大鼠严重烧伤后心肌组织溶酶体液泡型腺苷三磷酸酶活性变化对心肌损害的影响及其机制

目的探讨大鼠严重烧伤后心肌组织溶酶体液泡型ATP（V－ATP）酶活性变化对心肌损害的影响及其机制。方法取12只SD大鼠心脏，采用超高速梯度密度离心法提取心肌组织溶酶体，蛋白质印迹法和透射电镜观察鉴定。将120只SD大鼠按随机数字表法分为单纯烧伤组、ATP组、正常对照组、巴佛洛霉素组，每组30只。单纯烧伤组和ATP组大鼠造成背部约40%TBSA Ⅲ度烫伤，单纯烧伤组大鼠伤后即刻腹腔注射乳酸林格液4 mL·%TBSA^－1·kg^－1，ATP组大鼠分别于伤前12 h、伤后即刻、伤后12 h腹腔注射ATP 0.4 mg/kg。正常对照组大鼠不行任何处理，巴佛洛霉素组与ATP组大鼠同时相点腹腔注射巴佛洛霉素A1 0.3 mg/kg。于伤后24 h，提取各组大鼠心肌组织溶酶体，采用酶偶联分析法检测V－ATP酶活性，蛋白质印迹法检测心肌自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）和P62的表达。取左心室动脉血检测心肌酶谱5项和心肌肌钙蛋白T（cTnT）的含量。对数据行单因素方差分析、t检验。结果（1）经鉴定，样品溶酶体相关膜蛋白1表达水平最高，溶酶体纯度高、结构完整。（2）伤后24 h，单纯烧伤组、ATP组、正常对照组、巴佛洛霉素组大鼠心肌组织溶酶体V－ATP酶活性分别为（2.03±0.67）、（3.01±0.58）、（4.29±0.26）、（1.83±0.52）μmol·mg－1·h－1。其中单纯烧伤组大鼠心肌组织溶酶体V－ATP酶活性明显低于ATP组和正常对照组（t值分别为3.14和8.87，P值均小于0.01），正常对照组大鼠心肌组织溶酶体V－ATP酶活性明显高于巴佛洛霉素组（t＝11.87，P〈0.01）。伤后24 h，单纯烧伤组大鼠心肌LC3和P62的表达显著高于ATP组和正常对照组（t值为3.73～5.88，P值均小于0.01），正常对照组大鼠心肌LC3和P62的表达明显低于巴佛洛霉素组（t值分别为2.64和3.07，P〈0.05或P〈0.01）。伤后24 h，单纯烧伤组大鼠心肌酶谱5项和cTnT含量明显高于ATP组和正常对照组（t值为3.24～16.72，P值均小于0.01），正常对照组大鼠心肌酶谱5项和cTnT含量明显低于巴佛洛霉素组（t值为2.39～10.70，P值均小于0.01）。结论大鼠严重烧伤后心肌组织溶酶体V－ATP酶活性下降，可通过抑制大鼠心肌自噬流引起心肌损害。