ACTH和吗啡对创伤痛大鼠海马锥体神经元NMDA受体通道的抑制

目的 探讨创伤痛大鼠海马锥体神经元NMDA受体通道动力学特性的变化及ACTH和吗啡的作用。方法 实验以双侧踝关节离断大鼠为创伤痛模型 ,应用细胞贴附式膜片钳技术。结果 在正常 7～ 10d大鼠急性分离的海马CA1区锥体神经元上 ,记录到多数膜片的NMDA受体通道有两个电导水平 ,分别为 5 0pS及 3 8pS ,以 5 0pS占多数 ,且以短开放为主 ,但也有长开放通道。 3 8pS电导仅有短开放通道。大鼠双侧踝关节完全离断后 2h ,5 0pS及 3 8pS短开放通道、5 0pS长开放通道的开放概率和开放时间均比正常对照组显著增加 ,还出现了 3 8pS长开放通道。在 5 0pS短开放通道的记录中 ,ACTH1 2 4 和吗啡可显著抑制创伤大鼠海马CA1区锥体神经元NMDA受体通道的开放概率和开放时间 ;预先加入阿片受体拮抗剂纳络酮能阻断上述的抑制效应。结论 ACTH和吗啡对伤害性信息传递的调制作用可能与其通过阿片受体抑制创伤大鼠海马NMDA受体通道动力学特性的变化有关。

异丙酚对小鼠海马锥体神经元膜特性和突触后电流的影响

目的观察异丙酚对小鼠鼠海马锥体神经元膜特性和突触后电流的影响。方法用冰冻切片的方法将C57小鼠海马半脑切成300μm厚度。运用全细胞膜片钳技术记录海马锥体神经元在异丙酚作用前后动作电位反应、I-V曲线及突触后电流反应后变化情况。结果异丙酚明显减少不同刺激强度下胞体动作电位产生的个数,加入异丙酚后使锥体细胞动作电位发放个数由5±3个降至2±1个(P<0.01),而对动作电位幅度无显著影响。异丙酚可改变海马锥体神经元对兴奋性电压刺激的I-V曲线平台期反应,使最大电流幅度由1647.63±124.02 p A增加至2955.08±119.10 p A(P<0.01)。异丙酚可降低锥体神经元突触后电流,加入异丙酚前为146.5±25.89 p A,加入异丙酚后为72.8±18.71 p A(P<0.01),20 min洗脱异丙酚后电流幅度恢复至132.1±30.2 p A(P<0.01)。结论异丙酚可降低海马锥体神经元动作电位发放数,改变I-V曲线兴奋性平台期反应和可逆地降低神经元突触后电流反应。

丙泊酚和依托咪酯对小鼠海马锥体神经元电生理特性影响的比较

目的:比较全身静脉麻醉药丙泊酚和依托咪酯对小鼠海马锥体神经元膜特性和微小突触后电流反应(m EPSCs)的影响。方法:运用全细胞膜片钳技术对C57小鼠海马细胞记录并比较分别在丙泊酚和依托咪酯作用前后动作电位反应和m EPSCs。结果:丙泊酚和依托咪酯均使神经元动作电位发放个数由8个降低至2个左右,使第一发放延时均显著延长,并使第一动作电位和第二动作电位峰值间隔显著增加,而动作电位峰值均无差异,另外丙泊酚组峰值间隔比依托咪酯组小。记录m EPSCs并分析发现丙泊酚组可降低m EPSCs发放频率,而对电流幅度和半峰宽无影响。依托咪酯组使m EPSCs发放频率降低,且使突触后电流幅度降低,半峰宽增加。结论:丙泊酚和依托咪酯均可抑制海马锥体细胞动作电位发放,且对动作电位发放延时和反应灵敏性均有抑制作用。丙泊酚通过抑制突触前囊泡释放来降低突触兴奋性传递,而对突触后无影响。依托咪酯同时抑制突触前囊泡释放和突触后通道灵敏性,从而抑制神经元m EPSCs反应。

大鼠海马锥体神经元的急性分离方法

目的：建立一种适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法,并对其离子通道进行描述。方法：采用酶加机械分离法制备10~12 d鼠龄的大鼠海马锥体神经元,用全细胞膜片钳技术测定其生理学特性。结果：分离出的神经元形态正常,有较长突起;用膜片钳技术证实,其保存了主要的离子通道活性。结论：建立一种简单快速的适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法。

利多卡因对大鼠海马锥体神经元NMDA介导钙电流的影响

目的 观察不同浓度利多卡因对中枢海马锥体神经元N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)介导钙电流的影响。方法 将已培养12-14 d的Wistar大鼠海马神经元按利多卡因浓度(10-5-10-1mol/L)分成5组,以不含利多卡因组做对照,共6组(n=6)。应用全细胞膜片钳方法,采用无间隙模式,采集记录各组大鼠海马神经元NMDA介导钙电流及各组静息电位的变化。结果 10-3、10-2、10-1组的电流密度较对照组降低(P<0.05或0.01);利多卡因浓度与电流密度呈直线负相关(r=0.76,P<0.01)。各组静息电位差异无显著性。结论 利多卡因可浓度依赖性抑制NMDA介导钙电流,低浓度利多卡因的神经保护作用可能与此有关。

氯胺酮对大鼠海马锥体神经元延迟整流钾电流的影响

目的观察氯胺酮对大鼠海马锥体神经元延迟整流钾电流(IK)的影响。方法酶消化法急性分离Wistar大鼠海马锥体神经元,采用全细胞膜片钳技术测定IK。加用不同浓度(10、30、100、300、1000μmol/L)氯胺酮后,计算IK抑制率,建立氯胺酮的浓度-效应曲线,选择30 μmol/L氯胺酮作IK 稳态激活(及失活)曲线。结果10、30、100、300、1 000μmol/L氯胺酮对IK的抑制率分别为(10±4)%、(19±4)%、(31±5)%、(50±7)%、(54±8)%。IC50为(100±18)μmol/L,Hill系数为1.33±0.48。激活曲线的半数最大激活膜电位(V1/2)(1.82±0.20)mV上升到(9.30±1.03)mV(n=8,P<0.05),K从(20.4±2.3)mV移动到(16.6±4.2)mV(P>0.05);失活曲线的V1/2从(-29±4)mV下降到(-73±6) mV(P<0.01),K从(26±6)mV上升到(53±11)mV(P<0.01)。30 μmol/L氯胺酮使IK的稳态激活曲线向去极化方向明显移动;使IK的稳态失活曲线向超极化方向明显移动。结论氯胺酮对IK通道有抑制作用,氯胺酮的对中枢神经系统的作用可能与IK抑制有关。

海马脑片CA1区锥体神经元的突触可塑性虚拟仿真实验教学

虚拟仿真技术优点卓越,具有极其广阔的应用前景,现如今其已经越来越多地应用于现代教学。该文主要以海马脑片CA1区锥体神经元的突触可塑性实验为切入点,对虚拟仿真实验教学技术在教学中的应用进行了深入研究,以期为今后虚拟仿真技术在教学领域的发展提供一定的指导和帮助。

可溶性Aβ25-35对大鼠海马CA3区神经元延迟整流钾电流的抑制作用

目的研究可溶性β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)对大鼠海马CA3区锥体神经元延迟整流钾电流(IK)的影响。方法采用酶消化法急性分离新生大鼠海马CA3区神经元,全细胞膜片钳技术观察加入可溶性Aβ25-35后IK的变化。结果可溶性Aβ25-35对IK的作用具有时间依赖性,IK随Aβ25-35作用时间的延长而减小,加药5～7min后作用趋于稳定。可溶性Aβ25-35对IK有明显抑制作用,加入5μmol/LAβ25-35前后IK峰值分别为(6.987±1.152)和(2.540±0.349)nA(n=8,P<0.01);该抑制作用没有明显的浓度依赖性,1、2.5和5μmol/L3个浓度的Aβ25-35使IK峰值减小率都在60%左右。5μmol/LAβ25-35可显著影响IK激活过程,作用前后的半数激活电压分别为(4.114±0.730)和(-5.463±0.950)mV(n=15,P<0.05),但不改变激活曲线的斜率因子。结论可溶性Aβ25-35对海马CA3区神经元IK的抑制作用可能是其产生神经毒性的作用机制之一。

长链非编码RNA参与七氟烷诱导的海马神经元凋亡

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)与七氟烷麻醉副作用的关联。方法采用小鼠模型分析七氟烷对海马锥体的影响,采用生物信息学方法分析GEO数据库中七氟烷处理的小鼠相关的lncRNA表达谱数据,筛选可能与七氟烷麻醉过程相关的lncRNA,并使用qPCR对lncRNA进行验证。结果七氟烷处理可导致小鼠海马锥体神经元结构异常,增加细胞凋亡。基因芯片分析显示,在小鼠(GSE155770)中,七氟烷处理后27个lncRNA出现差异表达。qPCR验证发现,经七氟烷处理后,小鼠海马组织lncRNA Gm11525和Gm19439的表达水平提高。结论不适量的七氟烷处理可引起海马锥体神经元结构改变和细胞凋亡,lncRNA可能参与了该病理性作用。

谷氨酸受体介导老龄大鼠经验依赖性空间探索可塑性的修复

正常的老化常伴随认知功能的下降，这种下降常常用与其功能相关的大脑结构的改变来解释。海马是一个在老龄化过程中易受损的区域，由于空间学习与记忆需要完整的海马结构，因此，很可能在老年的人类或其他动物测试到空间探索能力的缺失。成年大鼠重复相同的路径时，海马锥体神经元的空间区域不对称的扩展，此由行为所诱导出的神经元可塑性的表达是NMDA受体依赖的一种长时程增强（LTP）样的机制，并可用于海马神经网络的信息存储。

氟喹诺酮类抗菌药物的CNS毒副作用分析研究方法

氟喹诺酮类抗菌药物由于具有抗菌谱广,抗菌活性强组织渗透性好的特点。而成为临床上应用最广泛的抗菌药物之一,但有关它们毒副反应的报道也逐渐增多。我们根据药物毒理学研究指导原则对其CNS毒副反应进行了研究,发现:1 全身给药: 1.1 给小龄组大鼠iv诺氟沙星(NFLX),5.3mg/100g,癫痫样放电发生率分别为100％,87.5％和62.5％,癫痫样放电持续时间有明显差异;

基于网络药理学和实验验证探究胆南星对癫痫的作用机制

本研究采用网络药理学方法和膜片钳技术探究胆南星(Arisaema cum Bile)对癫痫(epilepsy)的作用机制。采用TCMSP数据库和文献挖掘获得胆南星的成分及靶点,通过GeneCards和OMIM数据库检索癫痫疾病靶点。应用STRING、DAVID在线平台进行蛋白互作(protein-protein interaction)、KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)信号通路和GO (Gene Ontology)基因功能富集分析。利用Cytoscape 3.7.2软件构建“中药-成分-靶点-通路-疾病”拓扑分析网络。动物实验已获得河北医科大学实验动物福利伦理委员会批准。网络药理学结果发现鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid, CDCA)、去氧胆酸(deoxycholic acid)和β-谷甾醇(β-sitosterol)等9个有效成分,及其相应的5-羟色胺转运体(5-hydroxytryptamine transporter)、GABA_(A)受体α2亚型(gamma-aminobutyric acid receptor type A subunit alpha2)和乙酰胆碱受体α-7亚型(neuronal acetylcholine receptor subunit alpha-7)等22个关键靶点。信号通路和基因功能富集分析结果涉及5-羟色胺能突触(serotonergic synapse)、GABA能突触(GABAergic synapse)和离子跨膜转运(ion transmembrane transport)等神经元兴奋性调节相关的通路。脑片电生理实验结果证明, β-谷甾醇和CDCA可抑制小鼠海马CA1锥体神经元动作电位(action potential),影响动作电位的基强度(rheobase)、发放延迟(delay)和去极化时程(depolarization duration),联合应用的抑制作用更加显著。本研究从网络药理学的角度结合电生理实验初步探讨了胆南星治疗癫痫的多成分、多靶点和多途径机制,为胆南星的进一步研究提供了思路。