基于Hedgehog通路探讨理肺消积丸对NSCLC A549细胞周期、增殖和迁移的影响

目的探讨理肺消积丸对A549细胞的影响作用及对Hedgehog通路的调控作用。方法采用MTT实验筛选理肺消积丸含药血清对A549细胞最佳干预浓度后,将细胞分为6组:对照组、理肺消积含药血清组、Hedgehog通路抑制剂组(Vismodegib组)、顺铂组、理肺消积含药血清+Vismodegib组、理肺消积含药血清+顺铂组。不同干预后,分别采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用克隆形成实验观察细胞克隆形成能力,采用Transwell实验观察A549细胞迁移能力,采用流式细胞术观察细胞周期比例的变化,采用qRT-PCR和Western blot技术检测Hedgehog通路中Gli1、Ptch1、Smo和CyclinD1 mRNA和蛋白表达的变化。结果浓度为10%的理肺消积丸含药血清能显著抑制A549细胞增殖(P<0.05),降低细胞克隆形成和迁移能力(P<0.05),阻滞细胞周期从G1期到S期转变,同时抑制Gli1、Ptch1、Smo和CyclinD1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),且与Vismodegib有良好的协同作用。结论理肺消积丸可显著抑制A549增殖和迁移能力,作用机制可能与其调控Hedgehog通路阻滞细胞周期有关。

和枢消积丸对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及肿瘤组织VEGF、PDGF蛋白的影响

目的:探讨和枢消积丸对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用和肿瘤血管生成相关因子表达的影响,探索中西医联合有效抗肝细胞癌治疗方案。方法:将H22荷瘤小鼠随机分成空白组、模型组、中药低剂量组(1.37 g/kg和枢消积丸)、中药中剂量组(2.73 g/kg和枢消积丸)、中药高剂量组(5.46 g/kg和枢消积丸)、索拉非尼组(0.03 g/kg)和联合组(5.46 g/kg和枢消积丸联合0.03 g/kg索拉非尼),干预14 d。观察各组小鼠生命活动,测量瘤体长短径和体重,灌胃结束后计算肿瘤体积和抑瘤率;检测小鼠肝功能指标AST、ALT;采用HE染色观察肿瘤组织结构和细胞形态;免疫组化及Western Blotting实验检测各组小鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)蛋白表达水平。结果:和枢消积丸对小鼠体重无明显影响,但可改善H22荷瘤小鼠的精神、活动状态,以及索拉非尼所致腹泻症状;与模型组比,各治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤的体积和质量均降低,联合组抑瘤率达74.8%,效果最明显(P<0.05);和枢消积丸可下调小鼠血清AST、ALT水平,改善肝脏功能(P<0.01);HE染色显示各治疗组小鼠肿瘤组织内部结构紊乱,与和枢消积丸的剂量呈正相关,联合组效果最明显;免疫组化和Western Blotting实验发现,各治疗组小鼠肿瘤组织VEGF、PDGF蛋白表达水平均下降(P<0.01),和枢消积丸联合索拉非尼对VEGF、PDGF的抑制作用比单独使用索拉非尼或和枢消积丸更显著。结论:和枢消积丸可下调肿瘤生成相关因子VEGF和PDGF蛋白表达,对H22荷瘤小鼠具有抑瘤作用,联合索拉非尼的中西医结合治疗最显著。

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨和枢消积丸对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤生成的影响及作用机制

目的:通过体内实验研究和枢消积丸(Heshu Xiaoji prescription,HXP)对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤生成的影响以及对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的影响,探究其抑制肿瘤生长的作用机制。方法:制备H22肝癌荷瘤小鼠模型,随机分为空白对照组、模型组,和枢消积丸低、中、高剂量组(1.37、2.73、5.46g/kg),索拉非尼组(0.03g/kg),联合组(5.46g/kg和枢消积丸和0.03g/kg索拉非尼),每组5只,接种第6天开始给药,连续14d,记录小鼠体质量并观察一般情况;末次给药后次日处死小鼠,剥取肿瘤称质量,计算抑瘤率。苏木素-伊红(HE)染色检测观察肿瘤组织形态变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤组织匀浆液IL-1β,TNF-α含量,免疫组化法以及Western-bloting法测定PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关蛋白表达。结果:和枢消积丸能明显改善H22肝癌荷瘤小鼠的精神、活动状态,和枢消积丸低、中、高剂量组,索拉菲尼组,联合组的抑瘤率分别为23.9%、38.6%、64.5%、53.1%、76.6%(P<0.05);与模型组相比,各治疗组能明显降低肿瘤细胞密度,引起肿瘤细胞坏死;与模型组比较,各给药组肿瘤组织中IL-1β含量不同程度升高(P<0.05),与模型组比较,和枢消积丸高剂量组、索拉菲尼组以及联合组肿瘤组织中TNF-α含量不同程度升高(P<0.05);免疫组化结果显示,与模型组比较,联合组、和枢消积丸高剂量组PI3K,AKT,mTOR蛋白表达均明显下降;Western-bloting结果提示,与模型对照组相比较,各治疗组的P-PI3K、P-AKT、P-mTOR蛋白表达明显减少,和枢消积丸中、高剂量组、索拉菲尼组、联合组肿瘤组织的PPI3K/PI3K、P-AKT/AKT、P-mTOR/mTOR蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论:和枢消积丸对H22肝癌荷瘤小鼠的肿瘤生成具有较为显著的抑制作用,其作用机制可能与下调PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键蛋白表达有关。

和枢消积丸对二甲基亚硝胺诱导的小鼠肝损伤的保护作用研究

目的:评价和枢消积丸对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的小鼠肝损伤的保护作用。方法:连续腹腔注射DMN 10mg/kg 3次诱导小鼠肝损伤的同时灌胃给予不同剂量的和枢消积丸,检测其体重、肝指数、肝功能及肝脏组织病理学等指标。结果:小鼠在注射DMN 3次后,其TP及ALB水平显著降低,ALT、AST、TBIL、DBIL以及TBA水平显著升高,与对照组比较差异具有统计学意义。予以和枢消积丸灌胃后,和枢消积丸各剂量组均可显著性改善DMN小鼠肝细胞坏死,降低其病理评分,且可显著性降低DMN小鼠血清ALT水平,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。且中剂量组可降低DMN小鼠血清AST水平(P<0.01),高剂量组可降低DMN小鼠血清AST、TBIL、DBIL以及TBA水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:和枢消积丸对DMN诱导小鼠肝损伤具有较好的保护作用。

舒肝消积丸对实验性肝损伤的保护作用

舒肝消积丸5～10mg/kg,用药5～6天,对异硫氰酸苯酯和四氯化碳诱发急性肝损伤所引起SGPT升高有非常明显的降低效应,并能明显对抗异硫氰酸笨酯引起的SB上升,病理组织学检查可见本品能减轻肝细胞变性、坏死。此外,舒肝消积丸还能增加家兔胆汁流量,保护小鼠因四氯化碳中毒引起的戊巴比妥钠睡眠时间的延长。

舒肝消积丸对血液流变学的影响

舒肝消积丸10g/kg,有明显地降低全血粘度和血浆粘度比值,缩短红细胞电泳时间及抑制实验性血栓形成等作用。证明该药有增强血液在肝血管中的流动度,改善肝微循环有利于肝细胞的营养和氧的供给,对肝病的恢复具有重要意义。

舒肝消积丸治疗慢性乙型肝炎的临床研究

舒肝消积丸具有舒肝补脾，理气化瘀，清热利湿，扶正益气之功。本品治疗乙型肝炎３０３例，结果临床治愈率为３０．０３％，显效３６．６３％，好转２６．０７％，无效７．２６％。总有效率达９２．７４％。对ＨＢｓＡｇ阴转率为１５．５４％；ＨＢｅＡｇ阴转率为４５．４２％，抗ＨＢｅ转阳率为４２．３７％。按中医分型，对肝郁脾虚型和气滞血瘀型疗效较好，而肝肾阴虚和脾肾阳虚型次之。

舒肝消积丸对慢性乙型肝炎病毒血清标志物某些指标的影响

本文观察舒肝消积丸对ＨＢＶ－Ｍ３０３例转换的疗效，并与逍遥丸治疗的１００例作对照。结果表明：舒肝消积丸治疗组ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ抗ＨＢｅ转化率均高于对照组，两组结果经统计学处理，差异有显著性意义（Ｐ＜０．００１），而抗ＨＢｓ、抗ＨＢｃ两组间无统计学意义。

舒肝消积丸治疗肝病120例临床疗效观察

1992年3月以来,我们应用“舒肝消积丸”治疗乙肝（慢迁肝、慢活肝）、急性肝炎、淤胆性肝炎、HB_sAg健康携带者、肝硬化及肝功能不正常等多种肝病,取得了显著疗效,现将结果报告如下:

舒肝消积丸治疗353例慢性乙型肝炎的临床研究

舒肝消积丸治疗３５３例慢性乙型肝炎的临床研究何建成甘肃中医学院（７３００００）耿铁海兰州中药厂（７３００３０）王自立甘肃省中医院（７３００５０）慢性乙型肝炎是临床常见、多发病、迄今为止，尚无理想治疗药物。我们于１９９２年１月２０日至１９９４年１...

舒肝消积丸对肝损伤保护作用的药理研究

舒肝消积丸对用CCl_4诱发小鼠及用APTI诱发大鼠实验性肝损伤有明显的抑制作用。光镜下显示:病变仅为轻度的肝细胞变性,未见坏死病灶。证明该药不仅能减轻肝细胞变性坏死的程度,而且具有促进修复的作用。本实验在除外其他因素致病的基础上,证实舒肝消积丸对肝脏有直接保护和抗损伤作用,为进一步探讨其临床药效提供实验依据。

佛慈舒肝消积丸治疗慢性乙型肝炎303例

慢性乙型肝炎是一种严重危害人类健康的常见病，其防治已经成为全球性公共卫生问题，引起世界各国的关注。慢性乙型肝炎发病机理较复杂，诸多矛盾汇集一身。既有HBV的持续存在，又有机体免疫功能失调；既有肝细胞的炎症，坏死，又有肝纤维组织增生；既有热毒内蕴，又有瘀血阻络、气阴亏虚；既有肝脏本身病变，还有肝外系统改变。而且每个慢性乙型肝炎患者除有共性特点外，

清金消积丸对肺癌A549细胞增殖和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的影响

研究清金消积丸诱导恶性肺腺癌肿瘤A549细胞凋亡及对凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响。采用不同浓度的清金消积丸含药血清,作用于肺癌细胞A549,采用MTT法检测清金消积丸对A549细胞增殖的抑制率;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测含药血清对A549细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。清金消积丸对A549细胞的增殖抑制率呈现良好的时间和浓度依赖关系,低剂量、中剂量、高剂量干预24 h,抑制率分别为60.5%、65.4和71.2%,与空白组比较差异极显著(P<0.01),干预48 h,抑制率分别68.2%、73.1%和76.8%;干预72 h,抑制率分别为70.2%、79.3%和84.4%,相同剂量不同时间段之间抑制率比较差异极显著(P<0.01)。Western Blot法结果表明清金消积丸干预后,A549细胞中Bax的表达量增多,Bcl-2的表达量减少,高剂量组、中剂量组与空白组比较均差异极显著(P<0.01),促进Bax和抑制Bcl-2效果呈现剂量正相关性。清金消积丸通过上调促凋亡蛋白Bax的表达和下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,发挥诱导人肺癌A549细胞凋亡的作用,说明清金消积丸具有抗肺癌的药理活性。

小儿消积丸定性定量检测方法研究

目的:研究小儿消积丸定性定量检测方法。方法:采用 TLC 法对处方中的大黄、香附、牵牛子、槟榔4种药材进行定性鉴别;采用 HPLC 法对处方中大黄的大黄素和大黄酚进行了含量测定。保护柱:Symmetry-C_(18)(4.6mm×20mm,5μm);分析柱:Kromasil-C_(18)(4.6mm×150mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15);流速:1mL·min^(-1);检测波长:254nm;柱温:室温。结果:大黄素在2.06～65.92μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,r=0.9995,平均回收率为98.6%,RSD 为1.7%;大黄酚在2.14～68.48μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,r=0.9993,平均回收率为98.1%,RSD 为1.4%。结论:本法准确、可靠地进行定性、定量检测,能有效控制小儿消积丸的质量。

理肺消积丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的:观察理肺消积丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的影响作用。方法:将50只小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、理肺消积丸组[240μg/(g·d)]、顺铂组[0.5μg/(g·d)]、联合组[理肺消积丸240μg/(g·d)+顺铂0.5μg/(g·d)]。采用皮下接种法建立Lewis肺癌小鼠模型,制备模型次日进行药物干预。2周后分别采用活体成像技术检测小鼠体内肿瘤生长情况,HE染色评价肿瘤组织病理学形态,免疫组化技术观察肿瘤细胞增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(gene of phosphate and tension homology deleted on chromosome ten,PTEN)的表达情况,TUNEL技术评价肿瘤细胞凋亡情况。结果:模型对照组小鼠体内肿瘤增殖明显,肿瘤细胞异型性明显、核分裂象多见,PCNA蛋白表达程度极高,而细胞凋亡率及PTEN蛋白表达量极低。与模型对照组对比,理肺消积丸组的肿瘤生长受到抵制,肿瘤细胞异型性及核分裂象减少,PCNA蛋白表达下降,肿瘤细胞凋亡率升高,PTEN蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。而顺铂组和联合组除PTEN蛋白表达较模型对照组差异无统计学意义外,其余指标均有统计学意义。结论:理肺消积丸可显著抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,其机制可能与其抑制肺癌细胞增殖、上调细胞凋亡和PTEN蛋白表达有关。

HPLC-ELSD法测定消积丸中熊果酸的含量

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定消积丸中熊果酸的含量。方法采用Inersil ODS-3（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱；柱温：40℃；乙腈：水（90：10）为流动相；流速：1．0mL·min^-1；蒸发光散射器检测；漂移管温度：85℃；气体（高纯氮气）流速：2．0L·min^-1。结果熊果酸在1．052～7．89mg范围内呈良好的线性关系，r为0．9996，平均回收率为96．28％，RSD为1．20％。结论本方法快速简便，结果准确、可靠，重现性好。

消积丸治疗子宫肌瘤32例

采用自拟消积丸(仙灵脾、补骨脂、桃仁、红花、熟地、当归、川芎、白芍、穿山甲)治疗子宫肌瘤32例。并设对照组30例进行观察。治疗组总有效率为81.3％,对照组总有效率为26.7％。两组经统计学处理,治疗组与对照组对比,有非常显著性差异(P<0.01)。提示治疗组明显高于对照组。

HPLC法测定消积丸中大黄素和大黄酚的含量

目的建立消积丸中大黄素与大黄酚的含量测定方法。方法采用Thermo Syncronis C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,以甲醇-0.1%磷酸（85∶15）为流动相,流速：1.0m L·min-1,柱温：30℃,检测波长：254nm。结果大黄素和大黄酚进样量分别在0.0056~0.2236μg（r=0.9999）和0.0155~0.6207μg（r=0.9999）范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均≤1.51%;平均加样回收率分别为99.49%、99.68%,RSD分别为0.89%、0.38%（n=6）。结论该方法简便、快捷、准确,重现性好,可作为消积丸的质量控制方法。