中国黑茶对消化道肿瘤的作用

本实验利用HCT-8及SGC-7901两种细胞株研究黑茶对消化道肿瘤细胞生长的抑制作用,结果发现,黑茶具有良好的抑制消化道肿瘤细胞生长的作用。黑茶中含有两种抑制活性物质,其中对SGC-7901细胞株具有抑制能力的物质的极性要比对HCT-8细胞株具有抑制能力的物质极性低一些。黑茶具有对两种细胞株抑制的功能可能是多种物质成分共同作用的结果,而中低极性的物质抑制能力较强。

藤茶总黄酮对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用的实验研究

目的探讨藤茶总黄酮的体外抗肿瘤作用。方法采用MTT法、生长曲线法、细胞集落形成法观察藤茶总黄酮对人胃癌SGC-7901细胞抑制作用。结果藤茶总黄酮能明显抑制体外培养的SGC-7901细胞的生长,MTT法IC50为20.71μg.ml-1;细胞生长曲线法提示其对SGC-7901细胞的生长也有明显的抑制作用;集落形成法,当药物浓度在9.90μg.ml-1以上时抑制率为100%,当药物浓度为6.60μg.ml-1时抑制率为69.80%,当药物浓度为4.40μg.ml-1时抑制率为30.23%。结论藤茶总黄酮对体外SGC-7901细胞的生长有明显的抑制作用。

体外扩增CIK细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901

目的：观察CIK细胞增殖情况，了解扩增后的最佳应用时机，并观察体外对SGC-7901的杀伤作用。方法：健康人外周血单核细胞（PBMC）在体外条件下经过多种细胞因子的共同刺激诱导成CIK细胞，计数培养不同时间的CIK细胞，用流式细胞术检测CIK细胞的表型特征。用MTT法检测杀伤活性，对比CIK细胞与5-FU对SGC-7901的杀伤作用，并观察了两者联合应用的效果。结果：CIK细胞随体外培养时间的延长，数量及杀伤活性均增加。体外培养20d增殖124倍，CD3^＋、CD56^＋双阳性细胞的比例达66．1％，其后两者数量增长缓慢；体外实验显示CIK细胞对胃癌SGC-7901细胞株有明显的杀伤作用，最高杀伤效率为73．13％，其杀伤作用优于5-FU，P〈0．05。二者联合应用杀伤作用降低。结论：CIK细胞具有较强的抗胃癌细胞活性；体外培养15～20d时应用较为合适；联合应用时5-FU可降低CIK细胞的杀伤效率。

siRNA沉默survivin对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用

目的:探讨siRNA沉默survivin基因表达对胃癌细胞生长的抑制作用及其机制,为胃癌及survivin阳性肿瘤的治疗提供理论依据。方法:针对survivin mRNA序列设计合成编码siRNA的DNA模板,构建2个重组质粒pGCsilencerU6/GFP/survivin siRNA-1和-2;实验分为脂质体对照、空质粒转染对照及survivin siRNA重组质粒转染治疗组,转染胃癌细胞SGC-7901,采用RT-PCR法检测survivin mRNA的表达,Western blotting检测蛋白表达,观察重组质粒对其转染的SCG-7901细胞survivin基因表达的影响;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测量细胞生长情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:Western blotting、RT-PCR结果证实转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1的SCG-7901细胞survivin蛋白质及mRNA抑制率(78.25%及88.75%)均高于脂质体对照组(5%及2%)和空质粒对照组(1%及6%)(P<0.01);转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-2的SCG-7901细胞survivin蛋白质及mRNA抑制率(42%及77%)也均高于脂质体对照组和空质粒对照组(P<0.01);MTT法检测结果显示转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1组细胞体外生长的抑制率(64%)高于空质粒对照组(11%)(P<0.01);流式细胞术检测的转染重组质粒pGCsilenerU6/GFP/survivin-siRNA-1组细胞凋亡率(21.20±3.21)高于脂质体对照组(0.830±0.001)和空质粒对照组(1.98±0.67)(P<0.01)。结论:重组质粒pGCsilencerU6/GFP/survivin-siRNA可抑制胃癌细胞中survivin的表达,并抑制胃癌细胞生长,促进其凋亡。

低分子肝素对胃癌SGC-7901细胞增殖及其hTERT表达的影响

目的探讨低分子肝素(LMWH)对胃癌SGC-7901细胞增殖及其人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的影响。方法不同浓度LMWH作用于SGC-7901细胞不同时间后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测细胞hTERT mRNA。结果LMWH作用后,SGC-7901细胞的生长受抑制,呈剂量和时间依赖性,细胞停滞于G1期,其hTERT mRNA表达下降。结论LMWH可抑制SGC-7901细胞的生长,其机制可能与阻滞细胞周期、降低hTERT mRNA的表达有关。

白藜芦醇对胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖和凋亡作用的实验研究

目的:研究白藜芦醇(resveratrol,Res)影响人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的机制。方法:使用不同浓度Res处理SGC-7901细胞不同时间后,采用MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;FCM和TUNEL法检测分析细胞周期和细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测细胞中bcl-2、bax、caspase-3和Fas蛋白的表达;RT-PCR检测Fas、bcl-2、bax、caspase-3 mRNA的表达。结果:Res对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用随着Res作用时间的延长和浓度的增加而明显增强(P<0.01,P<0.05),同时能诱导其发生凋亡(P<0.01);Res(150μmol/L)能明显上调SGC-7901细胞中bax、caspase-3、Fas mRNA及其蛋白的表达,下调bcl-2 mRNA及其蛋白的表达。结论:Res抑制SGC-7901细胞的增殖、诱导细胞凋亡呈浓度、时间依赖性;这可能与Res上调肿瘤细胞Fas、bax和caspase-3的表达及下调bcl-2的表达有关。

人胃癌SGC-7901细胞胞浆胞核性激素受体测定

作者采用葡聚糖包被活性碳饱和分析法（DCC法）分别测定了培养的人胃低分化腺癌SGC－7901细胞的胞浆及胞核KCL抽提液中的雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和雄激素受体（AR）的含量。结果证明胃癌SGC-7901细胞的胞浆及胞核抽提液中ER含量为30．2和35．7fmol/mg蛋白，而PR的含量为20．3和22．7fmol／ng蛋白，但AR均为阴性（＜10fmol／mg蛋白），这说明SGC-7901细胞为ER及PR阳性细胞，其ER和PR在胞浆、胞核中均有分布。提示胃癌可能为性激素依赖性肿瘤，有内分泌治疗的可能。

氧化苦参碱注射液联合小剂量紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞血管内皮生长因子及CXC趋化因子受体4表达的影响

目的：探讨氧化苦参碱注射液联合小剂量紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞中血管内皮生长因子（vascularendothelial growthfactor,VEGF）、CXC趋化因子受体4（CXCchemokinereceptor 4,CXCR4）mRNA及蛋白表达的影响。方法：采用甲基噻唑基四唑法观察氧化苦参碱注射液联合小剂量紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;采用实时逆转录聚合酶链反应法、免疫荧光法、酶联免疫吸附法分别检测氧化苦参碱注射液联合小剂量紫杉醇对人胃癌SGC-7901细胞中VEGF、CXCR4 mRNA及蛋白表达的影响。结果：单独使用40μg/mL氧化苦参碱注射液或小剂量（20μg/mL）紫杉醇作用于SGC-7901细胞后,与对照组比较,除了20μg/mL紫杉醇对VEGF在mRNA水平无明显影响外（P〉0.05）,两者均能抑制细胞增殖,减少VEGF、CXCR4在mRNA及蛋白水平的表达（P〈0.01）;两者联用后能明显降低SGC-7901细胞VEGF、CXCR4 mRNA及蛋白的表达,与单用小剂量紫杉醇相比差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：氧化苦参碱注射液联合小剂量紫杉醇具有明显的抑制人胃癌SGC-7901细胞VEGF和CXCR4的作用,这可能是氧化苦参碱注射液抗肿瘤血管生成的机制之一。

转染FRZB基因对人胃癌SGC-7901细胞生长和转移的影响

背景与目的:FRZB(frizzled motif associated with bone development)是sFRP(secreted frizzled related protein)家族的成员,在胚胎发育过程中起重要作用。有文献报道FRZB的表达能抑制基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和MMP-9表达而与前列腺癌的侵袭能力相关。本研究拟探讨FRZB基因对人胃癌SGC-7901细胞成瘤性和侵袭能力的影响,及其可能的机制。方法:构建FRZB真核表达载体并转染SGC-7901细胞,经G418筛选获得稳定表达克隆。用MTT法检测并绘制细胞增殖曲线,软琼脂培养和裸鼠皮下注射的体外和体内实验检测细胞成瘤性变化。用细胞免疫化学检测转染FRZB后细胞中MMP-2、MMP-7、MMP-9的表达变化,体外侵袭和粘附实验检测细胞侵袭能力变化。结果:筛选稳定表达细胞株经定量PCR检测,FRZB表达显著提高。体内外实验证实,转染FRZB的细胞(SGC-7901/FRZB)生长抑制率约为60%,克隆形成能力和成瘤性减弱。免疫细胞化学显示MMP-2、MMP-7、MMP-9在细胞浆内的阳性表达降低或接近阴性,对细胞外基质成分(CollagenI、IV、Vitronectin、Fibronectin、Laminin)粘附能力均增高,比空载体转染对照组(SGC-7901/vector)增加12.8%、19.8%、59.8%、26.7%、15.2%,差异具有显著性(P<0.05),而空载体转染对照组与亲本细胞间差异无统计学意义(P>0.05)。SGC-7901、SGC-7901/vector和SGC-7901/FRZB细胞侵袭能力分别是每高倍视野55.90±5.68、54.80±6.97、6.60±2.63,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:FRZB高表达在体内体外均可抑制SGC-7901细胞的增殖、成瘤性和侵袭能力,具有肿瘤抑制基因的功能。FRZB抑制肿瘤细胞的生长和抑制MMP-2、MMP-7、MMP-9的表达为抑癌功能相关机制之一。

CIK细胞及上清液抗胃癌细胞株SGC-7901活性的研究

目的:探讨由多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在体外的增殖情况,分析体外CIK细胞对胃癌细胞株SGC-7901的杀伤作用。方法:健康人外周血单核细胞(PBMC)在体外诱导成CIK细胞,计数培养不同时间的CIK细胞,并用流式细胞术动态分析其表型特征。倒置显微镜下观察CIK细胞作用于SGC-7901胃癌细胞的形态学变化;流式细胞仪检测CIK细胞培养上清液对胃癌细胞的诱导凋亡作用;采用MTT法检测CIK细胞对SGC-7901胃癌细胞株的杀伤活性。结果:CIK细胞随体外培养时间的延长,数量及杀伤活性均增加。体外培养21d,细胞总数增殖倍数111.63±10.97,CD3+CD56+双阳性细胞数量亦增加,比例达(35.8±9.7)%,其后两者数量逐渐降低。CIK细胞上清液能够诱导胃癌细胞株凋亡;CIK细胞对胃癌SGC-7901细胞株有明显的杀伤作用,最高杀伤率为(74.91±2.71)%。结论:CIK细胞具有较强的抗胃癌细胞活性,体外培养14～21d时具有较强的抗瘤活性,其主要通过直接杀伤及释放细胞因子诱导凋亡的作用杀伤肿瘤细胞。

HDAC在PPARγ途径抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭中的作用

背景与目的:有研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacety lase,HDAC)能抑制过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)促进脂肪细胞分化的能力;最近发现PPARγ活化后,能够抑制多种肿瘤细胞的生长与侵袭。本研究旨在观察HDAC在PPARγ途径影响胃癌细胞株SGC-7901侵袭能力中的作用及机制。方法:用不同浓度的HDAC抑制剂曲古抑菌素A(TSA)和PPARγ配体罗格列酮(ROZ)分别作用于SGC-7901细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测两种药物对细胞增殖的抑制作用,以筛选出合适的联合浓度。将SGC-7901细胞随机分为对照组、TSA组、ROZ组和TSA与ROZ联合组。MTT法检测细胞增殖抑制率,Transwell小室法检测各组胃癌细胞侵袭能力,RT-PCR法检测各组细胞PPARγ、MMP-2mRNA表达情况,Westernblot检测MMP-2蛋白的表达。结果:5μmol/LROZ和40nmol/LTSA为无明显细胞毒性作用的最高浓度,低于此浓度的ROZ及TSA可减弱SGC-7901细胞的侵袭能力(P<0.01)。5μmol/LROZ与20nmol/LTSA联合作用对SGC-7901细胞的侵袭抑制呈协同作用(q=1.41>1.15)。ROZ可以下调SGC-7901细胞MMP-2mRNA和蛋白的表达(P<0.01),TSA与ROZ联合处理组细胞MMP-2表达下调较单用ROZ组明显(P<0.01)。RT-PCR结果显示,TSA作用SGC-7901细胞后,可使PPARγ表达增加(P<0.01)。结论:HDAC通过一系列分子机制限制PPARγ的激活,应用TSA抑制HDAC活性后,可以使ROZ抑制胃癌细胞的侵袭活性增强。

TRAIL联合紫杉醇诱导胃腺癌SGC-7901细胞凋亡作用研究

目的:观察紫杉醇联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用及其协同作用机制。方法:将TRAIL、紫杉醇及TRAIL联合紫杉醇诱导SGC-7901细胞48小时,用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和线粒体跨膜电位的改变;用MTT法检测SGC-7901细胞增殖反应;用免疫印迹(Westernblot)法检测TRAIL死亡受体DR4(TRAIL-R1)、DR5(TRAIL-R2)的表达变化。结果:TRAIL和/或紫杉醇对SGC-7901细胞增殖有抑制作用,两者联合用药组对细胞增殖的抑制率较单独用药明显增加(P<0.01);联合用药组细胞凋亡率较单独用药组明显增加(P<0.01);0.3μmol/L紫杉醇作用48小时后,DR4表达明显升高(P<0.05),而DR5表达没有明显改变(P>0.05)。结论:紫杉醇可协同TRAIL诱导SGC-7901细胞凋亡,DR4表达增加可能是其协同作用的机制。

ATP1B1真核表达质粒的构建及其对胃腺癌SGC-7901细胞的作用

目的构建Na+,K+-ATP酶β1亚基(ATP1B1)真核表达质粒,为利用ATP1B1进行肿瘤基因治疗奠定基础。方法以白细胞文库为模板扩增ATP1B1 cDNA,定向插入到pEGFP-C3真核表达质粒中,构建pEGFP-ATP1B1重组质粒;经酶切分析和测序鉴定后,通过脂质体介导转染胃腺癌SGC-7901细胞,利用real-time PCR检测转染后SGC-7901细胞的ATP1B1基因表达,并进行其ATP酶活性检测;MTT法测定转染后SGC-7901细胞的增殖活性。结果重组质粒经鉴定证实含有ATP1B1 cDNA序列,转染pEGFP-ATP1B1的SGC-7901细胞ATP1B1基因表达增高达129.2%,ATP酶活性增强为(2.95±0.210)%,细胞生长增殖显著受抑。结论成功构建了ATP1B1真核表达质粒,为进一步利用ATP1B1研究恶性肿瘤基因治疗奠定基础。

TGFβ1对胃腺癌细胞SGC-7901Bcl-2表达的影响

目的：研究转化生长因子β1（transforminggrowthfactorβ1，TGFβ1）对胃癌细胞Bcl-2表达的影响．方法：TGFβ1作用于人胃癌细胞SGC－7901，48h后收集细胞爬片．用抗Bcl－2mAb和免疫组织化学SABC法及图像分析技术分析Bcl－2．结果：TGFβ1作用的胃腺癌细胞Bcl－2表达量A值122．624±0．385，较对照组细胞108．925±0．094下降显著（P＜0．05）．结论：TGFβ1对胃癌细胞的凋亡诱导作用可能与其影响Bcl－2表达有关．

蝙蝠葛提取物引起胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的:研究蝙蝠葛提取物体外对人胃癌SGC-7901细胞株的形态学改变。方法:应用MTT法、倒置显微镜、HE染色、Hoechst荧光染色以及吖啶橙/溴化乙锭荧光染色方法检测蝙蝠葛提取物对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞的形态学改变。结果:蝙蝠葛提取物对人胃癌SGC-7901细胞株具有抗增殖作用,并呈时间-浓度依赖性。倒置显微镜、HE染色观察示核固缩、边集以及凋亡小体的形成等典型形态学改变。Hoechst荧光染色,AO/EB双染色结果也显示细胞死亡主要以凋亡为主。结论:蝙蝠葛提取物体外对人胃癌SGC-7901细胞株具有抗增殖及诱导凋亡作用。

性激素对胃癌细胞株SGC-7901体外培养的影响

目的：探讨性激素在体外对胃癌细胞生长的影响。方法：选对数生长期细胞，加入不同浓度的雌二醇和睾酮，７ｄ后显微镜下计数，观察生长情况。结果：生理浓度的雌二醇和睾酮均促进胃癌细胞生长（Ｐ＜０．０１），高浓度睾酮抑制胃癌细胞生长；睾酮能拮抗雌二醇作用。

钙敏感受体对SGC-7901细胞内钙、细胞增殖和迁移的影响

目的观察钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaSR)在人胃癌SGC-7901细胞中的表达,对细胞内钙、增殖和迁移的影响。方法 (1)采用Western blot及免疫荧光染色技术分析CaSR蛋白在人胃癌SGC-7901细胞的表达;采用激光共聚焦扫描技术检测CaSR活化对细胞内钙离子([Ca^(2+)]_i)的影响;应用MTT法、流式细胞仪技术、细胞划痕实验检测CaSR活化对SGC-7901细胞增殖和迁移的影响。结果 CaSR蛋白在人胃癌SGC-7901细胞有表达;增加细胞外钙或者给予Calindol(CaSR激动剂)均可引起[Ca^(2+)]_i、CaSR和E-cadherin的表达增加;CaSR活化对SGC-7901细胞的增殖无明显影响;细胞划痕实验结果显示细胞迁移能力下降。结论 CaSR在人胃癌SGC-7901细胞中有表达,并通过诱导E-cadherin的表达使SGC-7901细胞迁移能力降低。

曲古菌素A联合5-FU对人胃癌SGC-7901细胞生长及其PLK1基因表达的影响

目的:探讨曲古菌素A(TSA)与5-氟尿嘧啶(5-FU)对人胃癌细胞(SGC-7901细胞)生长及其Polo样激酶1(PLK1)基因表达的影响。方法:将实验设为对照组、TSA 150 ng/mL组(TSA组)、5-FU 20μg/mL组(5-FU组)、TSA 150 ng/mL+5-FU 20μg/mL组(TSA+5-FU组)四组,用MTT比色法测定各组对SGC-7901细胞的生长影响,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR分析SGC-7901细胞PLK1 mRNA表达,Western Blot法检测PLK1蛋白表达。结果:TSA和(或)5-FU分别作用24、48、72 h后均能抑制胃癌细胞生长,TSA+5-FU组较TSA组或5-FU组生长抑制作用显著增强,且随着药物作用时间的延长,抑制作用增强更明显;流式细胞术检测显示干预胃癌细胞48 h后,TSA+5-FU组G0/G1期比率为(85.23±2.17)%,较TSA组或5-FU组显著增多;TSA和(或)5-FU干预胃癌细胞48 h后,TSA+5-FU组较TSA组或5-FU组显著减弱PLK1基因mRNA转录及蛋白表达。结论:TSA联合5-FU干预,抑制人胃癌SGC-7901细胞生长,阻止细胞周期于G0/G1期,癌基因PLK1mRNA转录及蛋白表达减少均较TSA组或5-FU组明显。

NM-3及氧化苦参碱对裸鼠体内耐药人胃癌细胞SGC-7901的分子作用

目的 探讨NM - 3及氧化苦参碱对裸鼠体内多药耐药人胃癌细胞SGC - 790 1的抑制作用及其抗肿瘤作用的分子机制。方法 建立多药耐药人胃癌SGC - 790 1细胞的皮下移植瘤模型并随机分成生理盐水对照组,NM - 3、氧化苦参碱、NM - 3联合氧化苦参碱治疗组。每组裸鼠在胃癌组织移植7周后处死,并测算其肿瘤抑制率和采用TUNEL(末端脱氧核酸转移酶原位标记)和流式细胞仪法分析其凋亡指数。结果 NM - 3治疗组( 10mg/L、2 0mg/L)对多药耐药SGC - 790 1细胞皮下移植瘤的抑制率显著增加,其凋亡率分别是( 11.2 0±0 .18) %和( 12 .2 0±1.6 5 ) % ,两者比较无差异( P >0 .0 5 ) ;NM - 3联合氧化苦参碱治疗组凋亡指数(AI)为( 5 1.2 0±4 .2 3) % ,显著高于NM - 3治疗组和生理盐水对照组( 1.2 7±0 .11% ,P <0 .0 1)。结论 NM - 3可以增强氧化苦参碱对多药耐药细胞SGC - 790 1的抑制作用,诱导裸鼠体内人胃癌细胞的凋亡。

姜黄素联合木黄酮对人胃癌细胞株SGC-7901的作用

目的 :体外观察姜黄素及木黄酮对人胃癌细胞株 (SGC - 790 1)的联合作用。方法 :采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物效应 ,利用中效原理判定两药合用的效果。结果 :两药单独应用时随着药物剂量增加 ,其效应也增加 ,呈剂量 -效应关系 ;两药合用时合用指数CI<1。结论 :姜黄素联合木黄酮对人胃癌细胞株SGC - 790 1的作用是协同作用。