碱性成纤维细胞生长因子对人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖及MEK/ERK、MKP-1通路的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖及MEK1/2、ERK1/2及MKP-1表达的影响。方法:培养人涎腺腺样囊性癌细胞株(ACC-2),MTT比色法测定不同浓度bFGF对细胞增殖的影响;免疫沉淀法纯化蛋白并ERK试剂盒测定ERK活性;免疫印迹法测定p-MEK1/2、p-ERK1/2及MKP-1表达。结果:MTT实验显示bFGF明显增强ACC-2细胞增殖,免疫沉淀法显示bFGF上调ERK活性,免疫印迹法显示bFGF明显增强p-MEK1/2、p-ERK1/2表达及抑制MKP-1表达。结论:bFGF可促进人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖,其途径与上调ERK活性、激活MEK/ERK通路、抑制MKP-1表达有关。

miR-26a靶向EZH2抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的增殖活性

目的探讨miR-26a对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖能力的影响及其与EZH2的靶向关系。方法构建pcDNATM6.2-pre-miR-26a、pmirGLO-EZH2野生型(pmirGLO-EZH2-WT)和突变型(pmirGLO-EZH2-MT)重组质粒,并采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测pre-miR-26a在ACC-M细胞中的转染效率,并与未处理组(control组)进行比较。同时采用MTT法分析miR-26a过表达对ACC-M细胞增殖活性的影响,并采用双荧光素酶报告基因系统、qRT-PCR和Western blot检测miR-26a与EZH2的靶向关系。结果将测序结果采用NCBI BLAST进行序列比对,结果显示pre-miR-26a、EZH2-WT和EZH2-MT重组质粒均构建成功,无碱基缺失或突变。qRT-PCR显示转染pre-miR-26a的ACC-M细胞其miR-26a的表达显著高于未处理组(P<0.001)。MTT分析显示miR-26过表达可以明显抑制ACC-M细胞的增殖活性(P<0.05)。此外,双荧光素酶报告基因系统(P=0.001)、qRT-PCR和Western blot均证实miR-26a能够显著下调EZH2的mRNA(P=0.001)和蛋白的表达(P=0.006)。结论 miR-26a能够显著抑制涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的增殖活性,并且与EZH2之间存在良好的靶向关系。

沉默RohA基因对涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-2增殖和侵袭的影响

目的:探讨沉默RohA基因对涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞株ACC-2增殖和侵袭的影响。方法:培养ACC-2细胞,分为siRNA-RhoA组、siRNA-对照序列组和空白对照组,实时荧光定量PCR技术检测细胞中Rho基因表达,Western blot法检测细胞中RohA蛋白表达,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。结果:与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-RhoA组细胞中RohA mRNA和蛋白相对表达量均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,siRNA-RhoA组细胞在24、48、72、96h时吸光度A值均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,si RNA-RhoA组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与siRNA-对照序列组和空白对照组比较,si RNARhoA组迁移细胞数和侵袭细胞数均减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性沉默RohA基因表达可明显减弱ACC-2增殖能力,促进细胞凋亡,抑制细胞转移和侵袭能力。

TROP2蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达及与患者预后的关系

目的 探讨滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell-surface antigens 2,TROP2)在涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)中的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系,明确TROP2的表达与SACC患者预后的相关性。方法 本研究获得单位伦理委员会的批准,采用免疫组织化学方法检测TROP2在85例SACC组织及各自癌旁组织中的表达情况,分析其表达情况与临床病理特征的关系;利用Kaplan-Meier法对40例SACC患者进行TROP2蛋白表达与患者术后五年无病生存期(disease-free survival,DFS)的关系分析;同时,采用Logistic回归模型分析影响SACC患者预后的因素。结果 TROP2在SACC组织中的低表达或不表达率显著高于癌旁组织(P<0.001);TROP2低表达或不表达与SACC患者肿瘤的生长以及临床分期呈显著正相关性(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示:TROP2蛋白低表达或不表达的SACC患者的DFS显著低于高表达患者(P<0.05),预后不良。Logistic回归模型预后分析显示:TROP2蛋白低表达或不表达(OR=5.37;95%CI:1.03~28.08;P=0.046)与Ⅲ-Ⅳ临床分期(OR=6.89;95%CI:1.37~34.77;P=0.019)均为影响SACC患者预后的危险因素。结论 TROP2蛋白在SACC组织中低表达或不表达,患者预后不良,与肿瘤的生长、临床分期呈正相关,且TROP2低表达或不表达可作为SACC患者预后不良的独立危险因素,TROP2为SACC患者预后不良的标志物。

涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞C-erbB2、PTEN基因表达的研究

目的检测涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞中C-erbB2基因和PTEN基因的表达,并探讨其相关性。方法培养SACC-83细胞,采用RT-PCR、免疫组化技术分别检测C-erbB2基因和PTEN基因的mRNA、蛋白产物在涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞和正常腺体细胞中的表达情况。结果 C-erbB2基因mRNA及蛋白水平在SACC-83细胞中的表达明显高于正常腺体细胞,差异有显著性;PTEN基因在SACC-83细胞及正常腺体细胞中的表达无明显差异。结论 C-erbB2基因在涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞中过表达,可能与涎腺腺样囊性癌的发生有关。

△ψm和Caspase3在As_2O_3诱导腺样囊性癌ACC-2细胞凋亡过程中的作用

目的:探讨线粒体膜电位(△ψm)、Caspase 3在As2O3诱导ACC-2细胞凋亡中的作用。方法:进行ACC-2细胞培养,将As2O3建立不同药物浓度梯度(0,1.0,2.0,4.0,8.0μmol/L)分别作用于ACC-2细胞,用Rh123染色,流式细胞仪检测8.0μmol/L As2O3作用前、后(24h),ACC-2细胞的线粒体膜电位(△ψm)变化;用多功能酶标仪进行Caspase 3活性检测。结果:空白对照组ACC-2细胞内Rh123荧光强度最强,8.0μmol/L As2O3处理组ACC-2细胞内Rh123荧光强度减弱,其差异有显著性(P<0.05);随着As2O3药物浓度的增高(0,1,2,4,8μmol/L),ACC-2细胞的Caspase 3酶活力单位逐渐增加。结论:As2O3作用于ACC-2细胞,可通过降低线粒体膜电位从而引起细胞凋亡。随着As2O3药物浓度的增高,ACC-2细胞的Caspase 3酶活力单位逐渐增加,Caspase 3被激活,细胞可发生不可逆转的凋亡过程。

滇重楼总皂苷对涎腺腺样囊性癌ACC-83细胞增殖抑制及其机制的研究

目的探讨滇重楼总皂苷对涎腺腺样囊性癌ACC-83细胞的增殖抑制作用及其相关机制,为滇重楼治疗涎腺腺样囊性癌提供理论依据。方法通过体外细胞培养,采用CCK-8法检测不同药物质量浓度(5、10、20、40、60、80、100μg·m L-1)的滇重楼总皂苷对ACC-83细胞的增殖抑制效应,采用流式细胞仪检测不同药物质量浓度(25、50、100μg·m L-1)的滇重楼总皂苷对ACC-83细胞的凋亡率,Western blot及逆转录聚合酶链反应法检测巨噬细胞游走抑制因子(MIF)和CD74的表达。结果滇重楼总皂苷可促进ACC-83细胞凋亡,并呈剂量-效应关系。ACC-83细胞中存在MIF和CD74的表达,滇重楼总皂苷可抑制MIF和CD74的表达。结论滇重楼总皂苷对ACC-83细胞的生长有明显抑制作用,可以抑制MIF及CD74的表达,诱导细胞凋亡,为其临床应用提供了依据。

莱菔硫烷对涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和凋亡的影响

目的:研究莱菔硫烷(SFN)对涎腺腺样囊性ACC-M癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别用终浓度为5、10、20、30、40、60、80、100μmol/L的SFN处理ACC-M细胞24、48、72 h。用MTT比色试验和台盼蓝拒染实验检测细胞的增殖和存活情况;倒置显微镜、Giemsa染色、透射电镜观察细胞形态学变化;Annexin-V-FITC和PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:SFN对ACC-M有明显的增殖抑制作用,最高抑制率达89.2%,作用24、48、72 h时的IC50(μmol/L)分别是75.6、21.3、16.5,增殖抑制率与药物浓度和作用时间具有明显的正相关性。SFN可诱导ACC-M细胞凋亡,凋亡率随处理时间延长和药物浓度增加而上升(P<0.01)。结论:SFN具有抑制涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和诱导其凋亡的作用,且具有浓度和时间依赖性。

YAP2蛋白在涎腺腺样囊性癌组织及细胞中的表达

目的:观察YAP2蛋白在涎腺腺样囊性癌组织及细胞中的表达。方法:通过免疫组织化学法检测YAP2蛋白在涎腺腺样囊性癌组织及细胞中的表达,用Western印迹法检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)对涎腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)SACC-83细胞YAP2蛋白的抑制。结果 :SACC组织中YAP2蛋白在肿瘤细胞胞质中阳性表达,正常腺体中YAP2蛋白主要表达在部分导管上皮中,两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。免疫细胞化学染色结果显示SACC-83中YAP2蛋白阳性表达,加入EGFR蛋白后,SACC-83中YAP2蛋白表达有所降低。Western印迹法结果显示,不同质量浓度的EGFR蛋白(5、10、20、40μg/L)对SACC-83细胞YAP2蛋白的表达都有一定抑制作用,其中40μg/L质量浓度组抑制作用最明显。结论:YAP2蛋白在涎腺腺样囊性癌组织及细胞中高表达,EGFR蛋白对YAP2蛋白在SACC-83中表达有抑制作用。

紫杉醇及β-榄香烯对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-LM细胞毒作用的研究

目的 :研究紫杉醇及 β -榄香烯联合应用对体外培养人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC -LM的细胞毒作用。方法 :应用药物敏感性MTT测定法、流式细胞术和透射电子显微镜观察等方法 ,探讨紫杉醇与 β -榄香烯 (浓度比 1∶1)联合应用诱导SACC -LM细胞凋亡及其与G1期阻滞关系。结果 :1)应用MTT比色法 ,紫杉醇与 β -榄香烯联合 (浓度比 1∶1)作用SACC -LM细胞 2 4h后 ,其抑制率呈现出明显协同效应。 2 )流式细胞仪分析 ,2 5 μg/mL紫杉醇与 2 5 μg/mLβ-榄香烯协同用药作用SACC -LM细胞 2 4h后诱导SACC -LM细胞发生凋亡 ,并将细胞周期阻滞在G1期。3)电镜观察 ,协同用药对SACC -LM细胞作用 2 4h后 ,具有典型的凋亡细胞特征。结论 :紫杉醇与 β-榄香烯 (浓度比 1∶1)对SACC -LM细胞的抑制有协同作用 ,并诱导其产生凋亡 ,G1期阻滞能诱导SACC-LM细胞凋亡。

紫杉醇及β-榄香烯对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞毒作用的研究

目的 研究紫杉醇及 β -榄香烯联合应用对体外培养人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC - 83的细胞毒作用。方法 应用药物敏感性MTT测定法、流式细胞术 (FCM )和透射电子显微镜观察等方法 ,初步探讨紫杉醇与β-榄香烯 (浓度比1∶1)联合应用诱导SACC - 83细胞凋亡及其与G1期阻滞关系。结果 ①应用MTT比色法 ,紫杉醇与 β-榄香烯联合 (浓度比1∶1)作用SACC - 83细胞 2 4小时后 ,其抑制率呈现出明显协同效应 ,并具有浓度依赖性。②流式细胞仪分析 ,2 5ug/ml紫杉醇与 2 5ug/mlβ -榄香烯协同作用SACC - 83细胞 2 4小时后诱导SACC -83细胞发生凋亡 ,并将细胞周期阻滞在G1期。③电镜观察 ,协同用药对SACC - 83细胞作用 2 4小时后 ,染色质沿皱缩的核膜下凝聚 ,具有典型的凋亡细胞特征。结论 紫杉醇与 β-榄香烯 (浓度比1∶1)对SACC - 83细胞的抑制有协同作用 ,并诱导其产生凋亡 ,G1期阻滞能诱导SACC - 83细胞凋亡。

CD147、MMP-2、MVD在涎腺腺样囊性癌中的表达及其影响因素分析

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、微血管密度(MVD)在涎腺腺样囊性癌(SACC)中的表达及其影响因素。方法:选取2022年1月—2023年12月在甘肃医学院附属医院实施手术治疗的SACC患者66例作为研究对象,留取SACC组织和癌旁组织,比较SACC组织、癌旁组织CD147、MMP-2阳性率及MVD表达水平;分析SACC组织CD147、MMP-2阳性及MVD高表达的影响因素。结果:与癌旁组织比较,SACC组织中CD147、MMP-2阳性表达率及MVD水平更高(P<0.05)。TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期,有神经侵犯,发生淋巴转移,组织学分型为腺管型是SACC组织CD147阳性、MMP-2阳性、MVD高表达的独立危险因素(P<0.05)。结论:SACC组织中CD147、MMP-2阳性率高,MVD呈高表达,与组织学分型、TNM分期、神经侵犯情况、淋巴转移情况有关。

嘌呤受体P2Y_2在涎腺腺样囊性癌的表达及ATP对其细胞生长的抑制

目的研究嘌呤受体P2Y2在涎腺腺样囊性癌非高转移细胞株(SACC-83)和高转移细胞株(SACC-LM)的表达,及其激动剂ATP对二者细胞生长的抑制作用。方法采用免疫细胞化学法检测P2Y2受体在SACC-83和SACC-LM细胞株中的表达;采用MTT法检测不同浓度ATP(0.1mM/L、0.2mM/L、0.4mM/L、0.8mM/L和1.6mM/L)在不同作用时间点(24h、48h和72h)对SACC-83和SACC-LM细胞生长的抑制作用。结果 SACC-83和SACC-LM细胞中P2Y2均呈阳性表达,在细胞膜的染色较胞浆深,其表达在两细胞株中无明显差异。ATP对SACC-83和SACC-LM细胞的生长均有明显的抑制作用(P<0.05),并且对SACC-LM细胞的抑制作用强于对SACC-83细胞的抑制作用,其抑制作用与药物浓度和作用时间呈正相关。结论不同转移能力的涎腺腺样囊性癌细胞SACC-83和SACC-LM的胞膜和胞浆中均有嘌呤受体P2Y2表达,ATP对二者细胞生长有显著抑制作用。

乙肝病毒X蛋白结合蛋白对腺样囊性癌细胞株ACC-2生物学行为的影响

目的探讨乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)对腺样囊性癌细胞株ACC-2生物学行为的影响及其机制。方法采用siRNA转染法抑制腺样囊性癌细胞株ACC-2中HBXIP的表达;实时PCR和Western blotting检测HBXIP基因及蛋白表达水平;MTT法检测HBXIP-siRNA对细胞增殖的影响;transwell法检测HBXIP-siRNA对细胞侵袭的影响;划痕实验检测HBXIP-siRNA对细胞迁移的影响;蛋白印迹方法检测HBXIP-siRNA对PI3K/Akt信号通路中Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K及对S100A4蛋白表达量的影响。结果HBXIP在ACC-2中高表达,HBXIP-siRNA成功转染细胞株。MTT结果显示,48、72、96 h时实验组中存活的细胞数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);划痕实验结果显示,实验组细胞迁移率明显低于对照组(P<0.01);transwell小室实验结果显示,实验组中细胞侵袭个数明显低于对照组(P<0.01);蛋白印迹结果显示,相对于对照组,实验组细胞中p-Akt、p-PI3K及S100A4的表达量随着HBXIP基因沉默而相对降低。结论 HBXIP可促进腺样囊性癌细胞株ACC-2增殖、迁移和侵袭,其机制可能与促进Akt、PI3K磷酸化及增加S100A4蛋白表达量有关。

三氧化二砷对腺样囊性癌ACC-2细胞的端粒酶逆转录酶mRNA表达的影响

目的:探讨As2O3对ACC-2细胞端粒酶hTERT mRNA表达的影响。方法:进行ACC-2细胞培养,将As2O3建立不同药物浓度梯度(0、1.0、2.0、4.0、8.0 μmol/L)分别作用于ACC-2细胞24 h,48 h,应用RT-PCR方法,检测As2O3作用前后,ACC-2细胞的hTERT mRNA表达水平。结果:RT-PCR结果显示,在未经药物作用、作为对照组的正常培养的ACC-2细胞中,hTERT mRNA呈现明显高表达;在As2O3作用于ACC-2细胞后24 h与48 h时,随As2O3药物浓度的增高(1.0 μmol/L、2.0 μmol/L、4.0 μmol/L、8.0 μmol/L),hTERT mRNA表达逐渐降低(P As2O3可下调ACC-2细胞的hTERT mRNA转录表达,来诱导ACC-2细胞凋亡。

雪旺细胞标志物S100蛋白在涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭中的意义

目的 :对比研究雪旺细胞标志物S10 0蛋白在腺样囊性癌及粘液表皮样癌中的表达 ,探讨其与腺样囊性癌嗜神经侵袭间的关系。方法 :选取 2 0例腺样囊性癌和 18例粘液表皮样癌标本 ,分别进行S10 0免疫组化染色。结果 :腺样囊性癌嗜神经侵袭的能力明显高于粘液表皮样癌 ,两者有显著性差异。S10 0在绝大多数腺样囊性癌中均有表达 ,而在粘液表皮样癌中则没有表达 ,两者有显著性差异。结论

53例涎腺腺样囊性癌MMP-2和MMP-9表达与神经浸润和淋巴结转移的关系

目的 研究涎腺腺样囊性癌MMP 2和MMP 9表达情况 ,评估其与涎腺腺样囊性癌神经浸润和淋巴结转移的关系。方法 选取 5 3例涎腺腺样囊性癌 ,以抗MMP 2和MMP 9单克隆抗体用Envision法进行免疫组织化学染色和半定量分析。结果 MMP 2和MMP 9在涎腺腺样囊性癌中的表达率分别为 6 7.92 %和79.2 5 % ;有神经浸润的腺样囊性癌其MMP 2和MMP 9的表达水平远高于无浸润者 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 ) ;随着MMP 2和MMP 9的表达水平增高 ,淋巴结转移率也增高 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 )。结论 提示MMP 2和MMP

BimS过表达联合顺铂对体外培养人腺样囊性癌细胞系ACC-2增殖和凋亡的影响

目的探讨BimS过表达联合顺铂对涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞株ACC-2增殖和凋亡的影响及分子机制。方法(1)体外培养ACC-2细胞,分别用浓度为0,2.5,5,10,20μg/ml的顺铂对呈现对数生长期的ACC-2细胞进行处理,处理后12,24,48 h采用MTT测定细胞增殖能力。(2)体外培养ACC-2细胞和BimS过表达的ACC-2细胞,分为对照组(control组)、顺铂(DDP)组、BimS过表达组、顺铂+BimS过表达组(BimS+DDP),对照组为未做任何处理的ACC-2细胞。四组细胞处理后均继续培养48 h,采用Western blot检测各组细胞Bax、caspase-3和Bcl-2蛋白相对表达水平;四组细胞接种至96孔板后,分别于12,24,48 h采用MTT检测各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果与0μg/ml相比,2.5,5,10,20μg/ml顺铂处理12,24,48 h细胞增殖抑制率均显著升高,呈剂量依赖性(P<0.01)。与DDP组和BimS组相比,DDP+BimS组12,24,48 h细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01),细胞中Bcl-2蛋白表达显著减低,Bax、caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.05),12,24,48 h细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。结论BimS过表达联合顺铂可明显抑制ACC-2增殖,促进其凋亡,可能与二者联合作用能够下调Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白,从而增强Bcl-2家族蛋白的促凋亡作用,活化下游caspase-3蛋白、激活线粒体凋亡途径有关。

涎腺腺样囊性癌细胞转移潜能与细胞外基质的关系

目的 了解不同转移能力的涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma ,SACC)细胞与细胞外基质粘附、对细胞外基质侵袭及趋化运动的能力。方法 MTT法测定SACC -LM ,SACC - 83,ACC -M ,ACC - 2与纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附 ,用改良Boydenchamber方法观察了SACC细胞对人工重组基底膜的侵袭以及趋化运动。结果 高转移的SACC -LM与细胞外基质的粘附低于SACC - 83,而ACC -M与细胞外基质的粘附高于ACC - 2。SACC与纤维粘连蛋白的粘附高于和层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附。SACC -LM ,ACC -M的侵袭和运动能力强于SACC - 83,ACC - 2。结论 不同转移能力的SACC细胞与细胞外基质的粘附能力不同。高转移潜能的涎腺腺样囊性癌细胞的侵袭能力。

人类小涎腺腺样囊性癌NACC细胞系的建立及腺样囊性癌生物学特性的研究

目的:建立一个人类腭部涎腺腺样囊性癌细胞系并对其生物学特性作进一步探讨。方法:取人腭部小涎腺腺样囊性癌组织经原代培养并传代成系,命名为NACC细胞系。采用免疫组化法对NACC细胞系及另一涎腺腺样囊性癌细胞系SACC-83行多种细胞中间丝染色。结果:NACC细胞为亚三倍体核型、单层贴壁生长的上皮癌细胞系,异种接种可致瘤。NACC及SACC-83细胞均有抗keratin,GFAP,EMA,smoothmuscleactin,vimentin,S-100蛋白不同程度阳性。结论:NACC细胞系生长稳定,为源自干细胞的不同分化程度和发育周期的癌细胞所组成的细胞群体,可能含有肿瘤性闰管细胞、肌上皮细胞及未分化的多潜能干细胞等细胞成分,保持了腺样囊性癌的大部分特性。行体内、外试验时能较好地反映该类肿瘤的生物学特性。