液态芯片技术筛选胸腔积液细胞因子对结核性胸膜炎的诊断价值

目的应用液态芯片技术筛选结核性胸膜炎(plTB)胸腔积液结核特异性细胞因子建立诊断模型,并探讨其应用价值。方法纳入plTB患者(plTB组)86例,其中确诊plTB组41例,临床诊断plTB组45例;其他胸腔积液患者(对照组)42例。采用液相芯片技术分析胸腔积液17个细胞因子,包括白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-9、IL-10、γ-干扰素诱导蛋白10(IP-10)、IL-15、IL-17F、IL-27、肿瘤坏死因子(TNF)-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎症蛋白-3a(MIP-3α)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、β-干扰素(IFN-β)的表达量。筛选确诊plTB组和对照组组间差异因子,并在确诊plTB患者中绘制受试者工作特征(ROC)曲线,将AUC>0.850、特异度>80%的IP-10、IL-27和MCP-1联合诊断plTB,并同胸腔积液腺苷酸脱氨酶(ADA)检测和结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)比较,评估诊断效能。结果确诊plTB组IL-2、IP-10、IL-27、TNF-α和MCP-1水平均高于对照组(P<0.05);IP-10、IL-27和MCP-1三因子联合确诊plTB的敏感度为87.8%,特异度为81.0%;三因子联合诊断在45例临床诊断plTB组中的敏感度仍高达86.7%,与确诊plTB组的敏感度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。plTB组中,TIP-10、IL-27和MCP-1三因子联合检测的敏感度为87.2%,高于T-SPOT.TB单独检测(81.4%)和ADA单独检测(54.7%)。结论应用液态芯片技术对胸腔积液IP-10、IL-27和MCP-1联合检测,可为plTB诊断提供帮助。

多重荧光定量PCR和液态芯片技术对下呼吸道病毒检测的应用比较

目的比较荷兰Patho Finder公司多重荧光定量PCR技术(Respi Finder 2SMART试剂盒,简称Respi Finder检测)和加拿大Luminex公司液态芯片技术(呼吸道病毒检测试剂盒,简称x TAG RVP)对下呼吸道标本病毒检测的结果。方法收集2015年1至12月于北京协和医院疑似病毒性肺炎住院患者100例下呼吸道标本,分别利用Respi Finder和x TAG RVP检测试剂进行常见呼吸道病毒核酸检测,并全部进行PCR及测序分析,比较两种方法的敏感性和特异性。结果 100份下呼吸道标本经Respi Finder和x TAG RVP方法检测,阳性率分别为60.0%和51.0%,混合感染率均为8.0%。两种方法结果一致率为80.0%。以PCR及测序结果为准,经Respi Finder和x TAG RVP方法检测的敏感性分别为97.9%和94.3%,特异性分别为74.5%和97.9%,阳性预测值分别为78.3%和98.0%,阴性预测值分别为95.0%和93.9%,两法检测特异性及阳性预测值差异有统计学意义(P<0.05)。结论与Respi Finder方法相比,x TAG RVP对常见呼吸道病毒检测的特异性较好,敏感性相当,对呼吸道病毒的检测性能优于Respi Finder检测。

液态芯片技术分析RA患者血清免疫复合物对滑膜细胞分泌细胞因子的影响

目的用液态芯片技术研究类风湿关节炎(RA)患者血清免疫复合物(IC)对关节成纤维样滑膜细胞(FLS)分泌细胞因子的影响。方法用聚乙二醇(PEG)沉淀法分别提取10份抗环瓜氨酸肽抗体(ACCP)阳性的RA患者及健康人对照血清IC,间接ELISA法测定IC中ACCP特异性IC水平。体外培养RA患者关节FLS,分别用RA患者ACCP-IC阳性IC(ACCP+-IC)、ACCP-IC阴性IC(ACCP--IC)及健康人对照血清IC(C-IC)刺激FLS,培养24 h后,用液态芯片技术检测不同来源IC刺激对FLS分泌IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、GM-CSF、EGF、VEGF等11种细胞因子水平的影响。结果 10份RA患者血清中提取的IC,包括ACCP+-IC 6份和ACCP--IC 4份,刺激FLS 24 h后,可诱导细胞分泌大量IL-6、IL-8和GM-CSF;其中ACCP+-IC组刺激FLS分泌GM-CSF和IL-8水平均显著高于ACCP--IC组。3组刺激物组刺激分泌IL-1β、IL-2、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、EGF、VEGF等其他8种细胞因子含量均无显著性差异。结论 ACCP+-IC具备更强的促FLS分泌GM-CSF、IL-6和IL-8的活性。

Luminex液态芯片技术在克罗恩病诊断与病情监测中的应用

目的探讨Luminex液态芯片技术检测血清中细胞因子的表达在克罗恩病患者中的临床意义。方法选取不同严重程度克罗恩病(CD)患者76例作为研究对象,选取同期健康人群50例作为对照组。按照MILLIPLEX MAP Kit试剂盒的要求,利用Luminex技术检测血清中细胞因子白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)以及白细胞介素17A(IL-17A)的表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中抗酿酒酵母抗体(ASCA),分析CD组与健康对照组之间的差异。结果细胞因子表达水平除IL-17A外,CD组IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);活动期CD患者血清IFN-γ、TNF-α、IL-6水平明显高于缓解期和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中、重度活动期CD患者血清TNF-α、IL-6水平高于轻度活动期CD患者,差异有统计学意义(P<0.05);血清ASCA水平在CD组与健康对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),ASCA阳性患者TNF-α、IL-6水平显著高于ASCA阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TNF-α、IL-6在CD患者的炎症发生和病情发展中起着重要作用,测定血清TNF-α、IL-6的水平可反映克罗恩病的病情程度。细胞因子水平动态变化与CD病情进展相关,对CD疾病检测和病情监测具有重要意义。

液态芯片技术在β地中海贫血基因检测中的应用研究

目的探讨液态芯片技术在检测β地中海贫血基因突变常见类型的应用价值。方法采用液态芯片技术,使用Luminex100多功能悬浮点阵检测仪及Lumi2 nex Data Collector Version1.7数据收集软件检测并通过突变标本与正常标本的荧光强度比值(Mutan/Normal)分析100份正常人标本及68份PCR反向杂交技术确认的β地中海贫血基因突变标本。结果100份正常标本检测结果正常。68份β地贫基因突变检测结果为密码子CD41/42(TCTT)突变37例(54.41%),IVS2-654(C→T)突变杂合12例(17.65%),-28(A→G)突变10例(14.71%),-17(A→T)突变5例(7.35%),CD71/72(+A)2例(2.94%),-29(A→G)突变杂合1例(1.47%)。密码子71/72(+A)复合IVS2-654(C→T)突变杂合1例,-28(A→G)复合密码子CD41/42-TCTT突变2例,单位点突变β地贫病人为95.59%(65/68),多位点突变为4.41%(3/68)。7种突变杂合类型与常用方法PCR-RDB检测结果为100%符合率。结论液态芯片技术能准确区分β地贫基因突变杂合复合突变,可提供快速、敏感的临床β地贫基因突变检测技术平台。

多重PCR检测方法和液态芯片技术在呼吸道病毒检测中的应用研究

目的 评估澳大利亚维多利亚感染性疾病参比实验室（The Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory,VIDRL）的呼吸道病毒多重PCR检测方法和Luminex公司多指标同步分析液态芯片技术-呼吸道病毒检测试剂盒（xTAG RVP）,应用于多种常见呼吸道病毒检测的优势和缺点,为更好地、有针对性地选择合适技术进行临床实验诊断或公共卫生应急检测提供依据.方法 使用VIDRL的呼吸道病毒多重PCR检测方法和Luminex公司xTAG RVP试剂盒对198份临床流感样症状患者的咽拭子标本进行常见呼吸道病毒的核酸检测.结果 198份临床标本经VIDRL多重PCR方法和xTAG RVP方法检测,阳性率分别为38.89％和45.45％,符合率为72.22％.单一病毒的符合率为87.88％～100％.结论 xTAG RVP方法与VIDRL多重PCR方法相比,两者在常见呼吸道病毒检测中的特异性和敏感性相近,xTAG RVP方法具有明显的快速和高通量的优势.

液态生物芯片技术及其应用

目前,在核酸和蛋白质研究领域出现了一种全新的、称之为悬浮式点阵(suspension array)的检测手段和技术,该技术在很大程度上依赖最近在光电转换和数字信号处理的进步,通过一束激光识别高分子(如聚苯乙烯)微球所产生的特异性荧光,另一束激光识别微球表面发生生物学反应后所产生的荧光信号,荧光编码不同的微球来实现检测指标的分类,进而实现高通量生物样品的分析;而通过生物学反应所产生的荧光信号可以实现分析的特异性.目前,这种基于荧光编码微球的高通量分析技术可提供快速、敏感、对一个样品进行至多可达100个分析指标的检测.分析荧光微球的速度最高可达5000个/秒.应用时,把对应不同检测物的乳胶颗粒混合后再加入微量样品,在悬液中与微球进行特异性结合.结合的结果可以在瞬间经激光判定后由电脑数据信息的形式记录下来.因为分子杂交是在悬浮溶液中进行,检测速度快,所以又有"液态生物芯片"之称.

液态悬浮芯片技术在卵巢恶性肿瘤诊断中应用价值研究进展

卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,对卵巢癌的早期诊断是提高生存率和生活质量的关键。目前发现包括糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)等数十种卵巢癌血清肿瘤标志物用于卵巢癌的诊断,传统的血清检测卵巢癌标志物的方法,如放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、电化学发光法(ECLIA)等,难以克服灵敏度和特异度不高、操作步骤繁琐、工作量大、样本使用量大、容易出现误差等缺点。液态悬浮芯片检测技术是基于流式细胞仪发展起来的新技术,其有机整合了激光分析、流式细胞技术、荧光编码微球及信号处理等多种技术。其以聚苯乙烯微球为反应界面,利用特异性探针分子包被后即可俘获一些小分子物质,通过检测微球的"放大"作用对小分子物质进行检测,具有高通量、高灵敏度、高特异度等优点。目前液态悬浮芯片用于卵巢癌血清标志物的检测主要是联合检测多个指标,现就液态悬浮芯片技术在卵巢癌诊断中应用价值加以综述。

Th17细胞因子在原发性肝癌患者血清中的表达及其诊断价值

目的:探讨Th17细胞因子在原发性肝癌(HCC)患者血清中的表达及其诊断价值。方法:通过借助高通量液态芯片技术检测78例HCC患者(研究组)及78例健康体检者(对照组)血清中Th17细胞分泌的14种细胞因子的表达水平,并分析其在肝癌诊断中的价值。结果:与对照组比较,研究组白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10、IL-17A和IL-25表达水平升高,IL-4、IL-22和IL-33表达水平降低,差异均具有统计学意义(均P<0.001);这8种细胞因子用于诊断HCC的灵敏度和特异度均大于80%,曲线下面积(AUC)均大于0.7,具有临床诊断意义。结论:血清中8种Th17分化相关细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-25、IL-4、IL-22和IL-33的检测有助于提高HCC的诊断。

山东地区生猪和家禽屠宰环节沙门菌血清型分布

目的了解山东地区生猪和家禽屠宰环节沙门菌血清型分布,为进一步开展动物源性产品风险评估提供数据。方法 2014年9-12月从山东省部分屠宰场采集分离的335株沙门菌,应用液态悬浮芯片技术对沙门菌菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和附加靶蛋白（AT）的基因进行检测,然后运用Salmonella serotyping assay软件分析鉴定血清型。结果 335株沙门菌中299株共分为29个血清型,另有36株未分型,优势血清型主要为德尔卑沙门菌（S.Derby,24.8%,83/335、）和肠炎沙门菌（S.enteritidis,15.2%,51/335）。德尔卑沙门菌、汤卜逊沙门菌（S.Thompson）和阿贡纳沙门菌（S.Agona）在生猪和家禽屠宰场中都有分布;生猪屠宰场以德尔卑沙门菌（39.8%,64/161）为主,其次为鼠伤寒沙门菌（S.typhimurium,19.3%,31/161）和汤卜逊沙门菌（13.7%,22/161）;家禽屠宰场中以肠炎沙门菌（28.7%,50/174）、印第安纳沙门菌（S.Indiana,12.1%,21/174）和德尔卑沙门菌（10.9%,19/174）为主。另外,不同地区屠宰场的沙门菌血清型呈差异分布,生猪屠宰场中除鲁中部外,其他地区主要血清型为德尔卑沙门菌;家禽屠宰场中,鲁东和鲁西地区主要是肠炎沙门菌,鲁东北地区以德尔卑沙门菌为主;鲁中部地区分离株以汤卜逊沙门菌为主。结论山东省屠宰场中的沙门菌污染比较严重,且有多种血清型,需加强屠宰环节的致病菌监控,降低动物产品在屠宰环节受沙门菌污染的风险。