消旋酶法DL-丙氨酸的遗传毒性研究

目的评价消旋酶法DL-丙氨酸的遗传毒性。方法小鼠骨髓细胞微核实验设阴性对照组(纯水)、阳性对照组(环磷酰胺40 mg/kg)和消旋酶法DL-丙氨酸3个剂量组(10 000、5 000和2 500 mg/kg),观察各组小鼠胸骨骨髓细胞微核发生率;小鼠精原细胞染色体畸变实验设阴性对照组(纯水)、阳性对照组(环磷酰胺40 mg/kg)和消旋酶法DL-丙氨酸3个剂量组(10 000、5 000和2 500 mg/kg),观察各组小鼠睾丸精原细胞染色体畸变类型并计算畸变率。细菌回复突变实验(Ames实验)设空白对照组、溶剂对照组、阳性对照组和消旋酶法DL-丙氨酸5个剂量组(50、158、500、1 580、5 000μg/皿和8、40、200、1 000、5 000μg/皿),计数各组回复突变菌落数。结果小鼠骨髓细胞微核实验结果显示,各剂量组消旋酶法DL-丙氨酸微核细胞率与对照组的差异无统计学意义(P>0.05);小鼠精原细胞染色体畸变实验结果显示,各剂量组消旋酶法DL-丙氨酸动物睾丸精原细胞染色体畸变率与对照组的差异无统计学意义(P>0.05);细菌回复突变实验结果显示,在加或不加S9的情况下,各剂量组消旋酶法DL-丙氨酸对TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535菌株均无致突变作用,差异无统计学意义(P>0.05)。结论消旋酶法DL-丙氨酸未见明显遗传毒性。

DL-苯丙氨酸的酶法拆分研究

利用氨基酰化酶能立体专一地水解氨基酰化物的特点,选择性地水解N-乙酰-L-苯丙氨酸得到L-苯丙氨酸,经分离后再水解N-乙酰-D-苯丙氨酸得到D-苯丙氨酸。研究中分别考察了pH值、温度、酶用量、底物浓度和钴离子对反应的影响。在优选条件下(底物浓度为0.1mol·L-1,pH7.0,温度37℃,酶用量为w(酶)/w(底物)=1∶41.4,加入浓度为1×10-3mol/L的Co2+,将N-乙酰-D-苯丙氨酸用有机溶剂结晶和盐酸水解10h)得到光学纯度OP=98.8%的L-苯丙氨酸,收率70.3%;OP=96%的D-苯丙氨酸,收率63%。

巴西苏木素对MRSA丙氨酸消旋酶抑制作用的初步研究

目的 探讨巴西苏木素(BN)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)丙氨酸消旋酶(Alr)的抑制作用。方法 PCR扩增MRSA丙氨酸消旋酶基因Alr,通过使用酶切和连接技术构建重组表达质粒pET-28a-Alr,然后将其转化至E.coil BL21(DE3)中,利用IPTG诱导表达Alr,并通过镍离子亲和层析法进行纯化;试验分为对照组MOCK(不作任何处理)、不同浓度BN组(8、16、32、64μg/mL),分别测定不同浓度BN对Alr活性的影响;通过细胞热位移分析(CETSA)实验测定BN对Alr蛋白热稳定性的影响;利用软件AutoDock Vina将BN与Alr进行分子对接,预测两者之间的结合模式。结果 成功诱导表达纯化Alr蛋白,且其具备将L-丙氨酸外消旋为D-丙氨酸的活性。与对照组相比,不同浓度的BN均能够抑制Alr的活性,其中在64μg/mL BN作用下,抑制率达到50%(P<0.0001)。CETSA实验结果显示,在55.9~59.5℃下BN处理后的Alr蛋白热稳定性明显高于Mock组(P<0.0001)。分子对接结果显示BN与Alr之间的结合能为-8.0 kcal/mol,与Alr活性位点内的Gly221、Phe169、Arg219、Ser204、Ile222和Tyr43形成氢键,与其活性位点通道的Ile352、Tyr354形成π-π键及疏水作用,与Asn203形成疏水作用。结论 BN对Alr的活性具有抑制作用,可能是因为BN与Alr蛋白活性位点处的结合能力相关。

2,9-二甲基-1,10-菲咯啉的dl-丙氨酸衍生物的合成表征及其镧(Ⅲ)配合物与 DNA作用光谱研究

以２，９－二甲基－１，１０－菲咯啉为初始原料，合成了２，９－二甲基－１，１０－菲咯啉的ｄｌ－丙氨酸衍生物：１，１０－菲咯啉－２，９－二亚甲基亚氨基－（２，２’－二甲基）二乙酸（Ｌ）。该配体经过元素分析。红外光谱、核磁共振氢谱表征。在 ２５±０．１℃、 Ｉ＝ ０．１ｍｏｌ·ｄｍ^（－３）ＮａＮＯ_３的条件下，用ｐＨ电位滴定法测定了该配体的质子化常数及其与Ｌａ（Ⅲ）的配合物的稳定常数。通过电子光谱研究了Ｌｂ（Ⅲ）的配合物与小牛胸腺 ＤＮＡ的相互作用。用溴化乙锭作为荧光探针研究了 Ｌａ（Ⅲ）－Ｌ配合物与小牛胸腺 ＤＮＡ的相互作用的过程。作为对比，也研究了 Ｌａ（Ⅲ）分别与１，１０－菲咯啉（Ｐｈｅｎ）、 ｄｌ－丙氨酸（ Ａｌａ）的配合物与小牛胸腺 ＤＮＡ的相互作用。结果表明 Ｌａ（Ⅲ）－Ｌ配合物与小牛胸腺ＤＮＡ作用既有共价键合，又有插入作用。

米曲氨基酰化酶的纯化及固定化酶法拆分D,L-丙氨酸

利用硫酸铵分级与双水相萃取结合的方法从米曲霉中提取米曲氨基酰化酶，并将其固定在ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５上，用于拆分Ｄ，Ｌ－丙氨酸。

固定化米曲霉菌体填充床拆分DL-丙氨酸的动力学行为

分析了固定化米曲霉拆分DL-丙氨酸的动力学特性,通过间歇反应器的实验数据处理,获得了酶促反应的动力学参数. 应用填充床的一维稳态轴向扩散模型进行数值求解,得到了模型计算值,与实验结果比较表明,提出的模型能较好地描述固定化菌体连续拆分DL-丙氨酸过程.

固定化米曲霉菌体细胞光学拆分DL-丙氨酸

将米曲霉经液体培养生长成直径１～２ｍｍ的浅黄色菌球，用明胶甲醛固定，得到拆分Ｎ乙酰ＤＬ丙氨酸酶活力较高和反应性能较好的固定化细胞。考察了各种因素对固定化细胞酶活力的影响。当底物浓度小于０１５ｍｏｌ／Ｌ，底物抑制现象不明显。

氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸

用具有氨基酰化酶基因的大肠杆菌工程菌构建固定化细胞,并对DL-丙氨酸进行酶拆分进行了实验研究。考察了温度、pH、底物浓度、金属离子和时间对酶促反应的影响。确定了氨基酰化酶固定化细胞光学拆分DL-丙氨酸中酶促反应的最佳工艺条件:pH=7.5,温度50℃,反应时间6h,Co2+离子浓度5×10-4mol/L,在该条件下,D-丙氨酸产率为87.2%,光学纯度为98.0%。

丙氨酸消旋酶的研究进展

简要介绍了丙氨酸消旋酶的分类、结构特征和催化机制。

L-丙氨酸酶法工业生产的研究

在800升气升式发酵罐上培养假单胞菌Pse.NX-1,获得高L-天冬氨酸-β-脱羧酶酶活,以L-天冬氨酸为底物游离细胞法转化生产L-丙氨酸,每升培养液可转化L-天冬氨酸2kg,最高达2.5kg,提取得到L-丙氨酸1.2kg,平均收率90％,产品质量达到美国药典XXⅢ版标准和日本味之素90版标准。

DL-丙氨酸的急性经口毒性和28天经口毒性研究

目的通过DL-丙氨酸的急性经口毒性和28 d经口毒性试验研究,初步判断DL-丙氨酸作为食品添加剂的安全性。方法分别按照国标的GB 15193.3-2014和GB 15193.22-2014方法来进行急性经口毒性试验和28 d经口毒性试验,然后将大鼠的各项数据进行对比分析。结果急性经口毒性试验中无毒作用表现,雌雄大鼠的经口LD50>10000 mg/(kg BW)。28 d经口试验中大鼠一般状况正常,期末体重增长、进食量、食物利用率等指标未发现明显的改变;血常规、凝血、血生化及尿常规等指标均未发现有意义的异常改变;雄性高剂量组肾脏系数与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),各剂量组间具有剂量-反应关系,其他未见异常情况;病理学检查未见与受试物有关的病理性改变。结论 DL-丙氨酸在本研究中未见毒性作用,但长期食用的安全性尚需进一步研究。

恶臭假单胞菌丙氨酸消旋酶基因的克隆、序列分析及表达

从恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)200的基因组出发,用PCR方法克隆到两个独立作用的丙氨酸消旋酶基因,称之为dadX和alr。DadX编码357个氨基酸长的多肽,计算分子量为38.82kDa,alr编码409个氨基酸长的多肽,计算分子量为44.182kDa。序列分析显示,DadX的氨基酸序列与Pseudomonas putidaKT2440,铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和大肠杆菌(Escherichia coli)的DadX比较,相似性分别为96.64%、71.99%、44.88%和47.37%。Alr的氨基酸序列与Pseudomonas putidaKT2440比较,同源性为94.38%,而与铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)、鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)和大肠杆菌(E.coli)的Alr比较,同源性均较低,分别为22.89%、25.72%和26.44%。在P.putida200的DadX和Alr氨基酸序列中部发现有对于酶活性至关重要的保守区域,如磷酸吡哆醛(PLP)结合位点。DadX和alr在大肠杆菌中得到表达,DadX丙氨酸消旋酶只对丙氨酸有消旋作用,而Alr丙氨酸消旋酶可以作用于丙氨酸和丝氨酸两种底物,且对丝氨酸特异性更高。Alr的表达不依赖于外源启动子,说明在其结构基因上游存在启动子结构。

化学—酶法立体控制合成光学纯3－（2－吡啶基）丙氨酸的新方法

化学—酶法立体控制合成光学纯３－（２－吡啶基）丙氨酸的新方法赵健身，朱立，杨顺楷（中国科学院成都生物研究所成都６１００４１）３－（２－吡啶基）丙氨酸作为非天然含氮芳香族氨基酸，不仅自身有显著的药物活性，如抗炎（１）等，而且在生物活性肽类结构改造及其它...

酶法合成中丙氨酸的检测

本文建立了丙氨酸在醋酸缓冲液中形成丙氨酸-铜配离子及其十二烷基磺酸配离子对，使其紫外无吸收的丙氨酸在230nm处于有强紫外吸收，从而对酶法合成中的丙氨酸进行定量分析．该法在0～50mg／L范围内有良好的线性关系，直线方程为A(230)=0.01712·C（n=5）C：mg／L）。相关系数为0．9994，回收率为96．8％～104．0％，且该法不受酶反应液的影响，实验结果证明该检测体系简单、实用、测定结果可靠。

表面活性剂对酶法转化生产丙氨酸的影响

探讨几种表面活性剂对Ｌ天冬氨酸β脱羧酶活性的影响，发现活性剂Ｈ对酶活有较大促进作用，并对促进作用机理进行了探讨．

抗菌药物治疗疾病的新靶位--丙氨酸消旋酶

丙氨酸消旋酶是以磷酸吡哆醛为辅酶,催化L-丙氨酸与D-丙氨酸相互转化的一种酶,它广泛分布在低等生物,而不存在于人类等高等真核生物中.来自不同物种的丙氨酸消旋酶一级结构同源性较高,其大多功能单位为同源二聚体,拥有2个相同的活性中心,每个活性中心均是由来自不同亚基的2个保守残基共同组成.丙氨酸消旋酶催化生成的产物D-丙氨酸是合成细菌细胞壁肽聚糖的重要成分,也是调节细菌孢子萌芽的关键因子.因而丙氨酸消旋酶与由细菌引起的肺结核、炭疽热、中耳炎等疾病密切相关.近年来丙氨酸消旋酶已成为设计抗菌药物的又一理想靶位.本文从丙氨酸消旋酶的结构、功能、作用机理、抑制剂以及其与疾病的关系等方面进行了阐述.

酸枣仁汤对DL-4-氯苯基丙氨酸所致失眠的药效学研究

目的:探讨酸枣仁汤治疗DL-4-氯苯基丙氨酸所致失眠大鼠的药理作用机制。方法:将50只大鼠随机分为正常对照组、模型组、地西泮组、酸枣仁汤大剂量组、酸枣仁汤小剂量组,每组10只,适应性喂养2 d,2 d后开始给药,并每天称体质量,大剂量组灌胃给予酸枣仁汤12 g·kg^(-1),小剂量组灌胃给予酸枣仁汤6 g·kg^(-1),地西泮组灌胃给予地西泮溶液1 mg·kg^(-1),正常对照组与模型组根据体质量灌胃等体积蒸馏水。建立DL-4-氯苯基丙氨酸(PCPA)大鼠失眠模型,观察酸枣仁汤对失眠大鼠自主活动次数的影响,Elisa法检测其脑内5-羟色胺(5-hydroxytvyptarmne,5-HT)、谷氨酸(glutamate,GLU)、伽马氨基丁酸(gamma amino butyric acid,GABA)、去甲肾上腺素(noradren dline,NE)及其代谢产物五羟吲哚乙酸(5-HIAA)的含量。结果:与模型组比较,地西泮组、酸枣仁汤大剂量组、酸枣仁汤小剂量组大鼠自主活动次数高于模型组,但差异无统计学意义(P>0.05);酸枣仁汤大剂量组、酸枣仁汤小剂量组5-HT、5-HIAA、GABA、GLU、NE的含量均有明显变化,与模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:酸枣仁汤小剂量组可以明显改善PCPA所致失眠对大鼠的影响,主要体现在大鼠自主活动次数的增加,以及5-HT、5-HIAA等指标的恢复。

微波辐射下L-丙氨酸消旋反应研究与优化

微波辐射下的L-丙氨酸消旋反应是一种新的工业化生产方法,具有环保的优点。本文应用单因素轮换试验法考察了反应的影响因素,而后通过响应面分析法对各影响因素进行优化,确定了在微波辐射下,以560W的微波输出功率,用1.2mol/L氢氧化钠水溶液替代乙酸作为反应溶剂,用0.14摩尔比的水杨醛为催化剂,L-丙氨酸可以快速消旋。得出消旋反应随微波辐射功率的提高而加快。同时也讨论了微波作用下L-丙氨酸的消旋反应机理。

DL-α-丙氨酸合成工艺的新进展及其应用

介绍了国内外目前制备 DL- α-丙氨酸的几种工艺 ,并提出了多元溶剂循环合成和反馈式离子膜法分离 DL- α-丙氨酸的生产新工艺 .该工艺避免了使用大量有毒溶剂——甲醇 ,降低能耗5 0 %以上 ,减少了设备投资 ,提高了产品质量 ,并能回收氯化铵副产物 ,显著降低了原料成本 ,基本消除了三废 .同时介绍了 DL- α-丙氨酸的应用 .

铜绿假单胞菌中丙氨酸消旋酶的酶学特性及菌株检测

铜绿假单胞菌为条件致病菌,是目前各种医院内感染最广泛、最严重的致病菌之一.以分离自公共场所洗手液的菌株6-3为研究对象,其16S rRNA基因与Pseudomonas aeruginosa DSM 50071的16S rRNA基因的一致性为99.8%,初步确定其为铜绿假单胞菌;根据同源蛋白的核苷酸序列设计菌株6-3中丙氨酸消旋酶的扩增引物,通过PCR从6-3菌株中克隆获得了丙氨酸消旋酶基因(alrPa),基因序列与P. aeruginosa PAO1中丙氨酸消旋酶Alr_(PAO1)的氨基酸同源率为98.9%,存在4个不一致的氨基酸位点;经原核表达、Ni-NTA亲和层析法纯化获得了蛋白PaAlr,酶学特性分析表明,重组蛋白PaAlr的最适反应温度为40℃,最适反应pH=10.0;最适底物是L-Ala,具有严格的底物特异性,K_(m,L-Ala)=10.96mmol/L,V_(max,L-Ala)=1 562μmol/(L·min),K_(m,D-Ala)=8.45mmol/L,V_(max,D-Ala)=881.9μmol/(L·min),其最大反应速率约为Alr_(PAO1)的7倍;以铜绿假单胞菌中丙氨酸消旋酶为检测对象,以PCR和Western-blotting 2种方法对铜绿假单胞菌进行检测,实验发现,在目的基因序列已知的前提下,采用PCR法具有较好的检测灵敏性和专一性.