微生物液氮超低温保存研究进展

菌种保存是微生物研究中的一项基础工作。在-196℃下活细胞物质代谢和生长几乎完全停止,液氮超低温保存使微生物的长期稳定保存成为可能。作者就影响乳酸菌、酵母菌、微藻、原生动物液氮超低温保存存活率的因素进行了讨论。此外,作者还讨论了液氮超低温保存中还存在的一些问题。

液氮超低温保存放线菌条件研究

用6种保护剂对28株放线菌和小单孢菌进行液氮超低温保存。保存3年4个月其存活率均达100％。拮抗性检查结果表明，肉汤和龙眼蜜保护剂对小单孢菌，牛奶保护剂对放线菌保护效果显著，保存前后其拮抗性无明显变化。

酒酒球菌液氮超低温保存

【目地】为安全、长期的保藏酒酒球菌,本文研究了菌体生长时间、冷冻方法、解冻温度、菌密度以及保护剂等对酒酒球菌细胞冷冻存活率的影响,找到最优液氮超低温保存方法。【方法】采用平板计数法测定冷冻存活率。【结果】实验结果表明酒酒球菌的最佳保存方法为:首先在稳定期前期离心收集菌体;其次加入保护剂(20 g/L酵母浸提物,40V/V甘油,20 g/L蔗糖,30 g/L谷氨酸钠)稀释菌体,使菌密度为109CFU/mL;然后直接投入液氮冷冻;最后在37℃温水浴中迅速解冻。保存6个月后,其中21株酒酒球菌的冷冻存活率达到99%以上。【结论】初步研究表明酵母浸提物,甘油,蔗糖,谷氨酸钠复合保护剂对酒酒球菌的保护效果较好,液氮超低温保存可用于酒酒球菌的长期保存。

成年大鼠心室肌细胞的超低温液氮保存分离法

介绍运用液氮冻存的大鼠心室肌来分离心室肌细胞的具体方法,并初步分析了该方法的机理、科学性、实用性。认为该方法具有无需特殊昂贵设备、简单易行、消耗低廉、耗时短、适于大样本研究的特点,可望成为一种基础的实验方法。

九里香种子超低温保存研究

研究旨在探索适于九里香(Murraya exotica L.)种子的液氮超低温保存条件,为采用液氮超低温保存方法长期保存九里香种子提供依据。以九里香成熟种子为材料,采用快速干燥法获得不同含水量的种子,分别用玻璃化法、分步冷冻法和直接冷冻法对其进行液氮超低温保存,结合石蜡切片法观察种子显微性状,并测定种子生理生化活性指标。结果发现,种子含水量由30%降至7%,其对照组生活力由98%缓慢降至82%;经不同冷冻方法处理后其生活力随含水量的降低呈先降后升的趋势,在含水量7%时各冷冻组生活力均升至最高,且此时冻存前后生活力最接近;分步冷冻处理后的种子生活力普遍高于玻璃化冷冻和直接冷冻处理;含水量18%~30%时种子分步冷冻处理后切面颜色较其他组偏深,含水量30%的种子分步冷冻处理后部分细胞出现空腔或较严重的质壁分离,含水量7%的种子经不同冷冻处理后其活力和结构与对照组相比基本无变化;分步冷冻处理后种子丙二醛含量、蛋白质含量、过氧化氢酶活性、过氧化物酶活性下降,脱氢酶活性升高。九里香种子可用液氮超低温保存,采用含水量为7%的种子分步冷冻处理为佳。