猴头菌产酚类物质液态培养条件优化及对乳酸菌生长的影响

目的:用猴头菌纯菌株进行液态菌丝培养,优化培养基以提高猴头菌丝体酚类提取物的含量,分析猴头菌丝体酚类提取物的组成,并研究猴头菌丝体酚类提取物对乳酸菌的影响。方法:采用正交试验设计,研究对液态菌丝中总酚含量的影响,并用HPD-826大孔吸附树脂对其进行纯化,再以液质联用(High performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS)检测分析其组成。最后,将纯化物添加到乳酸菌培养基中,检测其对乳酸菌活菌数与产酸能力的影响。结果:在碳源马铃薯14%、氮源蛋白胨2%、无机盐MgSO40.3%时,猴头菌丝体总酚含量达到0.783 mg/g;从猴头菌丝体酚类提取物中鉴定出16个单体酚,占比88.27%,主要单体酚为没食子酸-O-葡萄糖苷、对香豆酸-O-没食子酰葡萄糖苷、阿魏酸、儿茶素苄硫醚、没食子酸和咖啡酸。在干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、肠膜串珠菌(Streptococcus intestinalis)的MRS培养基中加入猴头菌丝体酚类提取溶液,可以使3种乳酸菌活菌数均增加。结论:猴头菌丝体酚类提取物对乳酸菌的生长具有促生作用,为功能食品提供了新资源原料。

猴头菌子实体与液态发酵菌丝体活性成分差异及其在改善胃部疾病中的应用进展

猴头菌是传统的食药两用菌,具有猴头菌多糖、猴头菌素、猴头菌酮、麦角甾醇等多种活性成分,对胃炎、胃溃疡、胃癌等胃部疾病具有有益调节作用。猴头菌有子实体和菌丝体两种形态,菌丝体又分为固态发酵菌丝体与液态发酵菌丝体。本文主要对比阐述了猴头菌子实体与液态发酵菌丝体活性成分差异以及它们在改善胃部疾病中相关研究成果,以期为猴头菌液态发酵菌丝体规模化、工业化、自动化生产,以及功能食品和食用菌基天然药物的开发提供依据和参考。

野生牛肝菌纯种分离及液态培养促三萜类物质合成的诱导剂优化研究

目的:为获得牛肝菌人工纯菌株,提高液态培养菌丝及产三萜类物质的能力。方法:以云南鲜野生牛肝菌子实体为研究对象,采用组织分离法进行母体纯菌株分离并鉴定;以金属离子Ca^(2+)、亚油酸及香菇水提物作为诱导剂,研究其对液态菌丝体中三萜类物质含量的影响。结果:经多次分离纯化获得1株纯菌种NG-3,经rDNA-ITS分子生物学鉴定,NG-3为暗褐网柄牛肝菌(Phlebopus portentosus);对NG-3菌丝体进行SEM观察,在培养8~16 d时,出现具有结实能力的锁状联合形态菌丝。对3种诱导剂进行了响应面法优化,得到的结果为Ca^(2+)浓度12 mmol/L、亚油酸量4%、香菇水提物浓度150 mg/100 mL,此时三萜含量为6.77 mg/g,比未加诱导剂三萜含量提高了76.00%。结论:3种诱导剂复合使用能够促进三萜类物质合成,提高其含量,为解决野生资源不足、实现牛肝菌功能产品产业化提供技术参数。

液态发酵桑黄菌丝体抗A型流感(H1N1)病毒之效用评估

本研究旨在利用细胞试验评估液态发酵桑黄(Sanghuangporus sanghuang)菌丝体萃取物之抗A型流感病毒(H1N1)的能力,并进而分析活性所在之分层。实验使用MTS法评估桑黄菌丝体萃取物分别在预防、共培养以及治疗三种试验中减轻病毒对于宿主细胞的毒杀性的效果。结果显示酒萃物优于水萃物,再将酒萃物进行层析分离,共获得四种分层,分别为水层(PlH2O)、1-丁醇层(PlBtOH)、二氯甲烷层(PlDCM)以及己烷层(PlHex)。其中,以PlBtOH、PlDCM两组在预防试验、共培养试验以及治疗试验中,皆可见显著提升细胞存活率之效果(p 【0.05)。对比四分层的UPLC图谱后发现,PlBtOH及PlDCM内皆含有较高的hispidin,PlBtOH另含有hypholomine B (HB),抗病毒试验中则以PlBtOH最强,PlDCM次之,因此推估液态发酵桑黄菌丝体之抗H1N1流感病毒功效可能来自于hispidin以及HB。

液态发酵虎乳灵芝菌丝体抗A型流感(H1N1)病毒之效用评估

本研究以MDCK犬肾上皮感染H1N1流感病毒模式,评估液态发酵虎乳灵芝(Lignosus rhinocerus)菌丝体萃取物之抗A型流感病毒(H1N1)能力,其中使用MTS法测定病毒或萃取物对宿主细胞之毒杀性,再依药物与病毒作用时间点之不同,分别设定为萃取物预处理、共处理以及后处理三组。结果显示酒萃物之保护效果在共处理组明显优于水萃物,因此将同一批次之虎乳灵芝菌丝体酒萃物进行层析纯化,共获得四种分层,分别为水层(Lr H2O)、正丁醇层(LrBtOH)、乙酸乙酯层(Lr EA)以及正己烷层(Lr Hex)。其中,以Lr H2O、Lr Hex两组在共处理试验(分别为p 【0.01, p 【0.001)以及后处理试验(分别为p 【0.01, p 【0.01)中皆可见显著提升细胞存活率之效果。因此两种成分的极性差异悬殊,故推估液态发酵虎乳灵芝菌丝体的酒萃物中可能具有两种抗H1N1流感病毒之功效成分。

榛蘑与菌丝体中蜜环菌素的超声波辅助提取条件优化及其提取物中化合物分析

目的:为分析榛蘑与菌丝体中化合物差异,本研究以东北野生榛蘑子实体和液态菌丝体为研究对象,探究蜜环菌素的最佳提取工艺条件,并对提取物中化合物进行分析。方法:以提取物得率和蜜环菌素含量为指标,采用超声波细胞破碎辅助石油醚进行萃取,通过单因素实验和正交试验对提取工艺参数进行优化;采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)技术,对液态菌丝体和榛蘑子实体中化合物进行分析和鉴定。结果:确定最佳提取工艺条件为料液比1:20 g/mL,超声波功率300 W,超声时间20 min,溶剂回流时间50 min,在该条件下液态菌丝体提取物得率为26.8%,蜜环菌素含量为0.74 mg/g;液态菌丝体和榛蘑子实体中化合物分别为305和592个。解析出16种蜜环菌素类和5种疑似蜜环菌素碎片物质,其中菌丝体中含有15种蜜环菌素和3种碎片,总含量分别为2.551和0.588μg/mL;子实体中含有7种蜜环菌素和4种碎片,总含量分别为2.413和2.124μg/mL。两者同有组分有6种蜜环菌素和2种碎片;液态菌丝体独有9种蜜环菌素和1种碎片为:10-dehydroxymelleoloede、蜜环菌辛素、Arnamiol、蜜环菌壬素、A52a、4-dehydroxyarmillarin、蜜环菌丙素、(4R,5S,7R,9S,13R)-2’,5-epoxy-4-dehydroxyarmillarin、 4’-demethoxyarmillaribin以及碎片C;榛蘑子实体独有1种蜜环菌素和2种碎片为:Melledonal以及碎片D和E。结论:液态菌丝体蜜环菌素类化合物多于子实体中,为开发辅助功能食品及药物提供参考。

猪苓菌丝体发酵条件的优化

以菌丝体干重为评价指标,研究不同发酵条件对猪苓菌丝体干重的影响。试验采用了液体摇瓶培养的方法,在不同的温度、p H、装液量和培养时间的条件下,测定猪苓菌丝体干重的,确定各单因素条件下猪苓菌丝体的最佳发酵条件,再采用L9(34)正交试验设计优化菌丝体发酵条件。结果表明,当温度为25℃、装液量为100 m L/250 m L、p H为5.5、培养时间11 d时,为菌丝体最优发酵条件,进一步在此条件下进行验证性试验得菌丝体干重为1.023 g/100 m L,说明通过优化发酵条件,可以有效提高猪苓菌丝体干重量。