推拿对失神经骨骼肌萎缩大鼠自噬相关因子Beclin-1、液泡分选蛋白34和微管相关蛋白轻链3的mRNA表达的影响

目的探讨推拿延缓失神经骨骼肌萎缩的相关机制。方法 77只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为假手术组(n=7)、模型组(n=35)和推拿组(n=35)。后两组通过暴露并切断胫神经的方法制备失神经骨骼肌萎缩大鼠模型。造模后第2天,推拿组术侧下肢进行推拿干预。分别在造模后0 d、7 d、14 d、21 d和28 d取材,测定术侧腓肠肌湿重比,HE染色测定腓肠肌肌纤维截面积和直径,逆转录实时定量聚合酶链反应检测术侧腓肠肌组织中自噬相关因子Beclin-1、液泡分选蛋白34 (Vps34)和微管相关蛋白轻链3 (LC3)的mRNA表达。结果三组0 d时,腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径,以及Beclin-1、Vps34和LC3的mRNA表达均无显著性差异(F <1.321, P> 0.05)。与假手术组比较,模型组和推拿组腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径在不同时间下降(P <0.05),推拿组肌湿重比(除21 d)均高于模型组(P <0.05),推拿组肌纤维截面积和直径(除21 d)均大于模型组(P <0.05)。与假手术组相比,模型组和推拿组术侧腓肠肌Beclin-1、 Vps34、 LC3mRNA表达在不同时间升高(P <0.05),推拿组各项mRNA表达(除14 d)均高于模型组(P <0.05)。组内比较,模型组和推拿组腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径随时间呈进行性下降趋势(P <0.05);模型组Beclin-1、Vps34 mRNA表达在21 d后呈上升趋势(P <0.05),LC3 mRNA表达在21 d升高(P <0.05);推拿组Beclin-1 mRNA表达呈先上升后下降的趋势(P <0.05),Vps34和LC3 mRNA表达(除14 d)呈先上升后下降趋势(P <0.05)。结论推拿可能通过上调自噬相关因子Beclin-1、Vps34和LC3的mRNA表达,促进细胞自噬的激活,清除损伤细胞器和蛋白质,为肌纤维再生提供一定的合成底物和能量,从而减轻失神经骨骼肌萎缩的程度。

自噬与肿瘤防治新策略

自噬是细胞清除并回收利用错误折叠的蛋白及受损细胞器而维持细胞稳态的分解代谢过程。这一过程与包括肿瘤在内的许多疾病有密切的关联,现已成为癌症研究的热点。自噬既具有肿瘤抑制功能,在化疗中又能保护肿瘤细胞。近年来,在自噬相关蛋白中,对自噬形成起到关键作用的液泡分选蛋白34(VPS34)受到了广泛关注,已和自噬一起成为肿瘤防治和抗肿瘤药物筛选靶标。最近,3个VPS34的特异性抑制剂PIK-Ⅲ,VPS34-IN1和SAR405相继面世,它们可能对自噬的抑制及肿瘤干预具有独特的影响。本文介绍了自噬在肿瘤中扮演的不同角色和VPS34在自噬中的功能调控,还讨论了以自噬及VPS34为靶标的抑制剂研究最新进展及其在肿瘤防治中的应用前景。

经皮穴位电刺激对行腹部手术老年大鼠的脑保护作用及机制

目的探讨经皮穴位电刺激(TEAS)对行腹部手术老年大鼠的脑保护作用及其可能的作用机制。方法取35只大鼠行腹腔探查术+脾切除术,将30只术后无行动障碍的大鼠随机分为手术组、TEAS组和西药组各10只;另取10只大鼠作为对照组,仅腹腔注射生理盐水。TEAS组选取特定穴位给予电刺激和生理盐水灌胃,西药组给予非特定穴位电刺激和石杉碱灌胃,手术组和对照组给予非特定穴位电刺激和生理盐水灌胃。末次治疗后12 h,利用Morris水迷宫实验检测各组大鼠的学习记忆能力,旷场实验检测大鼠的行为学改变;处死大鼠后取海马组织,苏木精-伊红染色观察海马组织病理学变化,TUNEL染色观察海马神经元凋亡率,透射电镜观察海马自噬情况,蛋白免疫印迹法检测海马组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPKα)、磷酸化AMPKα(p-AMPKα)、Beclin1、液泡分选蛋白34(Vps34)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达,比较各组上述指标的差异。结果与对照组比较,其他3组的逃避潜伏期延长,原平台象限停留时间缩短,穿越平台次数、水平运动得分、垂直运动得分减少,海马组织神经元细胞形态发生改变,神经元细胞凋亡率及自噬体均增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和海马组织p-AMPKα、Beclin1、Vps34的蛋白表达升高(均P<0.05);TEAS组和西药组以上指标均较手术组有所改善(均P<0.05),而TEAS组和西药组之间差异并无统计学意义(均P>0.05)。结论TEAS可改善行腹部手术的老年大鼠的认知功能障碍,减少神经元细胞凋亡和自噬,具有与常规西药相似的脑保护作用,其可能是通过抑制AMPK-Beclin1-Vps34通路发挥作用。

球形孢子丝菌vps34基因序列的获得及其在双相型表达差异的初探

目的获得球形孢子丝菌液泡分选蛋白34(vacuolar protein sorting 34,Vps34)编码基因全长序列,并探讨vps34基因在球形孢子丝菌(Sporothrix globosa)由菌丝相向酵母相转换中的作用。方法利用快速扩增cDNA末端技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE)方法分别扩增球形孢子丝菌vps34基因3′端和5′端序列,序列拼接后进行生物信息分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析vps34基因在菌丝相和酵母相的表达差异。结果球形孢子丝菌vps34基因全长共3 228bp,其中CDS区长度为3000bp,编码999个氨基酸,相对分子质量(Mr)为111.49×10^3,等电点为6.38,包含C2_PI3K_class_Ⅲ、PI3Ka_Ⅲ、PI3Kc_Ⅲ共3个结构域;qRT-PCR检测结果显示,24h时,球形孢子丝菌酵母相的vps34表达量高于菌丝相(P<0.05),48h时差异最大(P<0.01)。结论vps34基因参与了球形孢子丝菌双相型转换的过程,而球形孢子丝菌vps34基因全长的获得为进一步研究Vps34p的功能提供实验资料。