成年大鼠心室肌细胞的超低温液氮保存分离法

介绍运用液氮冻存的大鼠心室肌来分离心室肌细胞的具体方法,并初步分析了该方法的机理、科学性、实用性。认为该方法具有无需特殊昂贵设备、简单易行、消耗低廉、耗时短、适于大样本研究的特点,可望成为一种基础的实验方法。

条斑紫菜果孢子的液氮保存

随着生物工程学的发展,在超低温下(-196℃)保存生命有机体变得越来越重要。在超低温下生命活动几乎停止,变异的频率降到很低的程度,可以提供稳定的种质。超低温保存生物体不需大量人力和物力,也不需要巨大的空间,是种质保存的一种好形式。Finkle,B.J.等报道,到1985年止,至少有40多种高等植物的组织、器官或细胞培养物在-196℃冷冻保存而不失去活力。

程控降温后液氮保存对自体外周血造血干细胞含量和活性的影响

目的 :观察程控降温后液氮保存对自体外周血干细胞含量和活性的影响。方法 :1 3例接受APBSCT患者分离的造血干细胞利用程控降温仪进行冷冻 ,然后置液氮液相内 ( -1 96℃ )保存 ,检测患者冻存前后的有核细胞数 ,CFU -GM ,CD3 4+细胞。结果 :冻存前后CFU -GM ,有核细胞数 ,CD3 4+细胞统计学之间无显著性差异。结论 :自体外周血干细胞体外冷冻处理和保存是有效和适当的。

栉孔扇贝胚胎超低温液氮保存

选用两种低温保护剂配方，Ａ；１０％甘油＋４％葡萄糖；Ｂ：１５％ＤＭＳＯ（二甲 基亚铜）＋４％葡萄糖＋２％柠檬酸盐，利用微机控制生物降温仪，对栉孔扇贝胚胎 进行液氮低温保存。以１℃／ｍｉｎ由室温降温至－２０℃，接着以２０℃／ｍｉｎ降温至－ ８０℃，然后样品直接入液氮保存（－１９６℃），１周后，经４５℃水浴解冻，栉孔扇贝胚 胎（发育 ６ｄ）的存活率达 ６５． １％（Ａ配方）和 ５６． ６％（Ｂ配方）；而采用６℃／ｍｉｎ降温 至－２０℃，并以 ２０℃／ｍｉｎ降温至－８０℃，直接入液氮，胚胎解冻后的存活率分别为 ３９．０％（Ａ配方）和２７．９％（Ｂ配方）。选用发育２４ｈ的栉孔扇贝胚胎进行液氮保存 实验，解冻后，胚胎基本死亡。

恙虫病立克次体的液氮保存

用恙虫病立克次体感染小鼠使其产生腹水，取腹水原液与部分提纯的恙虫病立克次体悬液加或不加二甲基亚砜、采用四级或二级降温方法作液氮保存，并分别于保存１、３、６和１２个月后取出作形态观察及感染小鼠能力测定。结果证明恙虫病立克次体经液氮保存１年后仍具有对小鼠的感染能力。其中以腹水原液，加二甲基亚砜，采用二级降温法作液氮保存效果较好。采用液氮保存恙虫病立克次体具有节时省物、可靠程度高的优点，为对恙虫病立克次体的生物特性和恙虫病的预防。

无细胞百日咳攻击菌的制备及液氮保存方法分析

为了制备无细胞百日咳效价测定用攻击菌并用液氮进行保存,对此方法进行评价。采用原代攻击菌复苏传代后测定细菌浓度,并用蛋白胨水稀释为27亿个菌/m l,分装冻存管中。放入液氮罐内,并对液氮保存的攻击菌进行相应的检测,用统计软件计算。结果显示,此方法制备的攻击菌与传统的攻击菌无显著性差异,冻后虽攻击菌的毒力有所下降,但都在100-1000/MLD的正常范围内,且冻后0、3、6、9、12月无显著性差异。同批支间差异小,CV<5%。通过此方法制备的攻击菌稳定性好,试验结果符合《中华人民共和国药典》要求,可用于无细胞百日咳的效价测定。

无细胞百日咳疫苗效价检定用攻击菌液氮保存的稳定性

为了考察无细胞百日咳疫苗效价检定用攻击菌在液氮中保存的稳定性,对液氮保存1~7年的4~9代百日咳攻击菌随机抽取7~11批次样品,采用LD50检测并经统计学处理,分析其样品的毒力变化。试验结果显示,4~9代的百日咳攻击菌液氮保存5年,毒力仍能达到《中华人民共和国药典》三部（2005版）的要求;保存6年和7年,4~7代的百日咳攻击菌毒力仍符合上述要求,8、9代的攻击菌毒力的合格率分别为84%和40%。试验证实,无细胞百日咳效价检定用攻击菌液氮保存5年具有良好的稳定性,可用于无细胞百日咳疫苗的效价检定。

液氮保存后培养茎尖的植株再生

营养繁殖植物的遗传资源目前仍以田间保存为主,这就需要大量土地及日常管理。同时,因受气象灾害、病虫为害等的影响而存在着丧失宝贵遗传资源的危险性。另一方面,随着近年来植物培养技术的进步,木本植物的茎尖培养也已成为可能,从而设计了利用培养技术的保存方法,即在低温或超低温条件下长期保存植物器官、组织的一部分(营养体),应用培养技术再生个体。关于桑树试管保存的研究,据岡、八锹(1988)报道,茎尖在5℃低温及暗条件下经半年保存仍能100％的再生幼苗。在超低温保存方面,1988年Yakuwa和Oka报道了在自然条件下获得抗寒性的冬芽连同枝条切取进行冷冻预处理,于液氮冷冻保存。

不同复温方法对液氮保存人同种瓣活性影响的实验研究

寻找一种能最大程度保持液氮贮存人同种主动脉瓣活性的复温方法。方法同种主动脉瓣（ｎ＝３６）随机分为６组，Ⅰ组为新鲜同种主动脉瓣，Ⅱ～Ⅵ组经液氮保存３月后，分别采用①４２℃水浴复温（Ⅱ组），②（１．０±０．２）℃／ｍｉｎ（Ⅲ组），③（４．０±０．５）℃／ｍｉｎ（Ⅳ组），④（１０．０±２．０）℃／ｍｉｎ（Ⅴ组）；⑤（３０．０±４．５）℃／ｍｉｎ（Ⅵ组）。将同种主动脉瓣复温至４℃，对所有同种主动脉瓣进行台盼蓝染色活细胞计数、２４小时葡萄糖代谢率测定，氰化胸腺嘧啶脱氧核甙（３Ｈ－ＴｄＲ）参入、瓣膜组织培养。结果上述指标Ⅰ组显著优于其余各组（Ｐ＜０．０５），Ⅳ组优于Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ组（Ｐ＜０．０５）。组织培养Ⅰ组细胞生长优于其余各组，且早于各组３～４天。结论不同复温方法对同种主动脉瓣活性影响不同，以４℃／ｍｉｎ匀速复温法对同种主动脉瓣活性影响最轻。

液氮保存微小隐孢子虫卵囊对小鼠感染力的研究

目的观察两种不同保存方法对微小隐孢子虫卵囊感染小鼠能力的影响。方法用PBS稀释纯化的卵囊，加入二甲基亚砜（DMSO），置-40℃3h后，放入液氮中保存；或加入2．5％重铬酸钾中，4℃保存。3个月后取出，观察它们的脱囊率；分别感染用地塞米松免疫抑制后的BALB／c小鼠，计数卵囊排出量，计算平均每克粪便中的卵囊数目，同时记录两组小鼠的死亡时间。分别采用t检验和成组设计的两样本秩和检验进行统计学分析。结果液氮中保存3个月的卵囊能够感染免疫抑制的BALB／c小鼠，其脱囊率为7．2％-49．6％、卵囊排出量为（4．7～7．3）×10^5／g，接种后实验小鼠死亡时间为124～351h，与4℃保存的卵囊差别无统计学意义[8．3％-51．2％，（4．6～6．9）×10^5／g，132～348h，P均〉0．05）]。结论液氮中保存3个月的卵囊与4℃保存的卵囊对免疫抑制的小鼠具有同样的感染力，突破了微小隐孢子虫卵囊只能在4℃保存的传统观念，为隐孢子虫卵囊的长期保存提供了理论和实践依据。

液氮保存同种带支架人工瓣膜流体力学测试

目的 利用脉动流模拟实验装置测试液氮保存同种带支架瓣膜流体力学性能 ,同时与国产perfect牛心包人工瓣膜对比研究。 方法 采集同种瓣膜 ,缝制成 2 1# 、2 3# 、2 5 # 同种带支架主动脉和同种带支架肺动脉人工瓣膜 ,经液氮保存 ,使用国产脉动流实验装置测试瓣膜流体力学性能 ,采用ISO/FDA评估标准 ,分别测量各流量下的跨瓣压差、有效瓣口面积 (EOA)和回流比。并与相应型号国产 perfect牛心包人工瓣膜对比研究。结果 2 1# 、2 3# 、2 5 # 同种带支架主动脉和肺动脉瓣膜的跨瓣压差和回流百分比差异无显著性 ,但较 perfect瓣大。同种带支架主、肺动脉瓣膜的EOA差异无显著性 ,但较 perfect牛心包生物瓣膜的略小些。同种带支架瓣膜实际开口面积 (AOA)小于 perfect牛心包瓣 ,但有效瓣口面积 /实际开口面积比值无差别。结论 同种带支架主动脉和肺动脉人工瓣膜流体力学性能满意 ,同种带支架主动脉瓣膜与同种带支架肺动脉瓣膜流体力学性能无差别。

液氮保存牧草花粉生活力的研究

试验将无芒雀麦、塔落岩黄芪和偃麦草的新鲜花粉放进液氮罐内贮存１个月或３个月，将刚采收的和贮存后的花粉均用中性红和碘—碘化钾染色，确定其生活力。经数据分析，得出结论：（１）液氮可以保存牧草花粉粒生活力；

液氮保存的人主动脉瓣力学及形态结构的变化

液氮保存的人主动脉瓣力学及形态结构的变化董安平黄庆恒徐磊任沪平耿希刚我们对正常人新鲜主动脉瓣膜和液氮保存多个时间段的瓣膜力学和形态结构进行研究，探讨液氮保存对同种主动脉瓣的影响以及与保存时间的相关性，为临床应用同种瓣提供依据。一、材料和方法１．材料：...

液氮低温保存对大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞MHC抗原无影响

目的 探讨液氮低温保存对同种异体主动脉移植物抗原性的影响 .方法 采用细胞培养技术和流式细胞仪技术研究液氮低温保存对大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞主要组织相容性抗原 类 (MHC 类抗原 )表达的影响 .建立大鼠同种异体主动脉移植模型 ,采用免疫组织化学实验研究新鲜主动脉和低温保存的主动脉同种异体移植后 MHC 类抗原和 MHC 类抗原表达的区别 .结果 正常培养的大鼠主动脉平滑肌细和成纤维细胞 MHC 类抗原表达的阳性率分别为 (88.7± 4.3) %和 (84.8± 2 .0 ) % ;液氮低温保存的大鼠主动脉平滑肌和成纤维细胞在复苏后 MHC 类抗原表达的阳性率分别为 (89.4± 3.5 ) %和 (81.9± 2 .7) % .统计学分析表明大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞的 MHC I类抗原表达在液氮低温保存前后无显著性差别 .免疫组织化学实验研究表明新鲜主动脉和低温保存的主动脉同种异体移植后MHC 类抗原和 MHC 类抗原表达无显著的差异 .结论 液氮低温保存对大鼠主动脉平滑肌细胞和成纤维细胞

微生物液氮超低温保存研究进展

菌种保存是微生物研究中的一项基础工作。在-196℃下活细胞物质代谢和生长几乎完全停止,液氮超低温保存使微生物的长期稳定保存成为可能。作者就影响乳酸菌、酵母菌、微藻、原生动物液氮超低温保存存活率的因素进行了讨论。此外,作者还讨论了液氮超低温保存中还存在的一些问题。

液氮超低温保存放线菌条件研究

用6种保护剂对28株放线菌和小单孢菌进行液氮超低温保存。保存3年4个月其存活率均达100％。拮抗性检查结果表明，肉汤和龙眼蜜保护剂对小单孢菌，牛奶保护剂对放线菌保护效果显著，保存前后其拮抗性无明显变化。

伯氏疟原虫液氮低温保存不同处理方法的效果比较

疟原虫低温保存是疟疾研究的常用实验手段之一。目前在红内期疟原虫低温保存的常规方法中，一般用抗凝的感染血经离心弃血浆后，加等量的２４％二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）作保护剂。此方法虽然效果不错，但仍然不够简便，而且在进行体外培养时，还必须将ＤＭＳＯ洗去。为了简...