人巨细胞病毒感染对人涎腺导管上皮细胞存活的影响

目的:研究体内外人巨细胞病毒(HCMV)感染对人涎腺导管上皮细胞存活的影响。方法:用细胞凋亡检测技术研究11例腮腺巨细胞包涵体病(PCID)尸检石蜡包埋组织中细胞凋亡情况;用免疫组化法检测PCID组织存活素、PCNA和P53的表达;用流式细胞术检测HCMV感染对体外培养的涎腺导管上皮细胞周期的影响。结果:所有包涵体巨细胞凋亡检测呈阴性。包涵体巨细胞存活素和P53表达呈阴性,其他导管上皮细胞呈弱阳性(±～+);75%的包涵体巨细胞核PCNA表达呈弱阳性(±)。与模仿感染组相比,病毒感染组G0/G1期细胞所占百分数在感染36、60和72 h显著增高(P均<0.01)。结论:HCMV感染后涎腺导管上皮细胞并未发生凋亡,而发生了增殖阻滞,大部分细胞处于G1期。

体外人巨细胞病毒感染对人涎腺导管上皮细胞角蛋白表达的影响

目的探讨体外人巨细胞病毒(HCMV)感染对人涎腺导管上皮细胞(HSG)角蛋白表达的影响。方法应用免疫细胞化学法检测体外培养的HSG中角蛋白8和18(K8和K18)的表达;蛋白印迹法检测HCMV感染对体外培养的HSG中K8和K18表达的影响;半定量逆转录聚合酶链式反应法检测HCMV对体外培养的HSG中K8和K18转录水平的影响。结果体外培养的HSG中K8和K18呈阳性表达;HCMV感染体外培养的HSG 0～96 h,K8的表达呈逐渐下降趋势,K18的表达在感染后24h内表达升高,此后下降;K8和K18的mRNA水平和蛋白水平均呈反向平行关系。结论 HCMV感染体外培养的HSG可引起角蛋白表型发生改变,K8和K18表达水平改变的调节发生在转录后水平。

涎腺导管上皮细胞体外感染HCMV模型的建立

目的 建立涎腺导管上皮细胞体外人巨细胞病毒 (HCMV)感染模型。方法 用免疫细胞化学方法初步鉴定涎腺导管上皮细胞 (HSG)角蛋白 8(cytokeratin 8,CK8)和角蛋白 18(CK18)抗原的表达 ;观察HCMV感染HSG后导致的病变 ;观察宿主细胞中病毒颗粒的超微结构 ;用RT PCR及nest RT PCR检测HCMVIE1(即刻早期 1) /IE2基因的转录 ;用免疫细胞化学法检测HCMV感染细胞中IE1/IE2蛋白的表达。结果 呈上皮样贴壁生长的HSGCK8和CK18阳性表达 ;HCMV感染后 12小时 ( 12h .p .i.)即可见细胞病变 ,6 0h .p .i.CPE已极为明显 ,72h .p .i.绝大部分细胞出现病变。感染的HSG细胞在细胞核、内质网、细胞质中出现数量不等的 3种不同形态的疱疹病毒样颗粒。宿主细胞中可检测到HCMVIE1/IE2的转录以及IE1/IE2蛋白的表达。

白细胞介素33通过促进上皮细胞黏附分子表达参与干燥综合征发病

目的:探讨白细胞介素(Interleukin-33,IL-33)可能通过调控上皮细胞黏附分子(Epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)表达参与干燥综合征(Sjogren's syndrome,SS)发病的作用机制.方法:收集因SS诊断需要行唇腺活检术的患者血清和唇腺组织标本及相关临床资料,根据2016年ACR-EULAR SS分类诊断标准将患者分为SS组和非SS组,选取性别、年龄匹配的21例SS患者和21例非SS患者,利用多重检测流式试剂盒(人炎症因子组合1)检测血清中IL-33水平并用t检验比较SS患者组与非SS患者组、抗SSA抗体阳性与阴性组以及唇腺病理阳性与阴性组之间IL-33水平的差异.对唇腺组织石蜡切片进行IL-33免疫组织化学染色,用流式细胞术检测新鲜唇腺组织中上皮细胞EpCAM表达水平并与血清IL-33水平进行相关性分析.结果:SS患者组IL-33水平为(1736±590.1,n=21,pg/mL),显著高于非SS患者组(306.8± 120.3,n=21,pg/mL)(t=2.373,P=0.027);唇腺病理阳性组即灶性血清IL-33水平(489.8±170,n=27,pg/mL)高于病理阴性组(1978± 793.1,n=15,pg/mL),2组之间有统计学差异(t=2.368,P=0.023);而抗SSA抗体阳性组与阴性组之间无明显差异(P>0.05).免疫组化染色结果提示SS患者唇腺组织上皮细胞IL-33表达相较于非SS患者上升,且血清IL-33水平与唇腺上皮细胞EpCAM的表达呈中等强度正相关(r=0.4915,P=0.0009,95%CI 0.2205-0.692).结论:IL-33是与SS密切相关的炎症因子,IL-33可能通过促进唾液腺上皮细胞EpCAM的表达参与SS发病.

大鼠涎腺放射损伤模型的建立及NBS1的表达变化

目的:研究大鼠涎腺放射损伤模型中NBS1基因的表达,初步探讨其在放射性涎腺上皮细胞损伤修复中的调控作用。方法:放射组40只大鼠以60Coγ射线分次照射,每次3GY,隔天1次,共5次,累积剂量分别为3、6、9、12、15 GY,对照组40只大鼠同期进行麻醉。照射后2～4 h,收集大鼠腮腺,颌下腺。应用苏木素-伊红染色(HE)和透射电镜观察涎腺组织的显微和超微结构变化;应用逆转录聚合酶链技术(RT-PCR)检测腮腺、颌下腺NBS1mRNA的表达情况。结果:腮腺较颌下腺组织损伤严重;放射组和正常组比较,腮腺放射剂量9 GY组起,颌下腺于12 GY组起,NBS1mRNA表达水平减少(P<0.05)。结论:大鼠涎腺放射损伤模型建立成功,NBS1可能参与涎腺放射损伤修复。

自噬在干燥综合征发病机制中的作用初探

SS是以累及外分泌腺为特点的系统性自身免疫病。自噬是维持细胞周转、细胞稳态和决定细胞命运的重要机制,在自身免疫病中扮演着重要角色,但关于自噬在SS的研究报道较少。本研究从自噬的功能和特点出发,探讨自噬在SS发病机制的作用,并提出猜想与思考,以期为后续的研究提供借鉴和思路。