/eNOS通路在藏红花酸保护离体大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的研究藏红花酸(CRO)对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,探讨其与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)/糖原合成酶激酶(GSK)-3β/一氧化氮合酶(eNOS)信号通路的关系。方法 SD大鼠40只,随机数字表法均分为正常(N)组、缺血再灌注(IR)组及5、10、15 mg/L加药(CRO_1、CRO_2、CRO_3)组,比较再灌注30 min时各组心率(HR),冠脉流量(CF),左心室内压测定(LVDP、LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmax)。灌流结束TTC心肌染色评估梗死范围,分光光度法测定肌浆乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK-MB);Western blot检测各组心肌组织内Akt、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)、GSK-3β、磷酸化的糖原合成酶激酶(p-GSK)-3β、eNOS、磷酸化的一氧化氮合酶(p-NOS)。结果 IR组再灌注30 min时HR、CF、LVDP、LV+dp/dtmax、LV-dp/dtmax较N组及加药组降低,心肌梗死面积较加药组增大,LDH、CK-MB表达较N组及加药组增加(均P<0.05),CRO_3组再灌注指标较CRO_1组升高,梗死面积降低,LDH、CK-MB表达减少(P<0.05)。IR组Akt、GSK-3b及eNOS较N组及加药组的表达差异无统计学意义,但p-Akt、p-GSK-3β及p-NOS与N组及加药组降低,且CRO_3组较CRO_1组增加(均P<0.05)。结论藏红花酸能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其作用机制可能与激活Akt/GSK-3β/eNOS通路并影响其磷酸化水平有关。

反复双侧颈总动脉闭塞小鼠海马Akt和糖原合成酶激酶-3β表达

目的探讨反复双侧颈总动脉闭塞所致血管性痴呆（vasculardementia，VaD）小鼠海马Akt和糖原合成酶激酶-3β（gtycogensynthasekinase-3β，GSK3β）蛋白表达。方法48只健康雄性C5781／6小鼠随机分为正常组、假手术组和模型组，每组16只。模型组采用反复3次间断阻断双侧颈总动脉建立小鼠VaD模型，假手术组只分离双侧颈总动脉但不阻断，正常组不接受任何处理。术后4周利用水迷宫实验和跳台实验观测各组小鼠行为学改变，采用HE染色观察海马组织病理学变化，采用蛋白质印迹法检测海马Akt、P．Akt（Ser473）、GSK3p、p-GSK3p（Set9）蛋白表达。结果水迷宫实验中，模型组学习阶段和记忆阶段游完全程时间延长（学习阶段：F=19．389，P〈0．05；记忆阶段：F=27．929，P〈0．05），错误次数增加（学习阶段：F=7．228，P〈0．05；记忆阶段：F=21．189，P〈0．05）；跳台实验中，模型组小鼠学习阶段反应时间延长（F=19．162，P〈0．05）、错误次数增加（F=6．562，P〈0．05），记忆阶段潜伏时间缩短（F=10．634，P〈0．05）、错误次数增加（F=12．890，P〈0．05）。同时，HE染色显示模型组海马CA1区神经元减少，神经胶质细胞增生；p-Akt（Ser473）（F=37．849，P〈0．05）和P—GSK3β（Set9）（F=67．725，P〈0．05）蛋白表达在术后4周较假手术组显著上调，而各组间Akt（F=1．004，P〉0．05）和GSK3β（F=0．329，P〉0．05）总蛋白表达无显著差异。结论反复双侧颈总动脉闭塞可造成小鼠学习记忆障碍，海马组织受损严重。磷酸化Akt和GSK3β表达可能参与了VaD的机制。

天王补心丸对慢性不可预知应激抑郁模型小鼠行为学,HPA轴,海马GSK3β磷酸化及BDNF表达的影响

目的:研究天王补心丸对慢性应激抑郁模型小鼠行为学、下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴),海马糖原合酶激酶3β(GSK3β)磷酸化及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,初步探讨其抗抑郁作用机制。方法:将60只雄性ICR小鼠按照糖水偏嗜度随机分为正常组、慢性应激模型组、盐酸氟西汀组(10 mg·kg-1)以及天王补心丸高、中、低剂量组(3.6,1.8,0.9 g·kg-1)。采用慢性不可预知应激实验(CUS)建立抑郁症小鼠模型,各给药组灌胃给药28 d后通过糖水偏好实验、开场行为实验、新奇抑制摄食实验检测其行为学变化。之后分别取小鼠血、肾上腺及海马组织,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织中GSK3β磷酸化及BDNF表达的变化,并计算肾上腺指数。结果:与正常组比较,模型组小鼠的蔗糖水偏嗜度显著降低(P<0.01),开场活动次数明显减少(P<0.05),新奇抑制摄食潜伏期延长(P<0.01),血清ACTH,CORT含量民明显升高(P<0.05,P<0.01),海马组织中GSK3β磷酸化及BDNF表达显著降低(P<0.01),肾上腺指数显著升高(P<0.01);与模型组比较,天王补心丸可以逆转抑郁症模型小鼠行为学变化(P<0.05,P<0.01),显著降低抑郁症模型小鼠血浆ACTH和CORT的含量(P<0.01)和肾上腺指数(P<0.01),同时增加小鼠海马GSK3β磷酸化及BDNF表达水平(P<0.05,P<0.01),其作用效果与盐酸氟西汀相当。结论:天王补心丸对慢性不可预知应激抑郁模型小鼠具有显著的抗抑郁作用,其作用机制与抑制HPA轴活性、上调海马GSK3β磷酸化及BDNF的蛋白表达有关。

葛根素对阿尔茨海默病模型大鼠嗅球内Tau蛋白过度磷酸化的影响

目的观察葛根素对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠嗅球内tau蛋白磷酸化水平的影响,并探讨其可能的分子机制。方法 (1)将22只SD雄性大鼠随机分为正常对照组(n=6)、模型对照组A(n=8)、葛根素治疗组(n=8),采用免疫印迹法检测大鼠嗅球内tau-1、PS396和tau-5表达水平;(2)将20只SD雄性大鼠随机分为模型对照组B、葛根素小剂量组(40 mg·kg^(-1)·d^(-1))、葛根素中剂量组(80 mg·kg^(-1)·d^(-1))和葛根素大剂量组(160 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组5只。采用免疫印迹法检测大鼠嗅球内tau-1与PS396表达水平;(3)免疫印迹法检测正常对照组、模型对照组A、葛根素治疗组糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)磷酸化水平。结果 (1)免疫印迹检测结果显示,模型对照组A大鼠嗅球内Tau-1相对表达(0.49±0.07)较正常对照组(0.85±0.03)低(P<0.01),葛根素治疗组Tau-1相对水平(0.58±0.03)较模型对照组A高(P<0.05),3组大鼠嗅球内Tau-5及PS396表达水平差异无统计学意义;(2)与模型对照组B(0.39±0.09)比较,葛根素小、中、大剂量组大鼠嗅球内tau-1相对表达[分别为(0.69±0.11),(0.55±0.11),(0.70±0.04)]均明显增强,葛根素小剂量组大鼠嗅球内PS396相对表达(0.36±0.07)明显低于模型对照组B(0.55±0.05),差异有统计学意义(P<0.01);(3)模型对照组A大鼠嗅球内PS396-GSK-3β/t GSK-3β水平(0.51±0.12)明显低于正常对照组(0.96±0.07),葛根素治疗组PS9-GSK-3β/t GSK-3β(0.62±0.03)较模型对照组A高(P<0.01)。结论葛根素可有效减缓AD模型大鼠嗅球内tau蛋白磷酸化水平增加,其作用机制可能与降低GSK-3β活性水平有关。

糖原合酶激酶3β在恶性涎腺多形性腺瘤的表达及其与Cyclin D1和P53的相关性分析

目的探讨糖原合酶激酶3β与细胞周期D1(CyclingD1)和P53在恶性多形性腺瘤中的表达及相关性。方法收集恶性多形性腺瘤患者42例(A组)、复发多形性腺瘤患者32例(B组)及部分患者周围涎腺正常组织32例(C组),提取蛋白,采用免疫印迹法(Western blot)检测各组患者中糖原合酶激酶3β(GSK3β)、磷酸化GSK3β(pS21GSK3β)、Cyclin D1和P53的表达情况,采用卡方检验进行各种表达率的比较,采用Spearman相关分析探讨各因子表达的相关性。结果(1)各组GSK3β表达阳性率分别为:A组66.7%(28/42)、B组68.8%(22/32)、C组68.8%(22/32),卡方检验各组间差异无统计学意义(χ~2=0.025,P=0.987)。(2)pS21GSK3β表达阳性率分别为:A组90.5%(38/42)、B组50%(16/32)、C组0(0/32),卡方检验组间差异有统计学意义(χ~2=29.754,P=0.000),三组表达阳性率依次降低。(3)Cyclin D1表达阳性率分别为:A组90.5%(38/42)、B组75.0%(24/32)、C组0(0/32),卡方检验组间差异有统计学意义(χ~2=36.364,P=0.000),三组表达阳性率依次降低。(4)P53表达阳性率分别为:A组52.3%(22/42)、B组50.0%(16/32)、C组18.8%(6/32),卡方检验组间差异有统计学意义(χ~2=6.832,P=0.037)。(5)Spearman相关分析提示:pS21GSK3β与CyclinD1、P53在恶性多形性腺瘤患者中表达均呈正相关(r=0.649,P=0.000;r=0.573,P=0.000)。结论恶性多形性腺瘤组织中pS21GSK3β阳性表达率显著高于复发多形性腺瘤和正常组织,提示GSK3β磷酸化失活可能在恶性多形性腺瘤发生发展中起到一定作用。pS21GSK3β与CyclinD1、P53的表达在多形性腺瘤疾病的进展中有一定意义。

氯化锂对苯并[a]芘暴露致大鼠胚胎海马神经元损伤的改善作用

[背景]诸多研究证实苯并[a]芘(BaP)可透过胎盘屏障及血脑屏障引起胚胎神经毒性,而目前关于外源化合物对BaP暴露所致健康损害的干预作用研究鲜有报道。氯化锂(LiCl)在临床上广泛应用于情绪调节,具有神经营养和神经元保护作用。[目的]探讨LiCl对孕期BaP暴露致大鼠胚胎发育及海马神经元损伤的改善作用,为研究其具体作用机制提供实验依据。[方法]10周龄孕期SD大鼠随机分为5组,分别为对照组、植物油组、BaP组(20 mg·kg^(-1)BaP)、LiCl组(40 mg·kg^(-1)LiCl)及LiCl干预组(20 mg·kg^(-1)BaP+40 mg·kg^(-1)LiCl),每组6只。妊娠第8天(GD8)开始灌胃染毒,1次·d^(-1),连续7 d至妊娠第14天(GD14),每天记录孕鼠体重。妊娠第18天(GD18)剖腹取出胎鼠,记录胎鼠总数、体重、身长及尾长;HE染色观察胎鼠海马神经元形态;Western blotting检测胎鼠海马组织糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、pGSK-3β、β-catenin蛋白表达。[结果]实验期间,对照组、植物油组和LiCl组孕鼠体重及胎鼠发育指标差异均无统计学意义(P>0.05)。GD14和GD18,BaP组孕鼠体重[(323.34±5.71)g、(364.34±10.41)g]均低于对照组[(339.17±7.10)g、(390.32±11.35)g](P<0.05),而LiCl干预组孕鼠体重[(345.05±7.72)g、(398.73±12.32)g]均高于Ba P组(P<0.05)。Ba P组胎鼠的体重、身长、尾长分别为(2.325±0.061)g、(3.072±0.077)cm、(1.135±0.068)cm,均低于对照组的相应指标值[(2.563±0.091)g、(3.284±0.078)cm、(1.276±0.041)cm](P<0.05);LiCl干预组胎鼠上述发育指标值为(2.669±0.096)g、(3.356±0.107)cm、(1.206±0.041)cm,均较BaP组有上升(P<0.05)。形态学观察发现,BaP组胎鼠海马组织齿状回区出现神经元皱缩和染色加深,LiCl干预组有改善。Western blotting结果显示:与对照组相比,BaP组pGSK-3β表达降低(对照组和BaP组的灰度值比值分别为0.87±0.04、0.50±0.04,F=19.64,P<0.001),GSK-3β表达升高(对照组和BaP组的灰度值比值分别为1.53±0.14、2.09±0.11,F=5.90,P=0.011),β-catenin表达降低(对照组和BaP组的灰度值比值分别为1.41±0.14、0.90±0.04,F=11.16,P=0.001);LiCl干预可明显逆转由BaP暴露引起的pGSK-3β表达降低、GSK-3β表达升高及β-catenin表达降低的现象(灰度值比值分别为:pGSK-3β,0.69±0.08,P=0.036;GSK-3β,1.59±0.15,P=0.042;β-catenin,1.33±0.08,P=0.006)。[结论]LiCl干预可改善孕期BaP暴露诱导的大鼠胚胎生长发育迟缓及海马神经元损伤,其机制可能与LiCl抑制GSK-3β活性进而提高β-catenin的表达相关。